Summary
Örnek Kurutma işlemleri esnasında alt-tabaka sıcaklığının ayarlanması sayesinde yöntemde MALDI kütle spektrometresi iyon sinyallerin uzaysal farklılıklarını azaltmak için bir kuralı gösterilmektedir.
Protocol
NOT: Bu protokol, kurutuldu-damlacık yöntemiyle hazırlanan maltotrioz ve bradikinin fragmanı (1-7) mekansal heterojen azaltmak için geliştirilmiştir. Protokol hazırlanması ve ön koşullandırma, örnek bırakma ve kurutma ve kütle spektrometrisi veri analizi de dahil olmak üzere, üç ana adımdan oluşur. prosedürleri tarif ve aşağıda daha ayrıntılı olarak tarif edilmiştir:
1. Hazırlık ve Önkoşullanma
- Örnek Plate Temizleme
- nitril eldiven giyin ve deterjan ve distile-deiyonize su (DDW) ile hafifçe örnek plaka el yıkayın.
- metanol (MeOH) ve DDW ile örnek plaka durulayın.
- 600 ml beher örnek plaka takın ve DDW ile doldurun.
- ultrasonik banyoda (200 W, 40 kHz) 'de 15 dakika süre ile DDW içinde örnek plaka sonikasyon.
- kaptan DDW çıkarın ve MeOH ile beher doldurun.
- ultrasonik banyo (200 W, 40 kHz) 15 dakika boyunca MeOH içerisinde örnek plaka sonikasyon.
- Azot gazı ile plaka üzerinde çözücü damla uçururum ve örnek birikimi önce kuru numune plaka tutun.
- Düzenlenmesi Kurutma Odası Sıcaklığı
NOT:. Kurutma odası 35 x 20 x 45 cm 3 (W x D x Y) akrilik haznesi Şekil 1, bu kurutma sisteminin resmini gösterir. odası kurutma bölmesinin içine monte kalibre edilmiş bir higrometre ile gözlenmiş düşük nispi nem durumunu korumak için sabit bir akış oranında bir gaz akış ölçer ile oda sıcaklığında azot gazı ile temizlenmiştir. programlanmış sabit sıcaklık su sirkülatör sahip kurutma bölmesi bir bakır temel blok çelik örneği plakaları karşılamak için kullanılır. bakır taban bloğu 25 ° C 5 örnek plaka ısısını düzenlemek için yapabiliyor. hava, bakır taban bloğu ve numune plakasının sıcaklık K-tipi termokupllar ile kontrol edilir.- Kapıyı açın ve hızla bakır örnek plaka koymakBaz bloğu sonra kapağını kapatın.
- El ile saatte 10 standart kübik feet (SCFH'dir) azot akış hızını ayarlamak için gaz debi ölçer ayarlayın.
- bağıl nem her zaman% 25'in altına sağlamak için higrometre ve ince ayar gaz debimetre ile kurutma odasında bağıl nemi izleyin.
- K-tipi termokupl tarafından numune plaka sıcaklığını izlemek ve örnek plakası deney ya da kontrol için oda sıcaklığında (25 ° C) 5 ° C ulaşana kadar manuel olarak su sirkülasyon sıcaklığını ayarlamak.
NOT: tasarlanan sıcaklıkta örnek plaka stabilize etmek için, su sirkülasyon sıcaklığı tipik olarak tasarlanmış örnek daha düşük, 5 ° C ila 0 olarak ayarlanır. Örneğin, örnek plakasına 5 ° C tutmak için su sirkülatörün sıcaklık ayarı 2 ° C ila 0 aralığındadır; 25 ° C'de bir örnek plaka korumak için, suyun sirkülatörün sıcaklık ayarı 23-25 ° C aralığındadır. - Gerekli sıcaklık ve bağıl nem örnek birikimi önce (Tablo 1) ulaşılır emin olun.
Not: farklı numune plakası sıcaklıkları kurutma işlemleri için tüm parametrelerin yanı sıra ayar değerleri Tablo 1 'de gösterilmiştir.
NOT: oda kapısı uzun süre açık ise düşük örnek plaka sıcaklığında numune plaka üzerinde su yoğunlaşması oluşabilir. Su yoğunlaşması oluşursa kapıyı kapatın ve su yoğunlaşması kurumuş kadar üzerinde herhangi bir örnek yatırmak ETMEYİN.
- Matris ve analit Çözümleri Hazırlanması
- matris çözümleri hazırlanması
- % 50 DDW sulu solüsyon: 50% asetonitril (ACN) ile 0.1 M thap çözeltisi hazırlayın.
- Analitlerin hazırlanması
- DDW ile 10 -4 M maltotriozdur çözeltisi hazırlayın.
- % 50 asetonitril, 10 5 M bradikinin fragmanı hazırlandı (1-7) çözeltisi(ACN):% 50 DDW sulu çözelti.
- matris çözümleri hazırlanması
2. Örnek Biriktirme ve Kurutma
- Karışımlar 0.1M thap solüsyonu 0.25 | il 10 4 M maltotrioz veya 10 5 M bradikinin fragmanı (1-7), bir mikrosantrifüj tüpü içinde çözeltiler 0.25 ul.
- 3 sn karışık bir çözüm karıştırın.
- santrifüj tüpünün dibinde çözüm toplamak için 2 sn (2000 xg) karışık bir çözüm santrifüjleyin.
- dikkatle, kurutma odasının kapısını açın pipet ile örnek plaka üzerinde solüsyonun 0.1 ul yatırmak ve hemen kapıyı kapatın.
- Örnek damlacık kurumasını bekleyin.
. NOT: Farklı numune plaka sıcaklıkları genellikle gözlenen kurutma süreleri Tablo 1'de listelenen 5 ° C örnek plaka sıcaklığı için, ortalama kuruma süresi 800 1000 sn; 25 ° C Örnek plakası sıcaklığı için ortalama kuruma süresi 100 ile 150 sec. - Kuruduktan sonra, kurutma odasının kapısını açın.
- oda sıcaklığında (25 ° C) su sirkülasyon sıcaklığını ayarlamak.
NOT: Numune plaka kurutma işlemi sırasında, oda sıcaklığında (25 ° C) sürekli tutulursa, bu adımı atlayın. - Oda sıcaklığında (25 ° C) Örnek plaka sıcaklığı döndükten sonra, kurutma bölmesinin örnek plakasını çıkarın.
- 5X stereomikroskop altında örnek morfolojisi incelemek ve bir anlık parlak alan görüntü almak.
Not: kristal morfolojileri olarak beklenmemektedir, bu aynı prosedür ile yeni bir numune hazırlamak için gereklidir. Tipik bir kristal morfolojisi, Şekil 2'nin üst panel gösterilmiştir.
NOT: 5 ° C gibi düşük örnek plaka sıcaklığına sahip durumlarda, kurutma bölmesinin çıkarmadan önce oda sıcaklığına örnek plaka ısıtmak için önemlidir. Örnekleri yatırma yaparken, önceden karıştırılmış Solutio tutmak YAPMAYINn 10 sn boyunca pipet ucu. numuneleri yatırma sonra yeniden premix çözüm kullanmayan ETMEYİN. Şekil 2'nin üst panel farklı numune plakası sıcaklıkları ile hazırlanan numunelerin parlak alan görüntüleri gösterir.
3. Kütle Spektrometresi Veri Analizi
- Kütle Spektrometre Veri Toplama
NOT: hazırlandıktan sonra, numune görüntüleme kütle spektrometresi kullanılarak analiz edilebilir. Bu çalışmada, görüntüleme MS deneyler laboratuar yönelik yapılmış senkronlaştırılmış çift kutup TOF kullanılarak gerçekleştirilir (DP-TOF) kütle spektrometresi görüntüleme. Görüntüleme yeteneği ile 15 ticari MALDI-TOF kütle spektrometre aynı zamanda, deneyler için de uygundur. kütle spektrometresi doğrusal ekstraksiyon ve optimize edilmiş emme gecikmeler ile pozitif iyon modunda çalıştırılır. iyonların kinetik enerjisi 20 kV. Lazer ışını boyutu örnek yüzeyinde çapı 35 mikron ve her nokta spektrum ave olduğunu5 lazer çekim öfke.- MALDI kütle spektrometresi içine örnek plaka yerleştirin.
- adımlarda 2,1-2,9 hazırlanan örnek kütle spektrometresi analizi görüntüleme gerçekleştirin.
- sonuç penceresinde gösterilen kitle listeden karakteristik kitle tepe seçin ve iki boyutlu iyon görüntü çizmek için "2D" tıklayın.
Not: thap ile karıştırılır maltotrioz için, karakteristik tepe noktaları maltotrioz, protonlanmış thap sodiated ve thap sodiated edilir. Thap ile karıştırıldı bradikinin fragmanı (1-7) için, karakteristik tepe noktaları bradikinin fragmanını (1-7) protonlanmış thap protonlanmış ve thap sodiated içerir. - sinyal yoğunluğu üst ve alt limitlerini belirlemek için pop-up pencere ayar düğmelerini tıklatın ve "bir resmi kaydetmek" butonuna tıklayınız. Bu ayar, iyon resimlerin kontrastını tanımlar.
NOT: veri her bireyin setinde, kırık bölgeler ve düşük parlaklığını gösteren boş noktalar ortadan kalkar. - Gözlemlemek ve iyon karşılaştırmakAdım 2.9 olarak alınmıştır parlak alan görüntü ile görüntü.
Not: kütle spektrometrisi ve özellikle iyonlarının görüntülerin inşaat Görüntüleme ticari araçlar ile elde edilebilir. Nedeniyle veri toplama ve analiz yazılımı çeşitli kullanıcıların yüksek kaliteli görüntüler elde etmek için cihaz satıcısı tarafından sağlanan yazılım talimatları takip etmelidir.
- Veri analizi
NOT: Numunelerin heterojen kantitatif analiz edilir. Bu gösteri, her numune iyonları dağılımını analiz etmek in-house geliştirilen yazılımın birden fazla eş merkezli bölüme ayrılmıştır. analiz, tek başına bir veri analiz yazılımı kullanılarak gerçekleştirilebilir.- önemsiz alanları kaldırmak için sonuç penceresinde gösterilen iyon görüntüde boş noktalar ve kırık bölgeleri tıklayın.
NOT: Bu prosedür iyon görüntünün temel alanını tanımlar. - iyon görüntünün dıştaki katman bulmak için lütfen "kenar bulmak" tıklayın.
- bir veritabanında dış tabakasında iyon bolluğu bilgileri kaydetmek ve aynı anda iyon görüntüden bu katmanı kaldırmak için "düşeriz" tıklayın. Bu dıştaki katman temsil eden bir onay kutusu sonucu penceresinin "çıkış verileri" listesinde görünür.
- iyon görüntünün merkez tanımlanır yineleyerek 3.2.2 ve 3.2.3 adımları.
- Tıklayın ve "çıkış verileri" listedeki tüm onay kutularını seçin ve verileri vermek için "ihracat" a tıklayın.
- iyonların mekansal dağılımı bilgilerini elde etmek için her katmanın ortalama iyon bolluğu hesaplamak için tablo yazılımını kullanarak dışa aktarılan verileri açın.
- önemsiz alanları kaldırmak için sonuç penceresinde gösterilen iyon görüntüde boş noktalar ve kırık bölgeleri tıklayın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Parlak alan görüntüleri ve örnek plakası 5 sıcaklığı ve 25 ° C ile hazırlanan maltotrioz ve bradikinin fragmanı (1-7) MS Fotoğraflar, Şekil 1 'de gösterilmiştir. Sodiated maltotrioz, iyon sinyali esas olarak doldurulur halinde örnek alanın çevresine 25 ° C lik bir örnek plakası sıcaklığı hazırlandığında. 5 ° C'ye örnek plaka sıcaklığı düşürerek, sinyal homojen tüm numune alanı üzerinde doldurur. 5 ° C'nin altında örnekleri hazırlamak tek fark olumsuz 25 ° C'nin altında hazırlanan numunelerin daha fazla çatlak olmasıdır. protonlanmış bradikinin fragmanı (1-7) iyon görüntüsü sodiated maltotrioz gibi benzer bir eğilim gösterir. MS görüntüleme sonuçları daha düşük bir örnek plaka sıcaklığı altında örnekleri hazırlamak önemli ölçüde molekülleri yeniden dağıtmak ve heterojenitesini azalttığını göstermektedir.
Şekil 3, 5 ve 25 ° C numune levhası sıcaklıklarında elde maltotrioz ve bradikinin fragmanı (1-7) için istatistiksel analizlerin sonuçlarını göstermektedir. Her numune için, ortalama yoğunluk normalleştirilir. 25 ° C bir numunesi plakası sıcaklığı sodiated maltotrioz durumunda, merkezlerinde sinyal yoğunlukları 5 ° C Örnek plakası sıcaklığı çok daha düşüktür. 5 ° C, 25 örnek plakası sıcaklık azalması sırasında protonlanmış bradikinin fragmanı (1-7) 'in sonucu daha az değişimini göstermektedir.
Şekil 1: Örnek kurutma sisteminin resmi.Kurutma odası akrilik yapılmıştır. odası düşük nispi nem durumunu korumak için oda sıcaklığında azot gazı ile temizlenmiştir. programlanmış sabit sıcaklık su sirkülatör ile donatılmış bir bakır taban bloğu paslanmaz çelik örneği levhaların ısı derecesini ayarlamak için kullanılır. Termometreler hava, bakır taban bloğu izlemek ve örnek plaka. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 2:. Daha iyi sinyal homojenlik düşürülmesi örnek plaka sıcaklığı sonuçları parlak bir alan görüntüler (üst resim) yanı sıra maltotrioz (a) ve bradikinin fragmanı (1-7) MALDI görüntüleri (alt resim), (b) Thap ile hazırlanan farklı bir örnek plaka sıcaklıklarda. MALDI sırasıyla, toplam spektrum: ve protonlanmış bradikinin fragmanını (1-7) (757, m / z): Çıkan sodiated maltotrioz (527, m / z) çekilmesi ile elde edilmiştir. Iyon görüntülerin piksel boyutu 35 mm. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 3: Sinyal varyasyon örnek plaka sıcaklığı gibi azaltan kurutma işlemi sırasında azalır MALDI görüntüleri maltotrioz (a) ve bradikinin fragmanı (1-7), (b) farklı numune plaka sıcaklıklarda Thap ile hazırlanan ile elde edilir.. Kırmızı ve mavi veriler, sırasıyla 25 ve 5 ° C Örnek plaka sıcaklığına hazırlanan örnek göstermektedir.g "target =" _ blank "> bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.
| Örnek ısıtıcı sıcaklığı (° C) | Örnek | Hava Sıcaklığı (° C) | Bağıl Nem (RH%) | Kuruma Süresi (sn) |
| 5 | Thap ile maltotriozdur | 20 ± 3 | <25 | 800 - 1000 |
| Thap olan bradikinin parçası (1-7) | ||||
| 25 | Thap ile maltotriozdur | 25 ± 3 | 100-150 | |
| Thap olan bradikinin parçası (1-7) |
Tablo 1: Deney parametreleri ve farklı numune plaka sıcaklıklarda kurutma koşulları.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
önceki teorik tahminlere dayanarak, damlacıklar içindeki sıcaklık kaynaklı hidrodinamik akışları dışa çözücü buharlaştırma yoluyla uyarılan kılcal akışları üstesinden gelebilir. sıcaklık damlacık artışı içinde gradyanlar zaman moleküllerin bu iç sirkülasyonu verimliliği artırılmıştır. çevre sıcaklığında çevresi muhafaza edilirken, 5 ° C'nin altında Örnek plaka sıcaklığı tutmak zaman tahmin edilen sonuçlara göre, damlacık içindeki sirkülasyon akımlarının ortalama hızı dışa kılcal akımlarının daha yaklaşık 4 kat daha hızlıdır. Numune plaka sıcaklığı çevresi ile aynıysa, devridaim akışlarının ortalama hızı dışa kılcal akışı daha 1800 kat daha yavaştır. Bu hesaplamanın sonucu numune hazırlama esnasında numune plakası sıcaklığı azaltılması avantajlı olduğunu göstermektedir. Deneysel gözlemler, bu öngörü ile katılıyorum.
Örnek plaka öfkeçalıçtırdıgınızda tam olarak farklı numune plakası sıcaklıklarda örneğin 0.1 ul numune hazırlama işlemi. Tablo 1 içinde, tipik damlacık kuruma süresini gösteren kontrol edilmelidir. plaka üzerinde örnek çözümü yerleştirilmeden önce, numune plaka yüzeyi kuru olduğundan emin olmak için önemlidir. Düşük sıcaklıklarda örnekleri hazırlanırken su yoğunlaşması oluşursa yoğunlaşmış su numunesi alanları büyütür ve çözümleri sulandırır, çünkü numune çözeltisinin birikimi tavsiye edilmez. Nedenle, 25% altında kurutma bölmesinin görece neminin tutmak önemlidir. Düşük sıcaklıklarda örneklerin hazırlanmasına Buna ek olarak, örnek plakası kurutma bölmesinin çıkarmadan önce, oda sıcaklığına kadar sıcak olmalıdır. Örnek kristalleşmenin tamamlanmasından sonra az su buharının Örnek nüfusu değiştirmez, ancak önemli bir kondansasyon kaçınılmalıdır.
Taze önceden karıştırılmış çözümleri kullanımı recom olduğunuiyileşiyorlardı. önceden hazırlanmış solüsyon havaya maruz sonra, örnek solüsyonların ön kristalizasyonu, ortaya çıkar ve son kristal büyüklüğü ve morfoloji değişebilir. Bu nedenle, pipetleme prosedürü pipet olan ön-kristalleştirme örnek damlacık önlemek için, tipik olarak 10 saniye içinde, uygun verimle yapılmalıdır. Uygun kristal morfolojileri kütle spektrometresi analizinden önce üretilen sağlamak için mikroskop altında örnek morfolojileri gözlemlemek için tavsiye edilir. Kristal morfolojisi kadar iyi değilse gerekli birikim sürecini tekrarlayarak, beklendiği gibi.
teorik ve deneysel çalışmalara göre, ortam koşulları altında yüklü bir düşük sıcaklık örnek plaka ile numune hazırlanması büyük ölçüde MALDI-MS veri tekrarlanabilirlik ve kalitesini artırır. Daha sonraki deneyler de bu numune hazırlama yöntemi ile sinyal yoğunluğu önemli artışı göstermektedir. t ile elde edilen deneysel verilerOnun yöntemi önemli ölçüde kantitatif analiz için MALDI kütle spektrumlarının güvenilirliğini artırmak. Çözelti bileşim veya yüzey özelliği değişiklikleri kapsayan diğer yöntemlerle karşılaştırıldığında, 8,16-18 değişen kuruma koşulunda, geleneksel örnekler için daha basit ve daha genel olarak uygulanabilir. Böylece, en kütle spektrometresi kullanıcıları düzenli uygulamalarda ondan yararlanabilir.
Numune plaka sıcaklığı azaldıkça MALDI sinyal homojenlik iyileştirilmesi de diğer bazı popüler matrisler için etkilidir. Örneğin, gelişmiş α-siklodekstrin (α-CD) thap ve α-siyano-4-hidroksisinamik düşük sıcaklıkta Örnek Kurutma koşulları altında matriks olarak asit (CHCA) sinyal homojenliği için en son rapor edilmiştir. 14 değişen bir örnek plakası dezavantajı sıcaklık yöntemi nedeniyle, düşük sıcaklıklarda uzun bir numune kuruma süresi, yüksek verimli analizi için şu anda uygun olmasıdır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagent | |||
| Detergent powder | Alconox | 242985 | |
| Methanol | Merck | 106009 | |
| Acetonitrile | Merck | 100003 | |
| 2,4,6-trihydroxyacetophenone (THAP) | Sigma-Aldrich | T64602 | |
| Bradykinin fragment (1-7) | Sigma-Aldrich | B1651 | |
| Maltotriose | Sigma-Aldrich | 47884 | |
| Pipette tips | Mettler Toledo | 17005091 | |
| Microcentrifuge tube | Axygen | MCT-150-C | |
| Equipment | |||
| Milli-Q water purification system | Millipore | ZMQS6VFT1 | |
| Powder-free nitrile gloves | Microflex | SU-690 | |
| 600 ml beaker | Duran | 2110648 | |
| Ultrasonic cleaner | Delta | DC300H | |
| Hygrometer | Wisewind | 5330 | |
| Nitrogen gas flowmeter | Dwyer | RMA-6-SSV | |
| K-type thermocouples | Digitron | 311-1670 | |
| Centrifuge | Select BioProducts | Force Mini | |
| Pipette | Rainin | pipet-lite XLS | |
| Stereomicroscope | Olympus | SZX16 | |
| Temperature controllable drying chamber | this lab | ||
| Synchronized dual-polarity time-of-flight imaging mass spectrometer (DP-TOF IMS) | this lab | ||
| MALDI-TOF stainless steel sample target | this lab |
References
- Karas, M., Hillenkamp, F. Laser Desorption Ionization of Proteins with Molecular Masses Exceeding 10000 Daltons. Anal. Chem. 60, 2299-2301 (1988).
- Beavis, R. C., Chait, B. T. Velocity Distributions of Intact High Mass Polypeptide Molecule Ions Produced by Matrix Assisted Laser Desorption. Chem. Phys. Lett. 181, 479-484 (1991).
- Beavis, R. C., Chaudhary, T., Chait, B. T. Alpha-Cyano-4-Hydroxycinnamic Acid as a Matrix for Matrix-Assisted Laser Desorption Mass-Spectrometry. Org. Mass Spectrom. 27, 156-158 (1992).
- Ehring, H., Karas, M., Hillenkamp, F. Role of Photoionization and Photochemistry in Ionization Processes of Organic-Molecules and Relevance for Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization Mass-Spectrometry. Org. Mass Spectrom. 27, 472-480 (1992).
- Strupat, K., Karas, M., Hillenkamp, F. 2,5-Dihydroxybenzoic Acid - a New Matrix for Laser Desorption Ionization Mass-Spectrometry. Int. J. Mass Spectrom. Ion Process. 111, 89-102 (1991).
- Hu, H., Larson, R. G. Evaporation of a Sessile Droplet on a Substrate. J. Phys. Chem. B. 106, 1334-1344 (2002).
- Deegan, R. D., et al. Capillary Flow as the Cause of Ring Stains from Dried Liquid Drops. Nature. 389, 827-829 (1997).
- Hu, J. -B., Chen, Y. -C., Urban, P. L. Coffee-Ring Effects in Laser Desorption/Ionization Mass Spectrometry. Anal. Chim. Acta. 766, 77-82 (2013).
- Schwartz, S. A., Reyzer, M. L., Caprioli, R. M. Direct Tissue Analysis Using Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Mass Spectrometry: Practical Aspects of Sample Preparation. J. Mass Spectrom. 38, 699-708 (2003).
- Hu, H., Larson, R. G. Marangoni Effect Reverses Coffee-Ring Depositions. J. Phys. Chem. B. 110, 7090-7094 (2006).
- Bhardwaj, R., Fang, X., Attinger, D. Pattern Formation During the Evaporation of a Colloidal Nanoliter Drop: A Numerical and Experimental Study. New J. Phys. 11, 075020 (2009).
- Savino, R., Paterna, D., Favaloro, N. Buoyancy and Marangoni Effects in an Evaporating Drop. J Thermophys Heat Tr. 16, 562-574 (2002).
- Probstein, R. F. Surface Tension. in Physicochemical Hydrodynamics : An Introduction. , John Wiley & Sons. Ch. 10 305-361 (1994).
- Lai, Y. -H., et al. Reducing Spatial Heterogeneity of MALDI Samples with Marangoni Flows During Sample Preparation. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 27, 1314-1321 (2016).
- Hsiao, C. -H., et al. Comprehensive Molecular Imaging of Photolabile Surface Samples with Synchronized Dual-Polarity Time-of-Flight Mass Spectrometry. Rapid Commun. Mass Spectrom. 25, 834-842 (2011).
- Vorm, O., Roepstorff, P., Mann, M. Improved Resolution and Very High-Sensitivity in MALDI TOF of Matrix Surfaces Made by Fast Evaporation. Anal. Chem. 66, 3281-3287 (1994).
- Gabriel, S. J., Schwarzinger, C., Schwarzinger, B., Panne, U., Weidner, S. M. Matrix Segregation as the Major Cause for Sample Inhomogeneity in MALDI Dried Droplet Spots. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 25, 1356-1363 (2014).
- Mampallil, D., Eral, H. B., van den Ende, D., Mugele, F. Control of Evaporating Complex Fluids through Electrowetting. Soft Matter. 8, 10614-10617 (2012).
