Introduction
पेट adhesions, निशान ऊतक का एक रूप है कि सूजन के जवाब में पेट में फार्म हैं आमतौर पर सर्जरी या intraabdominal संक्रमण के बाद। Adhesions पुरानी पेट दर्द और बांझपन का एक प्रमुख कारण हैं, और छोटी आंत में रुकावट 1 का सबसे आम कारण हैं। Adhesions की उपस्थिति एक दूसरे पेट के ऑपरेशन और अधिक कठिन प्रदर्शन और जटिलताओं 2 की संभावना बढ़ जाती है बनाता है।
अनुसंधान के वर्षों के बावजूद, adhesions के गठन अंतर्निहित तंत्र खराब समझ रहते हैं। यह ज्ञात है कि पेरिटोनियल सतह के लिए एक प्रारंभिक चोट आतंच युक्त तरल पदार्थ है, जो फिर एक थक्का कि आंत और पेट की दीवार एक साथ 3 की सतहों बांधता रूपों में से एक रिसाव का कारण बनता है। बाद में, fibroblasts और अन्य कोशिकाओं चिपकने वाला अंतरिक्ष में विस्थापित और संयोजी ऊतक 4 छिपाना। साल के लिए महीनों में आसंजन रक्त वाहिकाओं और तंत्रिकाओं के विकास के द्वारा परिपक्व कई वाणिज्यिक उत्पादों मौजूद पेट की सर्जरी (जैसे, Seprafilm) के बाद adhesions के गठन को कम करने के लिए तैयार कर रहे हैं कि। इन सभी उत्पादों की यांत्रिक बाधाओं के रूप में कार्य और आंत्र के छोरों और पेट की दीवार 6.7 के बीच शारीरिक संपर्क को रोकने के द्वारा आसंजन गठन बंद करो। एक नियंत्रित परीक्षण है कि एक शल्य आसंजन बाधा adhesions 8 के गठन को कम कर देता से सबूत होने के बावजूद, कई सर्जनों anecdotally यांत्रिक बाधा उत्पादों की प्रभावशीलता के साथ निराश किया गया है। वर्तमान में कोई दवा आधारित विरोधी आसंजन चिकित्सा, जो सच है कि सटीक आसंजन गठन में शामिल प्रक्रियाओं को खराब समझ रहे हैं दर्शाता है। एक चिकित्सा है कि विशेष रूप से adhesions के गठन में शामिल घटनाओं है कि आसंजन के गठन में शामिल कर रहे हैं की एक बेहतर समझ की आवश्यकता होगी सेलुलर या आणविक एजेंटों के लक्ष्य का विकास करना। कई समूहआणविक मार्ग है कि आसंजन गठन 9-11 के लिए महत्वपूर्ण हो सकता है की पहचान की है। पशु मॉडलों adhesions के गठन के अध्ययन के लिए एक शानदार वातावरण प्रदान करते हैं। कई अध्ययनों से कई जानवरों, विशेष रूप से चूहे और माउस 6,12-14 में आसंजन की शल्य सृजन का वर्णन प्रकाशित किया गया है। माउस और ट्रांसजेनिक चूहों और माउस आधारित एंटीबॉडी की व्यापक उपलब्धता में फाइब्रोसिस का अध्ययन करने के साथ अपने अनुभव को देखते हुए, हम adhesions के अध्ययन के लिए हमारे मॉडल के रूप में माउस चुना है। इस के साथ साथ, हम तकनीक है कि हम reproducibly और मज़बूती से माउस में पेट adhesions बनाने के लिए विकसित किया है रिपोर्ट।
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Protocol
निम्नलिखित प्रोटोकॉल स्टैनफोर्ड विश्वविद्यालय संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) द्वारा अनुमोदित किया गया है और अनुसंधान जानवरों के उपयोग के संबंध में सभी संस्थागत नैतिक दिशा निर्देशों के अनुरूप है।
1. पेट adhesions की क्रिएशन
- एंटीबायोटिक चाउ आहार एक सप्ताह प्रक्रिया से पहले पर माउस शुरू करो।
- शल्य चिकित्सा उपकरणों और पूर्व गर्म खारा सिंचाई समाधान आटोक्लेव।
- माउस 2% साँस isoflurane का उपयोग anesthetize।
- एक बाल क्लिपर एक त्वरित आवेदन के बाद का उपयोग करना - लोमनाशक एजेंट की (5 से 10 सेकंड), पेट की सतह के बहुमत से बालों को हटा दें। अच्छी तरह से धीरे, गीला धुंध और, वैकल्पिक से पोंछते ध्यान से गर्म पानी में माउस के निचले आधे dunking द्वारा लोमनाशक एजेंट को हटा दें। अच्छी तरह से पशु सूखी।
- पशु के थूथन संवेदनाहारी नाक शंकु में रखें। पूरे शल्य चिकित्सा के दौरान, ध्यान से आर की निगरानीजरूरत के रूप में जानवर की espiratory दर और संवेदनाहारी के प्रवाह की दर titrate।
- हाइपोथर्मिया को रोकने के लिए इस तरह के एक हीटिंग पैड या एक वार्मिंग दीपक के रूप में एक वार्मिंग डिवाइस, का उपयोग करें।
- पेट prepping करने से पहले, टेप के स्ट्रिप्स के ऊपर और नीचे पेट रखा सर्जरी के दौरान स्थानांतरण से माउस को रोकने के लिए माउस के साथ सुरक्षित है। betadine के साथ पेट कीटाणुरहित, तो 70% इथेनॉल के साथ पालन करें। प्रस्तुत करने में जितना संभव हो उतना क्षेत्र, मुंडा क्षेत्र के किनारों पर बाल सहित शामिल करें। माउस पर एक बाँझ कपड़ा रखें। (चित्रा 1)
- Subcutaneously 0.1 मिलीग्राम / किलो buprenorphine, या एक 30 ग्राम माउस के लिए 3 माइक्रोग्राम इंजेक्षन।
- त्वचा चीरा।
- पेट के निचले भाग midline में शुरू, संदंश के साथ त्वचा समझ और त्वचा तेज कैंची का उपयोग करने में एक उथले खड़ी काट कर।
- कैंची से xyphoid के लिए ले जाने कटौती से ऊंचा। केवल त्वचा में प्रवेश करने के लिए ध्यान रखना।
- पेट की मांसलता n है के रूप मेंओउ दिखाई विसरा को कवर, संदंश के साथ मांसलता के midline समझ और बहुत सावधानी से तेज कैंची का उपयोग कर इसे में एक छोटे से काट कर। यकीन है कि गलती से एक उदर अंग में कटौती करने के लिए नहीं करें।
- एक छोटे से कट के साथ पेरिटोनियल अंतरिक्ष में प्रवेश करने और मांसपेशियों परत पेट अंगों से दूर खींच देखने के बाद, उद्घाटन में कैंची डालने और ध्यान से दोनों दिशाओं में कटौती करके ऊंचा और हीन होकर कटौती का विस्तार। xyphoid से ऊंचा करने के लिए हीन होकर मूत्राशय के ऊपर चीरा बढ़ाएँ। (चित्रा 2)
- अब जब कि आंतों सामने आ रहे हैं, अंधान्त्र लगाने और धीरे इसे अमल में। दांतेदार या तेज संदंश के साथ cecum लोभी से बचें। इसके बजाय इस तरह के एक Adson दाँतेदार संदंश के रूप में एक atraumatic संदंश का उपयोग करें।
- sandpaper के साथ अंधान्त्र नष्ट करना।
- धीरे 30 के लिए 100 धैर्य sandpaper के साथ अंधान्त्र के दोनों पक्षों की पूरी सतह नष्ट करना - 60 सेकंड तक सतह कम चमकदार और petechiae appea हो जाता हैसतह पर आर। अगर सर्जन दाएँ हाथ है, यह टिप सही करने के लिए का सामना करना पड़ के साथ अंधान्त्र उन्मुख और सर्जन के बाईं तर्जनी से अधिक अंधान्त्र कपड़ा में मदद करता है। (चित्रा 3)
- sanding धीरे प्रदर्शन, यह गलती से पतली cecal दीवार का एक छेदों पैदा करने के लिए आसान है। कुरकुरापन की एक छोटी राशि के रूप में sandpaper cecal सतह के साथ ले जाया जाता है महसूस किया जाना चाहिए। sandpaper बार बार अंधान्त्र पर पकड़ महसूस किया है, तो यह संभावना cecal दीवार में एक आंसू का कारण होगा। ध्यान से देखो कि यह सुनिश्चित करने sandpaper के कणों को बेदखल और पेट में ही रहते हैं, के रूप में इस अत्यधिक विदेशी शरीर की प्रतिक्रिया पैदा कर सकता है।
- cecal दीवार में एक आंसू होता है, तो प्रक्रिया को समाप्त करने और पशु euthanize।
- एक cecal रक्त वाहिका sandpaper के द्वारा sheared जाता है और रक्तस्राव का कारण बनता है, तो धुंध के साथ अप करने के लिए दो मिनट के लिए दबाव पकड़। हालांकि, अगर खून बह रहा है इस समय के बाद बनी रहती है, चारों ओर एक आंकड़ा के-आठ 7-0 monofilament सीवन जगहरक्तस्राव के बिंदु। यह मज़बूती से लगभग सभी मामलों में रक्तस्राव बंद हो जाएगा। देखभाल सिवनी में cecal दीवार की एक बड़ी राशि को शामिल नहीं करने के लिए ले लो, के रूप में इस दीवार का हिस्सा शामिल की नेक्रोसिस के कारण जोखिम।
- सही पेट sidewall चोट लगी है।
- सही पेट sidewall की पेशी के पेरिटोनियल सतह नष्ट करना करने के लिए sandpaper की एक पट्टी का प्रयोग करें। sanding के साथ की तुलना में यहां अंधान्त्र पर और अधिक आक्रामक हो सकता है और जब तक सही पेट sidewall की पूरी सतह ऊपर roughed प्रकट होता है जारी है। इतनी मेहनत sanding है कि त्वचा में पेशी परत में उद्घाटन के माध्यम से दिखाई दे रहा है से बचें। (चित्रा 4)
- एक कास्त्रो-Viejo सुई ड्राइवर का उपयोग करना, सही पेट की मांसपेशियों sidewall परत में दो और चार आंकड़ा के-आठ 4-0 के बीच रेशम टांके जगह है। पूंछ के बारे में 5 मिमी लंबे छोड़ दें। नहीं गलती से सिवनी में आंत्र दीवार को पकड़ने के लिए ध्यान रखना। (चित्रा 5)
- एक 10 मिलीलीटर डब्ल्यू भरी सिरिंज का प्रयोगith खारा गरम, आंतों में कई बार सिंचाई। उदर गुहा में खारा की धारा प्रत्यक्ष आंतरिक की सिंचाई के लिए भी है। माउस के नीचे की सतह से लथपथ हो जाता है, पर माउस ले जाएँ या आदेश हाइपोथर्मिया से बचने के लिए सतह की जगह।
- अतिरिक्त सिंचाई सोख एक बाँझ धुंध चीरा पर रखा प्रयोग करें।
- स्टार्च की एक चुटकी ले लो और सही पेट sidewall की सतह पर और अंधान्त्र के दोनों किनारों पर छिड़के। (चित्रा 6)
- सुनिश्चित करें कि कोई सक्रिय खून बह रहा है कि वहाँ बनाओ। अगर वहाँ है, रक्तस्राव के बिंदु पर सीधे दबाव लागू करने के लिए जब तक यह बंद हो जाता है एक धुंध स्पंज का उपयोग करें। खून बह रहा है आसानी से बंद नहीं करता है, तो एक hemostatic सीवन के रूप में ऊपर वर्णित जगह है।
- संदंश और एक उंगली की कुंद अंत का प्रयोग, धीरे उदर गुहा में वापस आंतों धक्का। आदेश आसंजन गठन को अधिकतम करने के अधिकार पेट sidewall में टांके के बगल में अंधान्त्र स्थिति।
- सीपेट चीरा खो देते हैं।
- 6-0 absorbable लट सीवन का उपयोग कर, चीरा के शीर्ष पर पहलवान परत में चल रहे एक सिलाई जगह है।
- सीवन चीरा के नीचे की ओर नीचे चला, मांसपेशियों परत को एक साथ लाने। के बारे में 3 मिमी से यात्रा करते हैं और प्रत्येक नए सिलाई के साथ 3 मिमी काटने ले। ख्याल रखना गलती जबकि टांके रखने आंत का एक टुकड़ा लेने के लिए नहीं।
- चीरा के नीचे, पिछले काटने से सीवन के एक पाश छोड़ दो और साधन के लिए इस का उपयोग सीवन टाई। सिवनी 5 मिमी पूंछ छोड़ने कट।
- त्वचा को बंद करने के लिए 6-0 नायलॉन monofilament सीवन के साथ ऊपर तीन चरणों को दोहराएँ।
- एक 20 मिलीग्राम / किग्रा चमड़े के नीचे खारा सांस (30 ग्राम माउस के लिए मोटे तौर पर 0.5 मिलीलीटर) प्रशासन।
- एक सूखी धुंध का उपयोग करना, अच्छी तरह से पूरे पशु, के रूप में पृष्ठीय फर सिंचाई के दौरान गीला हो जाता है सूखी।
- शिथिल चिपकने वाला एक चीरा कवर करने के लिए पेट के आसपास ड्रेसिंग लपेटो। एक विवश करने के लिए नहीं ख्याल रखनानिमल के पैर या ड्रेसिंग के साथ सांस लेने यांत्रिकी।
- ध्यान से पशु की निगरानी के रूप में यह संज्ञाहरण से ठीक हो जाए। दर्द नियंत्रण के लिए प्रक्रिया के बाद buprenorphine 2-3 दिनों के लिए हर 12 घंटा प्रशासन।
2. फसल काटने आसंजन ऊतक
- प्रारंभिक सर्जरी के बाद सात दिनों की एक न्यूनतम रुको। फिर, शल्य चिकित्सा उपकरणों आटोक्लेव और isoflurane के साथ माउस anesthetize।
- 70% इथेनॉल के बाद betadine के साथ पेट जीवाणुरहित। दाढ़ी और पेट इतना है कि आसंजन त्वचा युक्त नमूना बालों में शामिल नहीं किया जाएगा, जो ऊतक विज्ञान और अधिक कठिन बना देता है के दाईं ओर से अतिरिक्त बाल बाल हटाना।
- एक छोड़ दिया paramedian चीरा का प्रयोग करें, क्योंकि आंत्र अक्सर मूल चीरा के लिए अटक गई है। पेट के निचले अंत में शुरू, मूल चीरा के नीचे के बाईं ओर के बारे में 5 मिमी, छोटे दांतेदार संदंश के साथ त्वचा समझ और तेज कैंची के साथ त्वचा में कटौती। बढ़ाएँ इस बेहतर कटौतीLy ribcage करने के लिए। (चित्रा 7)
- कैंची का प्रयोग, मांसल परत में और पेरिटोनियल अंतरिक्ष में प्रवेश करने के बाद कटौती, ऊपर और नीचे करने के लिए चीरा की कटौती का विस्तार। वहाँ चिपकने वाला ऊतक मूल चीरा को पेट के सही sidewall का पालन करना और संभवतः भी करने के लिए Cecum और छोटी आंत के कारण होगा। (8 चित्रा)
- अंधान्त्र के स्तर से ऊपर कैंची का प्रयोग और चीरा के किनारे पर शुरू, क्षेत्र है जहां आंत्र पक्षपाती है चारों ओर एक घेरे में पेट की दीवार में कटौती शुरू करते हैं।
- ऊपर बारी और अंधान्त्र के स्तर से नीचे, धीरे-धीरे आसंजन सभी तरह के आसपास कटौती और चक्र पूरा, एक त्वचा और आंत्र के लिए पेट की दीवार पक्षपाती की "द्वीप" उपज। (9 चित्रा)
- फिर कैंची का प्रयोग, आंत्र में कटौती और आंत्र के बाकी हिस्सों से पक्षपाती भाग को अलग, कि त्वचा और पेट की दीवार के होते हैं ऊतक के एक सैंडविच से बेदखलएक तरफ, दूसरी तरफ आंत्र, और चिपकने वाला ऊतक पर बीच में दो को जोड़ने। (चित्रा 10)
- वैकल्पिक रूप से, एक उठाई कैंची का उपयोग तेजी से पेट की दीवार पेशी से त्वचा को अलग करने के लिए। ऊतक विज्ञान के लिए त्वचा जुड़ी छोड़ने पर विचार, लेकिन पाचन और सेल अलगाव के लिए त्वचा हटाया जा सकता है। ऊतक ऊतक विज्ञान के लिए इस्तेमाल किया जाएगा, तो जरूरत से ज्यादा चिपकने वाला इंटरफेस परेशान करने के बिना संभव के रूप में के रूप में ज्यादा सिवनी सामग्री को हटाने के लिए सुनिश्चित करें। पाचन और सेल अलगाव के लिए यह रूप में लंबे समय के रूप में ऊतक डाइजेस्ट फ़िल्टर किया जाता है जगह में टांके छोड़ने के लिए स्वीकार्य है।
- आसंजन ऊतक excising के बाद, एक मानवीय तरीका अपने संस्थागत पशु उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित का उपयोग कर माउस euthanize।
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Representative Results
सर्जरी, Cecum और संभवतः आरोही पेट, जिगर, और छोटी आंत के छोरों के बाद सात दिनों में सही तरफा पेट की दीवार के अनुयायी होना चाहिए। (8 चित्रा) Excised ऊतक एम्बेडेड जा सकता है और sectioned और उत्कृष्ट ऊतकीय स्लाइड निकलेगा। (चित्रा 11, 12)
जब प्रक्रिया ठीक से किया जाता है, चूहों की 100% सात दिनों में पर्याप्त adhesions होनी चाहिए। मृत्यु दर 5% से कम होना चाहिए।
चित्रा 1: सर्जरी के लिए तैयारी (क) जानवर टेप और पेट betadine के साथ तैयार के साथ सुरक्षित किया गया है (ख) betadine एक शराब झाड़ू के साथ मंजूरी दे दी है और एक बाँझ कपड़ा रखा गया है।।।ओम / फ़ाइलें / ftp_upload / 54450 / 54450fig1large.jpg "लक्ष्य =" _blank "> यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 2:।। चीरा चीरा xyphoid को मूत्राशय के स्तर से विस्तार करना चाहिए यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 3:। Cecum के घर्षण (क) टिप सही करने के लिए इशारा कर के साथ बाईं तर्जनी से अधिक अंधान्त्र कसकर अंधान्त्र के आधार बाएं अंगूठे से स्थिर किया जा करने के लिए अनुमति देता है (ख) sanding का एक उचित स्तर छोड़ देता है। किसी न किसी सतह उस के साथ अंधान्त्र कम चमकदार पहले की तुलना में, और खून बह रहा है के कई petechial अंक के साथ है। के रूप में जहाजों यहाँ सबसे तेज खून बहाना होगा अतिरिक्त देखभाल, जबकि mesenteric पक्ष के पास sanding लिया जाना चाहिए। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 4:। पेट की दीवार के घर्षण विसरा तरफ बह रहे हैं और जब तक यह किसी न किसी तरह प्रतीत होता है मांसपेशियों की दीवार की सतह पेरिटोनियल रेत से भरा है। रक्त वाहिका सिर्फ पेट की दीवार अक्सर सामना करना पड़ा है sandpaper के ऊपर देखा लेकिन काफी खून नहीं होगा। कृपया यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 5:।। चित्रा के-आठ सिवनी की नियुक्ति पेशी दीवार में रखा एक रेशम आंकड़ा के आठ सिवनी, नीचे बंधे होने से पहले यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 6:। स्टार्च के आवेदन स्टार्च की एक प्रकाश परत पेट sidewall और आंत्र पर छिड़का जाता है। दो आंकड़ा के-आठ टांके पेशी दीवार में देखा जाता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 7: दूसरी सर्जरी के लिए चीरा (क) चीरा सिर्फ मूल चीरा के बाईं ओर शुरू कर दिया है (ख) नई चीरा ribcage को मूत्राशय के स्तर से विस्तार करना चाहिए।।। का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें यह आंकड़ा।
8 चित्रा:। छोटी आंत (एसबी) के आसंजन लूप्स सही sidewall करने के लिए और एक दूसरे के अनुयायी हैं। मूल midline चीरा, अब चंगा किया, देखा जाता है (इंक)। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 10:। नमूना आंत्र पार काटने दूसरी तरफ एक तरफ (क) और त्वचा पर आंत्र के साथ ऊतक के एक सैंडविच निकलेगा (ख)। सिवनी दिखाई दे के टुकड़े यदि नमूना ऊतक विज्ञान के लिए इस्तेमाल किया जा रहा है हटाया जाना चाहिए। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 11:। प्रोटोकॉल एक hematoxylin और eosin (एच एंड ई) सर्जरी दिखा त्वचा और पेट की दीवार (नीचे) के बाद सात दिनों में एक आसंजन की धारा दाग अंधान्त्र (ऊपर) के लिए चिपकने वाला इंटरफेस के माध्यम से जुड़ा। इस प्रारंभिक समय बिंदु पर अंधान्त्र संभावना मुख्य रूप से आतंच और अन्य अणुओं के माध्यम से पेट की दीवार का पालन किया है, और पर्याप्त निशान ऊतक अभी तक गठन नहीं किया है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 12: Immunofluorescent इमेजिंग सर्जरी के बाद immunofluorescently α-चिकनी मांसपेशियों एसी के लिए दाग सात दिनों में आसंजन का एक वर्ग।टिन, त्वचा बालों के रोम (बाएं) का असली धुंधला और cecal पेशी दीवार (मध्य), और cecal luminal सतह (दाएं) के गैर विशिष्ट धुंधला दिखा। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
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Discussion
इस प्रक्रिया में महत्वपूर्ण कदम उठाए हैं: अच्छी तरह से, वेध के कारण पेट की sidewall में टांके रखने, और स्टार्च की सही मात्रा में लागू किए बिना अंधान्त्र abrading। केवल sandpaper लागू अंधान्त्र के लिए, या आंत के एक छोटे से हिस्से को विशिष्ट। छोटी आंत की बड़ी मात्रा पर sandpaper के व्यापक उपयोग महत्वपूर्ण आन्त्रावरोध का कारण बन जाता है। पर्याप्त बल के साथ अंधान्त्र कि सतह किसी न किसी हो जाता है नष्ट करना के लिए ध्यान रखना है, लेकिन इतना नहीं कि दीवार आँसू। इस संतुलन को खोजने के लिए कुछ समय ले सकते हैं। हमेशा आंत सावधानी से संभाल और आंत्र हेरफेर करने के लिए तेज या दांतेदार संदंश का उपयोग करने से बचें। यह गलती संदंश के साथ छोटी आंत अन्त्रपेशी हथियाने के द्वारा या भी जबरदस्ती आंत्र पर खींच कर खून बह रहा हो करने के लिए आसान है।
एक आंसू cecal दीवार में होता है, तो प्रक्रिया समाप्त किया जाना चाहिए और पशु euthanized। हमारे अनुभव में, कुछ दिनों के बाद पशु की मौत में cecal आंसू परिणाम है, भले ही आंसू repa हैअच्छी तरह से iRed। इसके अलावा, cecal दीवार के आंसू मल के बहाव है कि एक अप्रत्याशित तरीके से भड़काऊ प्रतिक्रिया को प्रभावित करेगा कारण होगा।
रक्तस्तम्भन प्रक्रिया के अंत में पूरा किया जाना चाहिए। कुछ खून बह रहा वाहिकाओं को फिर से खुल जाएगा और बंद कर दिया है प्रदर्शित होने के बाद खून करने के लिए शुरू करते हैं। जब संदेह में, खून बह रहा है के बिंदु के आसपास एक absorbable monofilament चित्रा के-आठ सिवनी जगह है। सिवनी के इस प्रकार के रेशम या लट absorbable सीवन के लिए बेहतर है क्योंकि यह, हालांकि न्यूनतम प्रतिरोध के साथ ऊतक निकाला जा सकता है। हालांकि हमने पाया है कि रेशम या लट absorbable सीवन, adhesions उत्प्रेरण के लिए पेट sidewall में सबसे प्रभावी है के रूप में monofilament कम भड़काऊ है।
प्रक्रिया के अंत में स्टार्च के आवेदन adhesions के गठन बढ़ाने में मदद करता है, लेकिन हमें पता चला है कि स्टार्च का एक अत्यधिक राशि एक भड़काऊ प्रतिक्रिया है कि मौत का कारण बनता कारण होगा। स्टार्च lightl पर छिड़का जाना चाहिएवाई। वहाँ इतना है कि यह एक ठोस परत रूपों नहीं होना चाहिए।
जब पहली बार इस प्रक्रिया सीखने, यह कई चूहों कम करने के लिए आम बात है। हमारे अनुभव में मौत का सबसे आम कारण आंतों वेध के कारण आंत की पीढ़ी जोरदार घर्षण, और पूति की वजह से आन्त्रावरोध के कारण पानी की कमी है। रक्तस्राव की वजह से मौत हो सकता है यदि पूरा रक्तस्तम्भन सर्जरी के अंत में हासिल नहीं है।
अगर आसंजन गठन अपर्याप्त है, Cecum और सही sidewall के अधिक आक्रामक घर्षण का उपयोग पर विचार अधिक स्टार्च छोड़ रहा है, या पेट sidewall पर अधिक टांके रखकर। हमारे अनुभव में, पर्याप्त आसंजन के गठन से भी कम समय में पेट परिणामों को फिर से खोलने से पहले कम से कम एक सप्ताह के लिए इंतज़ार कर रहे। दूसरी ओर, यदि सर्जरी के बाद चूहों की मृत्यु दर अधिक है, अंधान्त्र की कम आक्रामक घर्षण का उपयोग पर विचार रक्तस्तम्भन के लिए और अधिक बारीकी से निरीक्षण, और कम स्टार्च आवेदन। यह भी ध्यान से नजर रखने के लिए महत्वपूर्ण हैसर्जरी के दौरान माउस के श्वसन दर। एक बार इस प्रक्रिया के साथ सर्जन लाभ अनुभव, मृत्यु दर 10% से कम होना चाहिए।
यह तकनीक मुख्य रूप Cecum और सही पेट sidewall के बीच adhesions के लिए फार्म बनाया गया है। Adhesions भी अक्सर छोटी आंत, लीवर, और midline चीरा के बीच बनेगी। इस तकनीक का उपयोग आमतौर पर पेट के बाईं ओर adhesions कारण नहीं होगा। इस तकनीक की एक सीमा है कि आंत और पेट की दीवार के बीच adhesions अधिक आंत्र के छोरों के बीच adhesions से फार्म की संभावना है। इसके अलावा, यह चिपकने वाला ऊतक है, जो अक्सर मनुष्य जो एकाधिक सर्जरी पड़ा है में देखा जाता है की एक पूरी तरह से जमे हुए पेट भरा में परिणाम की संभावना नहीं है।
के रूप में शुरूआत में चर्चा की, कई तकनीकों चूहों और अन्य प्रजातियों, विशेष रूप से चूहे में पेट adhesions के उत्पादन के लिए, साहित्य 6,12-14 में वर्णित किया गया है। अब तक कम प्रकाशित protoco रहे हैं चूहों में adhesions के निर्माण के लिए LS। हम सोचते हैं कि क्योंकि चूहों में adhesions के निर्माण के चूहों की तुलना में अधिक मुश्किल है, सबसे जांचकर्ताओं चूहे में उनकी तकनीक विकसित करने के लिए चुना है। हालांकि, ट्रांसजेनिक चूहों और विरोधी माउस एंटीबॉडी का अधिक से अधिक उपलब्धता की वजह से, हमें विश्वास है कि यह अधिक से अधिक तकनीकी कठिनाई के बावजूद, चूहों में आसंजन निर्माण के लिए एक मजबूत मॉडल के लिए मूल्यवान है। हम प्रकाशित चूहे प्रोटोकॉल की कई कोशिश के बाद इस प्रोटोकॉल विकसित की है। हमने पाया है कि इस तरह के अंधान्त्र पर विद्युतदहनकर्म के उपयोग के रूप में चूहे adhesions, बनाने के लिए तरीके, अक्सर चूहों मरने के लिए कारण। हम इस तरह के sidewall इस्कीमिक बटन अकेले रखने, या केवल अंधान्त्र abrading रूप तकनीकों है कि एक भी हस्तक्षेप का उपयोग करें, द्वारा उत्पादित adhesions के घनत्व से संतुष्ट नहीं थे। तकनीक हम यहाँ पेश हस्तक्षेप कि हमने पाया परीक्षण और त्रुटि के माध्यम से, adhesions मृत्यु दर को कम करने के लिए लगातार जबकि उत्पादन करने के लिए एक संयोजन का प्रतिनिधित्व करता है।
सामग्री "> क्योंकि इस तकनीक को लगातार Cecum और sidewall के बीच फार्म के लिए चिपकने वाला ऊतक का कारण बनता है, हम मानते हैं कि यह आसंजन गठन को कम करने के लिए डिज़ाइन परीक्षण हस्तक्षेप करने के लिए आदर्श है। इसके अलावा इस तकनीक आणविक रास्ते और सेल प्रकार के होते हैं कि पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता आसंजन के गठन में शामिल किया गया। आसंजन ऊतक आसानी से excised जा सकता है और ऊतक विज्ञान के लिए तैयार है, और पैदावार उत्कृष्ट ऊतकीय छवियों (आंकड़े 11, 12)।कुछ शोधकर्ताओं का एक मॉडल है जिसमें adhesions फार्म समय की कम से कम 100% की इच्छा हो सकती है। स्टार्च के आवेदन को छोड़ते हुए लगभग 80% करने के लिए आसंजन दर कम हो जाएगा। सही पेट sidewall में रखा रेशम टांके की संख्या कम आसंजन दर आगे कम हो जाएगा।
हमारे अनुभव में, सर्जरी के बाद दिन में सात पहली बार इस मुद्दे पर जहां आंत्र लगातार पेट की दीवार के अनुयायी है। हालांकि, अन्य समय अंक अधिक प्रासंगिक आधार पर हो सकता हैपरियोजना का ध्यान केंद्रित पर। उदाहरण के लिए, आसंजन अंतरिक्ष में neutrophils और मैक्रोफेज के प्रवास में रुचि शोधकर्ताओं सर्जरी के बाद पहले पांच दिनों में ऊतक फसल के लिए चाहते हो सकता है। दूसरी ओर, fibroblasts द्वारा कोलेजन के बयान प्रारंभिक चोट के बाद सप्ताह के लिए जगह लेता है, और इस के लिए यह सर्जरी के बाद कई हफ्तों के लिए बाहर दूरी समय बिंदुओं पर जांच करने के लिए ऊतक अधिक उपयुक्त होगा।
सर्जिकल loupes शल्य चिकित्सा क्षेत्र की बढ़ाई के लिए बहुत उपयोगी है, जबकि इस प्रक्रिया का प्रदर्शन कर रहे हैं। एक ऑपरेटिव माइक्रोस्कोप भी इस्तेमाल किया जा सकता है, लेकिन सर्जन के विभिन्न कोणों से सहकारी क्षेत्र का निरीक्षण करने की क्षमता की सीमा। प्रक्रिया भी सब पर कोई बढ़ाई के साथ किया जा सकता है।
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Disclosures
लेखकों घोषणा की कि वे कोई प्रतिस्पर्धा वित्तीय हितों की है कि।
Acknowledgments
सीडीएम सर्जन के अमेरिकन कॉलेज (एसीएस) निवासी अनुसंधान छात्रवृत्ति के द्वारा समर्थित किया गया। MSH पुनर्योजी चिकित्सा के लिए कैलिफोर्निया इंस्टीट्यूट (सीआईआरएम) क्लीनिकल फैलो प्रशिक्षण अनुदान TG2-01159 द्वारा समर्थित किया गया। MSH, एचपीएल, और MTL मैक्सिलोफेशियल सर्जन के अमेरिकन सोसायटी (ASMS) / मैक्सिलोफेशियल सर्जन फाउंडेशन (एमएसएफ) अनुसंधान अनुदान पुरस्कार द्वारा समर्थित थे। एचपीएल एनआईएच अनुदान R01 GM087609 और एंथोनी शू के सम्मान में इंग्रिड लाइ और बिल शू से एक उपहार के द्वारा समर्थित किया गया। एचपीएल और MTL बाल चिकित्सा पुनर्योजी चिकित्सा के लिए Hagey प्रयोगशाला और ओक फाउंडेशन द्वारा समर्थित थे। MTL गुन / ओलिवर कोष द्वारा समर्थित किया गया।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Fisherbrand Absorbent Underpads, 20" x 24" | Fisher Scientific | 14-206-62 | |
| Polylined Sterile Field, 18" x 24" | Busse Hospital Disposables | 696 | Cut a rectangular hole of the appropriate size |
| Isothesia isoflurane | Henry Schein | 050033 | |
| Fisherbrand Sterile cotton gauze pad, 4" x 4" | Fisher Scientific | 22-415-469 | |
| Puralube petrolatum ophthalmic ointment, 1/8 oz. tube | Dechra Veterinary Products | NDC 17033-211-38 | |
| Nair depilatory cream | Church & Dwight Co. | 22339-05 | |
| Buprenex buprenorphine 0.3 mg/ml | Reckitt Benckiser Pharmaceuticals Inc. | NDC 12496-0757-5 | |
| 1 cc insulin syringe, 27 G | Becton Dickinson | 329412 | |
| Povidone Iodine Prep Solution | Medline | MDS093944H | |
| Webcol alcohol prep swabs | Covidien | 6818 | |
| General-Purpose Labarotory Labeling tape | VWR | 89097-912 | |
| BioGel PI surgical gloves | Mölnlycke Health Care | ALA42675Z | |
| Micro Forceps with teeth | Roboz | RS-5150 | |
| Fine scissors- sharp | Fine Science Tools | 14060-09 | |
| Straight serrated forceps | Fine Science Tools | 11050-10 | |
| Castro-Viejo needle driver | Fine Science Tools | 12565-14 | |
| 100 grit 1/4 sheet sandpaper | ACE Hardware | 1010446 | Cut into strips |
| 4-0 silk suture, 30", SH needle | Ethicon | K831 | |
| 7-0 PDS II absorbable monofilament suture, 30", BV-1 needle | Ethicon | Z135 | Usually comes double-armed. Cut the suture at the midway point to generate two usable sutures. |
| Rice starch | MP Biomedicals | 102955 | |
| 0.9% Sodium Chloride Irrigation | Baxter | BHL2F7121 | Warm to 37 °C prior to use |
| 10 ml syringe | Becton Dickinson | 309604 | |
| 6-0 Vicryl absorbable braided suture, 18", RB-1 taper needle | Ethicon | J212H | |
| 6-0 Ethilon nylon monofilament suture, 18", P-3 needle, | Ethicon | 1698G | |
| Tegaderm Transparent Film Dressing Frame Style, 6 cm x 7 cm | 3M | 1624W | Cut in half lengthwise |
References
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