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DOI: 10.3791/51340-v
Sang-Hyuck Park1, Rebecca Garlock Ong2, Chuansheng Mei3, Mariam Sticklen4
1The School of Plant Sciences,University of Arizona, 2Department of Chemical Engineering and Materials Science, DOE Great Lakes Bioenergy Research Center,Michigan State University, 3The Institute for Sustainable and Renewable Resources,The Institute for Advanced Learning and Research, 4Department of Plant, Soil and Microbial Sciences,Michigan State University
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
이중 가닥 RNA 간섭 (dsRNAi) 기술은 옥수수 신나 코엔자임에게 낮은 식물 리그닌 함량에 대한 환원 (ZmCCR1) 유전자를 하향 조절하기 위해 사용된다. 세포벽에서 리그닌 다운 규제는 현미경 분석에 의해 시각과 Klason 방법에 의해 정량화된다. 헤미셀룰로오스 및 결정 셀룰로오스의 조성 변화를 분석됩니다.
이 절차의 전반적인 목표는 RNAi를 통해 미로의 리그닌 함량을 하향 조절하여 바이오 에탄올 생산을 위한 소화 가능한 바이오매스의 생산을 촉진하고 Clayson 리그닌 측정 프로토콜을 사용하여 리그닌 함량을 측정하는 것입니다. 이는 먼저 미로 CCR one RNAi 플라스미드를 구축하여 리그닌 생합성 관련 유전자 syn oil COA 환원효소를 하향 조절함으로써 달성됩니다. 다음으로, 옥수수 high two 배아 calli를 ZM CCR one RNAi 구조체로 형질전환하고 입자 충격을 사용하여 동형접합 형질전환 라인을 생성합니다.
그런 다음 조직학적 분석과 형질전환 미로의 1세대, 2세대 및 3세대에서 수행된 주사 전자 현미경을 통해 표현형 변화를 관찰합니다. 마지막으로, 형질전환 미로 라인의 산 불용성 또는 클라손 리그닌을 측정하고 비형질전환 미로 식물의 리그닌 함량과 비교합니다. 궁극적으로, 입자 충격을 사용하여 야생형 식물에 비해 CCR one 형질전환 미로 식물에서 10% 리그닌 감소를 보여주는 결과가 얻어지며, 클레이슨 리그닌 측정에 의해 결정된 바와 같이 이 방법의 최종 시각적 시연은 일부 단계가 배우기 어렵고 이러한 단계에는 배아 옥수수 준비가 포함되기 때문에 중요합니다. 플라스미드 DNA와 입자에 탱크의 멸균 상태 코팅과 Cali, Dr.Hossein Aladin, Dr.Gli Brew Han 및 학부생의 입자 폭격.
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