Name: 생체 내 숙련 된 운동 행동의 무선 광유전학 제어 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-11-22T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 52 s
Description: 학습하세요 무선 광유전학과 고속 영상 촬영을 활용한 생쥐의 숙련된 운동 행동 분석 방법을. 이 기술은 D1 도파민 신경원 조작을 통해 미세 운동 제어의 신경 회로를 규명하고 운동 장애 연구에 활용됩니다.

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이 작업은 UNAM-PAPIIT 프로젝트 IA203520에서 지원했습니다. IFC 동물 시설에서 마우스 식민지 유지 보수에 도움을 준 것과 IT 지원을 위한 전산 장치, 특히 Francisco Perez-Eugenio에 감사드립니다.

동물 사용과 관련된 절차는 지역 및 국가 지침에 따라 수행되었으며 해당 기관 동물 관리 및 사용위원회 (세포 생리학 연구소 IACUC 프로토콜 VLH151-19)의 승인을 받았습니다. Drd1-Cre 형질전환 수컷 마우스는C57BL/6 배경으로 출생 후 27, 35-40일째에 현재의 프로토콜에 사용되었다. 마우스는 다음의 조건 하에서 유지되었다: 온도 22±1°C; 습도 55%; 가벼운 일정 12/12 시간 오후 7시에 불을 끄고 출생 후 21 일에 젖을 떼었습니다. 젖을 뗀 새끼들은 2-5 명의 동성 그룹에 수용되었습니다. 동물들은 마이크로 배리어 탑을 가진 정적 하우징에 수용되었다. 침구는 멸균 아스펜 부스러기로 구성되었습니다. 설치류 펠릿 및 RO-정제수는 언급되는 경우를 제외하고 Ad libitum을 제공하였다.
1. 수술 절차
<ol><li>관심 구조물의 등쪽 복부 좌표에 따라 원하는 길이로 LED 캐뉼라를 준비합니다(두개골의 두께를 고려하면 0.5mm 더 길고, 등쪽 선조체의 경우 3.5mm).<ol>
<li>유리 섬유를 최종 원하는 크기보다 긴 길이로 자르고 거친 사포로 섬유 팁을 목표 길이로 갈아서 마지막으로 미세한 사포로 섬유 끝을 닦으십시오. 참고: LED 캐뉼라는 적외선 수신기에 부착된 직경 250μm의 유리 광섬유 입니다(재료 표 참조).</li>
	</ol></li>
	<li>수평 풀러가있는 나노 인젝터 용 유리 피펫 (1.14mm 외경, 0.53mm 내경 및 길이 3.5 )을 당겨 나중에 보관하십시오. 풀러를 하나의 루프에 프로그래밍하여 긴 점진적 경사 테이퍼 (4-5 mm)가있는 15-20 μm 팁 직경을 얻습니다.</li>
	<li>입체 택시 장치, 후드, 마이크로 인젝터 ( 재료 표 참조) 및 주변 표면을 70 % 에탄올로 철저히 소독하여 수술 부위를 준비하십시오. 참고: 마우스 입체 택시 장치는 Adeno Associated Virus (AAV)를 정확하게 주입하고 LED 캐뉼라를 관심 영역에 배치하는 데 필수적입니다.</li>
	<li>깨끗한 실험실 코트 또는 일회용 수술 가운, 멸균 장갑, 얼굴 마스크 및 일회용 헤드 캡을 포함하여 절차에 적합한 개인 보호 장비를 착용하십시오.</li>
	<li>멸균 수술 도구, 면화 팁, 용액, 마이크로 피펫, 피펫 팁, 모세 혈관, 미네랄 오일로 마이크로 채우기 및 마커와 같은 수술 영역 가까이에 필요한 장비를 배치하십시오.</li>
	<li>미세 주사를위한 피펫을 미네랄 오일로 채우고 마이크로 인젝터에 넣으십시오. 마이크로 인젝터가 미네랄 오일을 배출하여 올바르게 작동하는지 확인하십시오. 참고: 수술 중 사용되는 모든 기구는 오토클레이브 및 멸균되어야 합니다. 무균 기술을 사용해야합니다.</li>
	<li>기체 이소플루란 4-5 %로 동물을 마취시켜 마취를 유도하고 수술 기간 동안 1.2 %를 0.5-1 L / min 순수 산소로 마취하십시오. 수술은 동물이 깊은 마취 지점에 도달 한 후에 만 시작되며, 약간의 꼬집음 후에 발 철수가 없음으로 평가됩니다.<ol>
<li>동물의 호흡률과 온도를 지속적으로 모니터링합니다. 34°C로 설정된 가열 패드에 의해 체온을 유지한다.</li>
	</ol></li>
	<li>안과 연고를 바르십시오. 트리머와 제모 크림으로 두피에서 머리카락을 제거하십시오. 8% 포비돈-요오드( 재료 표 참조)와 70% 에탄올을 각각 세 번 번갈아 가며 면봉으로 두피를 닦으십시오.</li>
	<li>마우스를 입체 택시 장치에 넣고 머리를 고정하여 두개골이 평탄한 측방 및 전후 축에 수평을 이루도록하십시오.</li>
	<li>시상 축을 따라 눈 높이에서 두피를 통해 메스로 1cm 절개를하십시오. 두개골을 노출시키고 면봉으로 골막을 닦기 위해 피부를 수축시킵니다.</li>
	<li>식염수와 멸균 면봉으로 두개골 표면을 청소하십시오. 멸균 흡수성 안구 창(표 참조) 또는 유사한 멸균 흡수 성 물질을 사용하여 표면의 출혈을 해결하십시오.</li>
	<li>면봉에 2.5 % 과산화수소를 떨어 뜨리고 두개골 봉합사를 볼 수있게하고 더 나은 참조를 갖기 위해 몇 초 동안 작용하게하십시오. 몇 초 후, 깨끗한 면봉으로 철저히 청소하십시오.</li>
	<li>유리 피펫 (최종 팁 직경 15 μm)을 사용하여 브레그마와 람다를 찾아 두개골이 전후 축에 수평을 이루고 있는지 확인하십시오. 참고 : 유리 피펫의 끝을 보려면 스테레오스코픽 현미경 또는 USB 현미경을 사용하는 것이 좋습니다. 필요한 경우 두개골을 평평하게하기 위해 입 홀더의 높이를 조정하십시오.</li>
	<li>모세관을 선택된 전후방(AP) 및 내측방(ML) 좌표(등측 선조체 AP 1.2 mm, ML 2.28 mm) 쪽으로 이동시킨다. 멸균 마커를 사용하여 선택한 좌표 위의 두피에 기준점을 페인트합니다.</li>
	<li>기준점에서, 작은 둥근 치과 드릴 비트로 멸균 회전 도구 또는 치과 드릴을 사용하여 두개골에 부드러운 압력을 가하여 ~ 1mm 직경의 두개골 절제술을 저속으로 수행합니다 ( 재료 표 참조).</li>
	<li>모세관을 300-400 nL의 Cre-의존성 아데노-연관 바이러스 (AAV)와 함께 로딩하여 채널로돕신 또는 AAV를 발현하는 AAV1-dflox-hChR-2-mCherry와 같은 리포터 단백질 (예를 들어, mCherry)만을 관심 영역에서 대조군으로 발현시킨다 ( 표 참조). 팁이 막히지 않았는지 확인한 다음 원하는 등쪽 - 복부 (DV) 좌표 (등쪽 선조체 DV -3.35mm)로 뇌에 유리 피펫을 도입하십시오.<ol>
<li>자동 인젝터를 사용하여 200nL를 23nL/s의 속도로 주입합니다. 주입을 마친 후 10 분 동안 기다렸다가 유출을 피하기 위해 유리 피펫을 천천히 철회하십시오. 참고 : 30G 바늘을 사용하여 적절한 마이크로 인젝터로 주입 할 수 있습니다.</li>
	</ol></li>
	<li>면봉으로 잔류 물을 청소하고 건조하십시오.</li>
	<li>멸균 유리 LED 캐뉼라를 입체 택시 암에 부착하고 bregma를 참조로 사용하여 좌표를 보정하십시오. 캐뉼라를 매우 천천히 (300 μm / 분) 삽입하여 조직 손상을 피하고 주사 부위 위에 100 μm 올려 놓습니다.</li>
	<li>LED 캐뉼라가 제자리에 놓이면 두개골 절제술의 가장자리에 조직 접착제의 방울 (100 μL)을 추가하십시오.</li>
	<li>섬유를 두개골에 고정시키는 제조업체의 지시에 따라 치과 시멘트 혼합물 ( 재료 표 참조)을 준비하십시오. 참고 : 간단히 말해서, 시멘트가 놓이기 전에 더 많은 작업 시간을 가지기 위해 차가운 도자기 접시를 사용하십시오. 도자기 접시에 수지 투명 분말 2 스쿱을 넣고 빠른베이스 4 방울과 촉매 1 방울을 넣은 다음 잘 섞으십시오. 분말 / 액체 비율은 더 얇거나 두꺼운 점도가 필요한 경우 조정할 수 있습니다.</li>
	<li>멸균 브러시를 사용하여 캐뉼라 커넥터 주위에 치과 시멘트 혼합물을 조금씩 바르고 두개골이 덮히고 커넥터가 두개골에 단단히 부착 될 때까지 층을 구축하여 핀을 완전히 자유롭게 만듭니다. 마우스의 피부에 치과 시멘트가 생기지 않도록하십시오.</li>
	<li>완전히 말리십시오.</li>
	<li>조직 접착제를 사용하여 임플란트 주위의 피부를 닫습니다 ( 재료 표 참조).</li>
	<li>마우스를 33 ° C의 가열 패드 위에 회복 케이지에 놓으십시오. 다음과 같은 통증 / 불편 함의 징후 중 하나 이상이 있는지 모니터링하십시오 : 1) 운동 활동의 헐렁 거림, 부족 또는 감소, 2) 보관되지 않은 더러운 코트에 반사 된 손질 실패, 3) 과도한 핥기 또는 긁힘, 절개 부위의 발적, 4) 공격적인 행동, 5) 식욕 부진 또는 탈수, 6) 둥지 형성 부족. 참고: 임플란트 분리를 피하기 위해 모든 시술 중에 마우스를 개별적으로 감금하십시오. 캐뉼라가 분리 된 경우, 150 mg / kg의 펜토바르비탈 나트륨을 주입하여 안락사를 수행 한 다음 깊은 마취에 도달 한 후 감금하십시오.</li>
	<li>진통제를 제공하기 위해 수술 후 사흘 동안 피하 (SC) 멜록시캄 1 mg / kg을 하루에 한 번 주사하십시오.</li>
	<li>추가 절차 전에 완전한 회복을 위해 적어도 7 일, opsin 발현을 위해 14 일을 기다리십시오. 참고 : 사흘 동안 12 시간마다 수술 후 후속 조치를 수행 한 다음 실험이 끝날 때까지 안락사 일까지 매일 동물을 확인하십시오.</li>
</ol>
2. 도달 범위 파악 교육
<ol><li>수술 후 7일째에, 식량 부족 프로토콜28을 시작한다. 생쥐를 사흘 연속 계량하여 평균 Ad libitum 체중을 결정합니다. 그런 다음 동물이 체중의 약 90 %와 85 % 이상을 유지하기에 충분한 영양소를 섭취 할 수 있도록 음식 제한을 계획하십시오. 참고 : 이것은 매일 2.5-3g의 음식을 제공함으로써 달성됩니다. 동물의 체중을 매일 모니터링하고 코트 및 눈 모양과 같은 동물의 행동과 외모를 관찰하는 전반적인 웰빙에 대한 점수를 매기십시오. 참조29의 신체 상태 채점 시스템을 사용하십시오.</li>
	<li>사전 훈련, 훈련 및 테스트 기간 동안 표준 식품 펠릿 외에 매일 20 펠릿 (먼지가없는 초콜릿 맛의 펠렛 20mg)을 각 마우스에 제공하십시오 ( 재료 표 참조) (작업 중 또는 이후에 먹음).</li>
	<li>습관화 사흘 전에 0.4 g / animal / day 20 mg의 먼지가없는 초콜릿 맛의 펠렛을 집 케이지에 뿌려서 쥐가 도달 할 수있는 작업 중에 보상으로 사용되는 펠렛에 익숙해 지도록하십시오.</li>
	<li>생쥐를 시험 챔버에 10분 동안 배치한 후 사전 훈련하기 전에 챔버 바닥에 흩어져 있는 펠릿으로 습관화시킨다(그림 1A).</li>
	<li>훈련과 테스트 후에 매일 음식을 섭취하십시오. 매일 비슷한 일정을 유지하십시오.</li>
	<li>사전 훈련 첫날에 쥐를 손이 닿는 곳에 놓고 앞쪽에서 관찰하십시오. 펠릿을 챔버 앞쪽에 개구부 가까이에 두어 펠릿을 소비하기 시작합니다. 이 단계에서 마우스는 어떤 형태로든 펠렛을 잡을 수 있습니다.</li>
	<li>사전 훈련 둘째 날에는 펠릿을 구멍에서 더 멀리 떨어뜨려 들여쓰기(개구부에서 1cm)까지 올려 놓으면 쥐가 손이 닿는 움직임을 형성할 수 있습니다(그림 1C).</li>
	<li>쥐가 케이지의 뒤쪽으로 달려가 케이지 개구부로 돌아가 시험을 개별화하기위한 전략으로 다음 음식 펠릿을 받도록 훈련시킵니다. 참고: 이것은 각 시험의 압흔에 펠릿을 넣기 전에 마우스가 케이지의 뒤쪽에 있을 때까지 기다림으로써 달성될 수 있습니다.</li>
	<li>오른쪽 또는 왼쪽 발로 잡을 펠릿을 놓습니다. 참고 : 마우스는 우선적으로 한 발을 사용하여 잡기 시작하며, 다음 날의 훈련 및 테스트에 사용됩니다.</li>
	<li>20회 시행되는 일일 세션에서 6일 동안 또는 최대 10분이 경과할 때까지 동물을 훈련시킵니다. 훈련 2 일째부터 모의 수신기 (치수 12 x 18 x 7 mm, 1g, 재료 표 참조)를 넣어 쥐가 작업을 수행하는 동안 체중에 익숙해 지도록하십시오 (그림 1B). 매일 히트 횟수와 놓친 시험 횟수를 채점합니다.</li>
	<li>일반 카메라로 동작을 기록하고 챔버 전면에서 30-60 프레임 / s를 캡처하십시오. 또한 45° 각도로 훈련실 아래에 거울을 배치하여 동물의 자세를 모니터링할 수 있습니다(그림 1D,E).</li>
	<li>사후 운동학 분석(그림 2)의 경우, 고속 카메라(재료 표 참조)를 45° 각도로 장착하여 케이지 측면에서 녹화합니다. 3D 분석이 필요한 경우 두 번째 고속 카메라를 배치하여 챔버 앞쪽에서 35° 각도로 녹화합니다. 두 카메라 모두 동물의 측면성에 따라 케이지의 오른쪽 또는 왼쪽에 배치되어야 하며 동일한 프레임 속도로 캡처하고 동기화해야 합니다(그림 3D,E).</li>
	<li>가능한 경우 고속 카메라를 376 x 252픽셀 이상의 해상도로 100프레임/초로 설정합니다. 흰색 스티로폼 벽을 챔버의 측면과 뒷면 뒤에 배치하여 배경을 줄이고 대비를 높입니다(그림 1E).</li>
	<li>시험 당일에는 모의 장치를 무선 광유전학 자극을 위한 적외선 수신기로 교체하십시오(그림 1B,C).</li>
	<li>마우스가 도달하기 시작하면 LED 캐뉼라를 리모컨으로 수동으로 돌려 동작이 수행되는 시간 및 2 초 이상 연속 자극을 가하지 않도록하십시오. 자동 자극 패러다임을 프로그래밍하는 것이 바람직하다. 자극 장치는 1.0mW/mm2의 팁에서 강도로 470nm(청색광)의 LED를 트리거합니다.</li>
	<li>채점 및 운동학 분석을 포함한 추가 시험을 위해 비디오를 수집하십시오.</li>
</ol>3. 사후 조직학적 확인
<ol><li>실험이 완료되면 바이러스 발현 및 LED 캐뉼라 배치를 확인하십시오. 케타민 100 mg / kg과 크실라진 10 mg / kg의 칵테일로 동물을 마취하십시오. 마우스가 깊은 마취의 징후를 보이면 (단계 1.7), 얼음처럼 차가운 인산염 완충 식염수 (PBS)로 관류시킨 다음 4 % PFA를 사용합니다.</li>
	<li>포셉으로 커넥터를 단단히 잡고 부드럽게 잡아당겨 이식된 캐뉼라를 조심스럽게 제거하십시오.</li>
	<li>4% PFA23에서 24시간 동안 뇌를 추출하고 후고정시킨다.</li>
	<li>PBS로 3-10 분 세척을 수행하십시오.</li>
	<li>마이크로톰을 사용하여 뇌를 50 μm 절편으로 절단 한다(표 참조).</li>
	<li>DAPI를 사용하여 하드 세트 장착 매체가 있는 슬라이드에 섹션을 마운트하여 핵을 염색하고 슬라이드를 덮습니다.</li>
	<li>건조 후, 공초점 현미경으로 절편을 관찰하고 이식된 캐뉼라 위치 및 임의의 형광 단백질과 융합된 Ch2R의 발현을 확인하였다.</li>
</ol>

<ol><li>Balbinot, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-stroke+kinematic+analysis+in+rats+reveals+similar+reaching+abnormalities+as+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Report%22%5BJournal%5D)">Post-stroke kinematic analysis in rats reveals similar reaching abnormalities as humans.</a> Scientific Report. 8 (1), 8738(2018).</li>
<li>Klein, A., Sacrey, L. A., Whishaw, I. Q., Dunnett, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+rodent+skilled+reaching+as+a+translational+model+for+investigating+brain+damage+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+%26+Biobehavioral+Reviews%22%5BJournal%5D)">The use of rodent skilled reaching as a translational model for investigating brain damage and disease.</a> Neuroscience & Biobehavioral Reviews. 36 (3), 1030-1042 (2012).</li>
<li>MacLellan, C. L., Gyawali, S., Colbourne, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skilled+reaching+impairments+follow+intrastriatal+hemorrhagic+stroke+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Skilled reaching impairments follow intrastriatal hemorrhagic stroke in rats.</a> Behavioural Brain Research. 175 (1), 82-89 (2006).</li>
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<li>vanden Berg, F. E., Swinnen, S. P., Wenderoth, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+the+primary+motor+cortex+in+controlling+movements+executed+with+the+ipsilateral+hand+differs+between+left-+and+right-handers%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cognitive+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Involvement of the primary motor cortex in controlling movements executed with the ipsilateral hand differs between left- and right-handers.</a> Journal of Cognitive Neuroscience. 23 (11), 3456-3469 (2011).</li>
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<li>Lopez-Huerta, V. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Striatal+bilateral+control+of+skilled+forelimb+movement%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Striatal bilateral control of skilled forelimb movement.</a> Cell Reports. 34 (3), 108651(2021).</li>
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<li>Jaidar, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synchronized+activation+of+striatal+direct+and+indirect+pathways+underlies+the+behavior+in+unilateral+dopamine-depleted+mice%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Synchronized activation of striatal direct and indirect pathways underlies the behavior in unilateral dopamine-depleted mice.</a> European Journal of Neuroscience. 49 (11), 1512-1528 (2019).</li>
<li>Gong, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+Cre+recombinase+to+specific+neuron+populations+with+bacterial+artificial+chromosome+constructs%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Targeting Cre recombinase to specific neuron populations with bacterial artificial chromosome constructs.</a> The Journal of Neuroscience. 27 (37), 9817-9823 (2007).</li>
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<li>Overduin, S. A., d'Avella, A., Carmena, J. M., Bizzi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microstimulation+activates+a+handful+of+muscle+synergies%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Microstimulation activates a handful of muscle synergies.</a> Neuron. 76 (6), 1071-1077 (2012).</li>
<li>Miyazaki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large+Timescale+interrogation+of+neuronal+function+by+fiberless+optogenetics+using+lanthanide+micro-particles%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Large Timescale interrogation of neuronal function by fiberless optogenetics using lanthanide micro-particles.</a> Cell Reports. 26 (4), 1033-1043 (2019).</li>
<li>Yang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wireless+multilateral+devices+for+optogenetic+studies+of+individual+and+social+behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Wireless multilateral devices for optogenetic studies of individual and social behaviors.</a> Nature Neuroscience. 24 (7), 1035-1045 (2021).</li>
<li>Kampasi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiberless+multicolor+neural+optoelectrode+for+in+vivo+circuit+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Fiberless multicolor neural optoelectrode for in vivo circuit analysis.</a> Scientific Reports. 6, 30961(2016).</li>
<li>Allen, B. D., Singer, A. C., Boyden, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+designing+interpretable+optogenetic+behavior+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Learning+%26+Memory%22%5BJournal%5D)">Principles of designing interpretable optogenetic behavior experiments.</a> Learning & Memory. 22 (4), 232-238 (2015).</li>
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저자는 공개를 선언하지 않습니다.

잘 정의 된 행동 패러다임에서 신경 집단의 광유전 적 조작의 사용은 운동 제어 7,23의 기초가되는 메커니즘에 대한 우리의 지식을 발전시키고 있습니다. 무선 방법은 여러 동물 또는 자유 이동34,35에 대한 테스트가 필요한 작업에 특히 적합합니다. 그럼에도 불구하고, 기술과 장치가 세련됨에 따라, 그것은 광유전학34,36과 결합 된 모든 행동 과제에 대한 선택 사항이어야합니다.
현재의 방법은 소형화된 LED가 높은 강도의 신뢰할 수 있는 광원을 제공하고 임플란트를 며칠 동안 자극이 필요한 연구에 사용할 수 있기 때문에 많은 장점을 가지고 있습니다. 그럼에도 불구하고, ...

운동 숙련 된 행동은 우리가 수행하는 대부분의 움직임 중에 존재하며, 여러 뇌 장애 1,2,3,4,5,6에서 영향을받는 것으로 알려져 있습니다. 숙련 된 운동의 발달, 학습 및 성능을 연구 할 수있는 작업을 구현하는 것은 특히 뇌 손상, 신경 퇴행성 및 신경 발달 장애 모델 2,7,8,9,10,11,12,13에서 운동 기능의 신경 생물학적 토대를 이해하는 데 중요합니다. . 물체에 도달하고 검색하는 것은 일상 생활에서 일상적으로 이루어지며, 초기 개발 과정에서 습득 한 최초의 운동 기술 중 하나이며 5,6 년 동안 세련되었습니다. 그것은 물체의 특징에 대한 인식, 운동 계획, 행동 선택, 운동 실행, 신체 조정 및 속도 변조 7,14,15,16과 같은 감각 - 운동 과정을 필요로하는 복잡한 행동을 포함한다. 따라서, 일수동적인 높은 손재주 작업은 양쪽 반구 16,17,18,19,20,21,22의 많은 뇌 구조의 참여를 필요로 한다. 마우스에서, 단일 펠릿 도달-대-파악 과제는 개별적으로 제어되고 분석될 수 있는 여러 단계를 특징으로 한다(7,13,23). 이 특징은 획득 및 행동 성능의 상이한 단계에서 특정 뉴런 서브 집단의 기여를 연구 할 수있게하고 모터 시스템13,23,24에 대한 상세한 연구를위한 플랫폼을 제공한다. 움직임은 몇 초 안에 발생합니다. 따라서, 고속 비디오 그래피는 숙련된 운동 궤적(7,25)의 뚜렷한 단계에서 운동학적 분석에 사용되어야 한다. 비디오로부터 신체 자세, 궤적, 속도 및 에러 유형(25)을 포함하는 몇몇 파라미터들이 추출될 수 있다. 운동학적 분석은 무선 광유전학적 조작(7,23) 동안 미묘한 변화를 검출하는데 사용될 수 있다.
무선 헤드 마운트 시스템을 통해 빛을 전달하기 위해 소형 발광 다이오드(LED)를 사용하면 동물이 작업을 수행하는 동안 원격 광유전학 제어를 할 수 있습니다. 무선 광유전학 제어기는 자극기로부터 단일 펄스 또는 연속 트리거 명령을 수용하고, 적외선(IR) 신호를 소형화된 LED(23,26)에 연결된 수신기로 전송한다. 현재의 프로토콜은 이러한 무선 광유전학 접근법을 손재주 태스크의 고속 비디오 그래피와 결합하여 미세 운동 거동(23)의 수행 동안 특정 뉴런 집단의 역할을 해부한다. 단일 수동 작업이기 때문에 두 반구에서 구조물의 참여를 평가할 수 있습니다. 전통적으로 뇌는 매우 비대칭적인 방식으로 신체 움직임을 제어합니다. 그러나 손재주가 높은 작업에는 동측성 핵과 핵10,20,21,22,23 내의 신경 하위 집단의 차별적 기여를 포함하여 많은 뇌 구조로부터의 신중한 조정과 제어가 필요합니다. 이 프로토콜은 양쪽 반구로부터의 피질하 구조가 앞다리(23)의 궤적을 조절한다는 것을 보여준다. 이 패러다임은 뇌 질환의 다른 뇌 영역과 모델을 연구하는 데 적합 할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>마취기</td><td>, RWD,</td><td>R583S</td>, <td>이소플루란, 기화기</td></tr>, <tr><td>아네스켓</td>, <td>PiSA</td><td></td>, <td>케타민</td></tr>, <tr><td>브레드보드</td>, <td>Thorlabs,</td><td>MB3090/M</td><td>, 솔리드 알루미늄, 광학 브레드보드</td></tr>, <tr><td>카메라, 렌즈,</td><td>캐논, 50mmf</td><td></td><td>/1.4, 수동 초점 렌즈(c-마운트),</td></tr> <tr><td>카메라 시스템</td>, <td>BrainVision</td>, <td>MiCAM02</td>, <td>카메라 컨트롤러 및 싱크로나이저</td></tr><tr><td>면봉</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CS 용액</td><td>PiSA</td><td></td><td>염화나트륨 용액 9%</td></tr> <tr><td>맞춤형 교육 챔버</td><td>사내</td><td></td><td></td></tr><tr><td>드릴 비트 #105</td><td>Dremel</td><td>2 615 010 5AE</td><td>조각 커터</td></tr><tr><td>먼지가 없는 정밀 초콜릿 펠릿</td><td>Bio-Serv</td><td>F05301</td><td></td></tr><tr><td>에틸 알코올</td><td>J. 티.&nbsp; Baker</td><td>9000-02</td><td>에탄올</td></tr><tr><td>Eyespears</td><td>Ultracell</td><td>40400-8</td><td>흡수성 PVA 소재의 Eyespears</td></tr><tr><td>Fluriso</td><td>VetOne</td><td>V1 502017-250</td><td>Isoflurane</td></tr><tr><td>유리 모세관</td><td>Drumond Scientific</td><td>3-000-203-X</td><td>피펫 NanoJect II</td></tr><tr><td>Hidrogen peroxide</td><td>Farmacom</td><td></td><td>방부제</td></tr><tr><td>고속 카메라</td><td>BrainVision</td><td>MiCAM02-CMOS</td><td>흑백 고속 카메라</td></tr><tr><td>적외선 이미터</td><td>Teleopto</td><td></td><td></td></tr><tr><td>인슐린 주사기</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LED 캐뉼라</td><td>Teleopto</td><td>TelC-c-l-d</td><td>LED 캐뉼라 250um 487nm 광</td></tr><tr><td>마이크로피펫 10 uL</td><td>Eppendorf</td><td>Z740436</td><td></td></tr><tr><td>마이크로피펫 풀러</td><td>Sutter</td><td>P-87</td><td>수평 풀러</td></tr><tr><td>현미경 LSM780</td><td>Zeiss</td><td></td><td>컨포칼 현미경</td></tr><tr><td>Microtome</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>모의 수신기</td><td>Teleopto</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NanoJect II</td><td>Drumond Scientific</td><td>3-000-204</td><td>마이크로 인젝터</td></tr><tr><td>산소 탱크</td><td>인프라</td><td>na</td><td></td></tr><tr><td>pAAV-EF1a-double.floxed-hChR2(H134R)-mCherry-WPRE-HGHpA</td><td>Addgene</td><td>20297</td><td>ChR-2 발현을 위한 바이러스 벡터</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Sigma</td><td>P-6148</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate saline buffer</td><td>Sigma</td><td>P-4417</td><td>Phosphate saline buffer tablets</td></tr><tr><td>Pipette tips 10 uL</td><td>ThermoFisher</td><td>AM12635</td><td>0.5-10 uL&nbsp; volume</td></tr><tr><td>Pisabental</td><td>PiSA</td><td></td><td>나트륨 펜토 바르 비탈</td></tr><tr><td>플렉시 유리</td><td>상업용</td><td></td><td>아크릴 시트</td></tr><tr><td>포비돈 요오드</td><td>Farmacom</td><td></td><td>방부제</td></tr><tr><td>프로신</td><td>PiSA</td><td></td><td>자일라신</td></tr><tr><td>Puralube</td><td>Perrigo 제약</td><td>1228112</td><td>눈 윤활제 15 % 미네랄 오일 / 85 % 바셀린</td></tr><tr><td>로타리 도구</td><td>Kmoon</td><td>미니 그라인더</td><td>표준</td></tr><tr><td>메스</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>메스 블레이드</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>입체 장치</td><td>스톨팅</td><td>51730D</td><td>디지털 장치</td></tr><tr><td>Super-Bond C& B</td><td>Sun Medical</td><td></td><td>치과 시멘트</td></tr><tr><td>외과 일회용 캡</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Teleopto 리모콘 Teleopto</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tg Drd1-Cre 마우스 라인</td><td>Gensat</td><td>036916-UCD</td><td>트랜스 유전자 삽입 FK150Gsat</td></tr><tr><td>조직 접착제</td><td>3M Vetbond</td><td>1469SB</td><td></td></tr><tr><td>TPI Vibratome 1000 plus</td><td>Peico</td><td></td><td></td></tr><tr>DAPI <td>Vector laboratories</td><td>H-1200</td><td>장착 매체</td>가 있는 Microtome<td>Vectashield 장착 매체</td></tr><tr><td>무선 수신기</td><td>Teleopto</td><td>TELER-1-P</td><td></td></tr></tbody></table>

생체 내 숙련 된 운동 행동의 무선 광유전학 제어

In Vivo Wireless Optogenetic Control of Skilled Motor Behavior

미세 운동 기술은 일상 생활에서 필수적이며 여러 신경계 장애에서 손상 될 수 있습니다. 이러한 작업의 획득 및 수행에는 감각 - 모터 통합이 필요하며 양측 뇌 회로의 정확한 제어가 필요합니다. 동물 모델에서 단수동 행동 패러다임을 구현하면 작업 수행 중에 제어 조건 및 질병에서 특정 핵의 신경 활동을 조작하고 기록 할 수 있으므로 복잡한 운동 행동에 선조체와 같은 뇌 구조의 기여에 대한 이해가 향상됩니다. 
그것의 창조 이래로, 광유전학은 신경 세포의 선택적이고 표적화 된 활성화 또는 억제를 가능하게함으로써 뇌를 심문하는 지배적 인 도구였습니다. 광유전학과 행동 분석의 결합은 특정 뇌 기능의 기본 메커니즘에 대해 밝힙니다. 소형화된 발광 다이오드(LED)를 갖춘 무선 헤드 마운트 시스템은 완전히 자유롭게 움직이는 동물에서 원격 광유전학적 제어를 가능하게 합니다. 이것은 유선 시스템이 발광 효율을 손상시키지 않으면서 동물의 행동에 덜 제한적이라는 한계를 피할 수 있습니다. 현재의 프로토콜은 무선 광유전학 접근법과 고속 비디오 그래피를 단일 수동 손재주 작업으로 결합하여 특정 신경 세포 집단이 미세한 운동 행동에 기여하는 것을 해부합니다.

도달 - 투 - 파악 과제는 다양한 실험 조작 하에서 미세 기술 운동의 형성, 학습, 성능 및 운동학을 연구하는 데 널리 사용되는 패러다임입니다. 마우스는 며칠 안에 작업을 수행하고 5 일간의 훈련 후에 고원에 도달하는 55 % 이상의 정확도를 달성하는 법을 배웁니다 (그림 2A, B). 이전에 보고된 것과 유사하게, 동물의 백분율은 작업을 적절하게 수행하지 않으며(29.62%), 이들은 추가 분석(30)으로부터 제외되어야 한다. 여기에는 훈련 초기부터 펠릿에서 너무 멀리 조준하는 대상을 놓치거나 펠릿 위에 올바른 위치에 있기 전에 파지 운동을 수행하는 비학습자 마우스(6/54 마우스, 11.1%)의 서브세트가 포함된다. 첫 번째 훈련 일 동안 다른 그룹은 높은 정확도로 작업을 수행했지만 3-4 일 (10/54 마우스, 18.51 %)까지 펠릿에서 너무 멀리 조준하여 성능이 좋지 않았습니다. 이 그룹 내...

본 프로토콜은 자유롭게 움직이는 마우스에서 숙련 된 운동 거동의 성능에 관여하는 신경 회로를 특성화하기 위해 단일 펠릿 도달 - 투 - 파악 작업에서 고속 비디오 그래피와 결합 된 무선 광유전학을 사용하는 방법을 설명합니다.

Fine motor skills are essential in everyday life and can be compromised in several nervous system disorders. The acquisition and performance of these ...

현재의 프로토콜은 숙련 된 운동 행동의 기초가되는 뇌 메커니즘의 연구에 기여합니다. 무선 광유전학은 피험자가 자유로운 움직임으로 작업을 수행하는 동안 특정 뉴런의 조작을 허용합니다. 고속 비디오 그래피와 결합하여 미세 운동 거동에 대한 상세한 분석을 할 수 있습니다.이 방법은 신경 발달 및 신경 퇴행성 장애의 운동 문제를 이해하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이러한 기술은 다른 행동 패러다임에서도 뇌 기능을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 내 실험실의 학부생 인 Diana Rodriguez-Munoz는 실험을 도울 것입니다.수술 절차의 경우, 관심 구조의 등쪽 - 복부 좌표에 따라 원하는 길이의 LED 캐뉼라를 준비하여 시작하십시오. 이렇게하려면 유리 섬유를 최종 원하는 크기보다 긴 길이로 자르고 거친 사포로 섬유 팁을 목표 길이로 연마하십시오. 그런 다음 섬유 팁을 미세한 사포로 닦으십시오.미세 주사의 경우 피펫에 미네랄 오일을 채우고 피펫을 마이크로 인젝터에 넣으십시오. 일부 미네랄 오일을 주입하여 마이크로 인젝터가 올바르게 작동하는지 확인하십시오. 다음으로, 안과 연고를 바르고 트리머 및 제모 크림으로 두피에서 모발을 제거하여 수술을 위한 마취된 마우스를 준비한다.그런 다음 8 % 포비돈 요오드와 70 % 에탄올을 각각 세 번 번갈아 가며 면봉으로 두피를 닦으십시오. 소독 후 마우스를 입체 택시 장치에 넣고 머리를 고정하여 두개골이 내측 및 전후 축에 수평을 이루도록하십시오. 메스를 사용하여 시상 축을 따라 눈 높이에서 두피를 통해 한 센티미터 절개를하십시오.그런 다음 피부를 수축시켜 두개골을 노출시키고 면봉으로 골막을 닦으십시오. 식염수와 면봉으로 두개골 표면을 청소하고 멸균 흡수성 눈 창을 사용하여 표면의 출혈을 해결하십시오. 그런 다음 면봉에 2.5 % 과산화수소를 떨어 뜨리고 몇 초 동안 작용하여 두개골 봉합사를 볼 수있게하고 더 나은 참조를 얻으십시오.몇 초 후, 깨끗한 면봉으로 그 지역을 깨끗이 닦으십시오. 최종 팁 직경이 15미크론인 유리 피펫으로 브레그마와 람다를 찾아 두개골이 전후축에 수평을 이루고 있는지 확인합니다. 그런 다음 마커를 사용하여 선택한 좌표 위의 두피에 참조점을 페인트합니다.기준점에서, 작고 둥근 치과 드릴 비트로 저속 내지 중속으로 회전 공구로 두개골에 부드러운 압력을 가하는 1 밀리미터 직경의 두개골 절제술을 수행하십시오. 완료되면 모세관을 선택한 전후 또는 AP쪽으로 이동하고 내측 또는 ML 좌표를 이동합니다. 관심 영역에서 채널로돕신을 발현하기 위해 300 내지 400 나노리터의 CreE 의존성 아데노-관련 바이러스, 또는 AAV와 같은 AAV1, D-플록스 채널로돕신 mCherry로 모세관을 로딩한다.AAV는 리포터 단백질을 발현시키기 위한 대조군으로서 사용될 수 있다. 팁이 막히지 않도록 한 후 등쪽 - 복부에서 3.35 밀리미터 좌표를 뺀 등쪽 선조체에서 뇌에 유리 피펫을 도입하고 자동 인젝터를 사용하여 초당 23 나노 리터의 속도로 200 나노 리터의 바이러스를 주입하십시오. 유출을 피하기 위해 유리 피펫을 천천히 꺼내기 전에 주사 후 10 분 동안 기다리십시오.그런 다음 면봉으로 잔류 물을 청소하고 말리십시오. 다음으로, 유리 LED 캐뉼라를 입체 택시 암에 부착하고 bregma를 참조로 사용하여 좌표를 보정합니다. 그런 다음 캐뉼러를 천천히 삽입하여 조직 손상을 피하고 주사 부위 위에 100 마이크로 미터 위에 놓습니다.LED 캐뉼라가 제자리에 놓이면 두개골 절제술의 가장자리에 100 마이크로 리터의 조직 접착제를 떨어 뜨립니다. 멸균 브러시를 사용하여 갓 준비한 치과 시멘트 혼합물을 캐뉼라 커넥터 주위에 조금씩 적용하고 두개골이 덮히고 커넥터가 두개골에 단단히 부착되어 핀이 완전히 자유로워 질 때까지 층을 만듭니다. 시멘트가 완전히 건조되면 조직 접착제를 사용하여 임플란트 주위의 피부를 닫으십시오.그런 다음 마우스를 섭씨 33도의 가열 패드 위에 회복 케이지에 놓고 불편 함이나 통증의 징후를 모니터링하십시오. 일반 카메라로 동물의 행동을 기록하고 챔버 앞쪽에서 초당 30 ~ 60 프레임을 캡처하십시오. 거울은 동물의 자세를 모니터링하기 위해 45도 각도로 훈련실 아래에 놓을 수 있습니다.마우스가 펠릿에 도달하기 시작할 때, LED 캐뉼라를 리모컨으로 수동으로 돌려 거동이 두 초 이상 수행되지 않는 시간 동안 연속적인 자극을 갖도록 한다. 자극 장치는 밀리미터 평방 당 하나의 밀리와트의 끝에서 강도로 470 나노 미터의 LED를 트리거합니다. 광유전 적 조작하에 동물의 미세한 운동 행동은 도달 - 파악 과제로 연구되었습니다.마우스는 며칠 만에 작업을 수행하는 법을 배웠고 55 % 이상의 정확도를 달성하여 5 일간의 훈련 후에 고원에 도달했습니다. 움직임의 궤적은 고속 비디오 그래피로 추적되어 운동학을 분석 할 수있었습니다. 이동 거리, 속도, 가속도, 종점 및 궤적과 같은 매개 변수에 대한 정량화 가능한 평가가 수행되었습니다.놓친 시험에서, 마우스는 히트 시험보다 펠릿에서 더 멀리 떨어져있는 잡기 운동을 시작했습니다. 또한, 오류는 마우스 자세와 상당히 관련이 있었으며, 타격 중 신체 각도의 차이와 놓친 시험으로 나타났습니다. 스파이니 프로젝션 뉴런 또는 SPN을 발현하는 D1 도파민의 대측성 활성화는 대조군 조건에 비해 파악 성공을 감소시켰다.광유전학적 자극 동안, 발 궤적은 이동 거리에서 증가하여, 펠릿을 표적으로 할 수 없는 무능력과 초기 오차 유형의 증가로 이어졌다. 원리 성분 분석, 또는 PCA는 대측성 D1 SPNs 활성화 동안 모든 시험 궤적이 대조군 클러스터와 거의 겹치지 않는 클러스터에서 분리되는 것을 보여주었고, 이는 낮은 유사성을 나타낸다. 동측 측에서 DSPNs의 활성화는 PCA 분석에 의해 나타난 궤적 분산의 증가를 가져왔다.따라서 동측성 D1 SPNs 활성화는 행동 결과를 변경하지 않고 도달 궤적을 수정했습니다. 이 프로토콜을 수행 할 때 캐뉼라를 올바르게 배치하여 훈련 세션 중에 분리되지 않도록주의하십시오. 이 방법은 다른 행동 패러다임에서 운동 행동, 감각 처리, 학습 및 기억을 연구하는 데 사용할 수 있습니다.무선 광유전학은 진정으로 자유롭게 움직이는 피험자에서 자연 주의적 행동과 신경 생물학적 토대를 연구 할 수있게 해줍니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

출처: Kodani, S., et.al. 마우스의 수면/각성 상태를 모니터링하는 동안 신경 회로의 광유전학적 조작. J. Vis. 경험. (2019년)이 비디오는 생쥐의 수면에서 각성으로의 전환에 관여하는 신경 회로의 광유전학적 조작을 보여줍니다. 이 절차에는 광섬유와 전극을 뇌와 근육에 외과적으로 이식하여 빛 자극과 전기생리학적 기록을 가능하게 하는 것이 포함됩니다. 말단 줄조선(BNST)의 침대 핵에서 빛에 민감한 양이온 채널을 활성화하기 위해 빛을 전달함으로써 신경 활동이 조절되어 연구자들은 각성 유도와 관련된 뇌 및 근육 신호를 분석할 수 있습니다.

마우스의 수면에서 각성으로의 전환을 위한 신경 회로의 광유전학적 조작

optogenetics의 개발은 이제 정확하게 유전자 정의 뉴런과 회로를 자극 할 수있는 방법을 모두...

뇌 조직의 만성 Optogenetic의 자극을위한 광섬유 주입

유전학과 광학을 결합 신경 과학 도구의 최근 개발, 공간 및 시간 해상도의 전례없는 수준의 신경 회로의 활동을 제어 할 수 있습니다, "optogenetics"라고. 여기에서 우리는 전두엽 피질과 subicular 피라미드 뉴런의 유전 정의 된 부분 집합의 optogenetic 조작과 생체 녹화에 통합하기위한 프로토콜을 제공합니다.

개별 피라미드 뉴런의 고 충실도 Optogenetic 제어하는​​ 방법<em&gt; 생체 내</em

준 그대로의 모터 출력의 변화 (근육 수축) 모니터링하면서 여기에 우리가 motoneuronal 활동 optogenetic 조작에 대한 프로토콜을...

세미 그대로의 레이저 조명과 신경 활동의 Optogenetic 섭동<em&gt; 초파리</em모션&gt; 유충

광유전학은 행동 신경과학 실험에 사용할 수 있는 강력한 도구가 되었습니다. 이 프로토콜은 레이저 시스템의 설계 및 설정에 대한 단계별 가이드를 제공하며, 대부분의 설치류 행동 테스트 패러다임과 호환되는 다중 및 동시 생체 내 광유전학적 자극을 수행하기 위한 전체 프로토콜을 제공합니다.

설치류 중추 신경계의 생체 Optogenetic 자극

무선, 멀티 채널 신경 녹음 및 자유롭게 쥐 행동에 자극에 대 한 양방향 시스템 도입. 시스템은 가볍고 콤팩트, 따라서 animal´s 행동 레 퍼 토리에 최소한의 영향을 미치고. 또한,이 양방향 시스템 두뇌 활성화 패턴 및 행동 간의 인과 관계를 평가 하는 정교한 도구를 제공 합니다.

무선, Vivo에서 녹음 하 고 자유롭게 행동 하는 쥐에서 신경 활동의 자극에 대 한 양방향 인터페이스

여기에서, 우리는 마우스에 있는 잠/각성 상태의 감시 도중 뉴런의 특정 모형의 광유전학 조작의 방법을 기술합니다, 예를 들면 stria 말단의 침대 핵에 우리의 최근 일을 제시하.

마우스에서 수면/각성 상태를 모니터링하는 동안 신경 회로의 광유전학 적 조작

여기, 우리는 바이러스 성 식 벡터 실크 fibroin 영화를 사용 하 여 뇌에 전달 하는 방법을 제시. 이 메서드는 식 벡터 실크/AAV 코팅된 광섬유, 광섬유 테이퍼 및 두개골 창 사용의 대상된 배달 수 있습니다.

Vivo에서 실크/AAV 영화를 사용 하 여 Optogenetic 단백질의 표적으로 표현

특정 신경 인구 또는 뇌 영역의 광유전학 적 조작으로, 행동은 자유롭게 움직이는 동물에 있는 높은 시간 및 공간 해상도로 수정될 수 있습니다. 만성 이식 된 광섬유와 함께 다른 광유전학 도구를 사용하여 다양한 신경 변조 및 행동 테스트를 수행 할 수 있습니다.

자유롭게 움직이는 마우스에 있는 행동을 조절하기 위하여 신경 활동의 광유전학 조작

여기서 우리는 급성 설치류 뇌 조각에서 시냅스 특이적 전기생리학적 특성을 허용하기 위해 광유전학적 구조를 가진 분리된 뇌 영역의 바이러스 형질도입을 설명하는 프로토콜을 제시합니다.

생체 외 내측 전두엽 피질에서 외측 내후각 피질까지의 장거리 시냅스 전달 및 가소성에 대한 광유전학적 심문

우리는 전극 제조를 위한 간단하고 비용 효율적인 접근 방식을 개발했으며 자유롭게 움직이는 마우스에서 여러 영역에 걸쳐 신호를 기록했습니다. 다중 지역 전기 생리학 및 칼슘 신호 기록과 함께 광유전학을 활용하면 발작 점화 모델에서 여러 지역의 신경 활동을 밝힐 수 있었습니다.

Multi-Region In vivo Recording을 위한 유연하고 편리한 전기생리학적 Optrodes를 제작하기 위한 통합 방법

학습하세요 무선 광유전학과 고속 영상 촬영을 활용한 생쥐의 숙련된 운동 행동 분석 방법을. 이 기술은 D1 도파민 신경원 조작을 통해 미세 운동 제어의 신경 회로를 규명하고 운동 장애 연구에 활용됩니다.

생체 내 숙련 된 운동 행동의 무선 광유전학 제어

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