Algen-Enumeration über kultivierbarer Methodik

Environmental Microbiology

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Overview

Quelle: Labors von Dr. Ian Pfeffer und Dr. Charles Gerba - Arizona University
Demonstrierende Autor: Bradley Schmitz

Algen sind eine sehr heterogene Gruppe von Mikroorganismen, die eine Gemeinsamkeit, nämlich den Besitz der photosynthetische Pigmente haben. In der Umgebung können Algen für Schwimmbad-Besitzer Probleme durch den Anbau von im Wasser. Algen können auch Probleme verursachen, in den Gewässern wie Seen und Stauseen, durch Algenblüten, die Giftstoffe freisetzen. In jüngerer Zeit, werden Algen als neuartige Energiequellen über Algen Biokraftstoffe evaluiert. Blau - grüne Algen sind eigentlich Bakterien als Cyanobakterien eingestuft. Cyanobakterien nicht nur Photosynthese, sondern haben auch die Fähigkeit, Stickstoff aus der Atmosphäre zu beheben. Andere Algen sind eukaryotische, von einzelligen Organismen bis hin zu komplexen mehrzelligen Organismen wie Algen. Dazu gehören die grünen Algen, die Euglenoids der Dinoflagellaten, golden Braunalgen, Kieselalgen, die Braunalgen und die Rotalgen. In Böden, Algen Populationen sind häufig 106 pro Gramm. Diese Zahlen sind niedriger als die entsprechenden Zahlen für Pilze, Bakterien und Actinomyceten vor allem, weil das Sonnenlicht für die Photosynthese benötigt weit unterhalb der Bodenoberfläche nicht durchdringen kann.

Da Algen phototrophe sind, können Energiegewinnung aus Photosynthese und Carbon für Biomasse aus Kohlendioxid, sie im Wachstumsmedium besteht ausschließlich aus anorganischen Nährstoffen und ohne einen organischen Kohlenstoff-Substrat angebaut werden. Der Mangel an organisches Substrat verhindert das Wachstum von heterotrophen Bakterien. Verwenden eine anorganisches Wachstumsmedium, Algen ursprünglich in Erde oder Wasser kann durch die wahrscheinlichste Anzahl (MPN) Methode quantitated. Die MPN Methode beruht auf sukzessive verdünnen einer Probe, so dass die Algen sich zum Aussterben verdünnt werden. Das Vorhandensein von Algen in jeder Verdünnung richtet sich nach ein positiven Zeichen des Wachstums in der Mitte, in der Regel einen grünen Schleim von Algen, der Photosynthese entsteht. Einsatz von replizieren Rohren bei jeder Verdünnung und eine statistische Auswertung der Anzahl der Röhren positiv für Wachstum in einer bestimmten Verdünnung ermöglicht die Anzahl der Algen in der ursprünglichen Probe berechnet werden. MPN-Tabellen wurden entwickelt und veröffentlicht spezifisch für ein bestimmtes MPN-Design, einschließlich der Anzahl der Wiederholungen bei jeder Verdünnung verwendet.

Cite this Video

JoVE Science Education Database. Grundlagen der Umwelt-Mikrobiologie. Algen-Enumeration über kultivierbarer Methodik. JoVE, Cambridge, MA, (2017).

Procedure

  1. Wiegen Sie ein 10 g Probe des Bodens, die entweder gesammelt hat Feuchte aus dem Feld, oder hatte Wasser hinzugefügt, so dass es für 2-3 Tage feucht bleibt. Beachten Sie, dass der Boden feucht, aber nicht gesättigt sein sollte.
  2. Bereiten Sie ein 10-divisibel Verdünnungsreihen durch Zugabe von 10 g des Bodens in 95 mL geändert Bristol-Lösung (Abbildung 1). Um geändert Bristol Lösung zu erstellen, Folgendes in 1.000 mL Wasser auflösen: 0,25 g NaNO3, 0,025 g CaCl2, 0,075 g MgSO4 · 7H2O, 0,075 g K2HPO40,018 g KH2PO4, 0,025 g NaCl und 0,5 mg FeCl3.
  3. Die Verdünnung-Serie durch die Zugabe von 1 mL der Suspension A bis 9 mL Bristol-Lösung und zusätzliche sequentielle Verdünnungen weiter.
  4. Impfen Sie 5 replizieren Rohre jedes mit 9 mL geändert Bristol-Lösung mit 1 mL der Verdünnungen 10-2 bis 10-6 (Tabelle 1).
  5. Inkubieren Sie die verschlossene Rohre für bis zu 4 Wochen in einer Gegend, die dem Sonnenlicht ausgesetzt.
  6. Beobachten Sie die Rohre für Algenwachstum einmal alle 7 Tage. Rohre mit Algenwachstum erscheinen grün.

Figure 1
Abbildung 1. Wie erstelle ich ein 10-divisibel Verdünnungsreihe.

Rohr Verdünnung
B 10-2
C 10-3
D 10-4
E 10-5
F 10-6

Tabelle 1. Röhren und Verdünnungen.

Algen sind photosynthetischen Organismen, die in einer Vielzahl von Umgebungen leben. Im Labor und ihrer Konzentration aufgelistet, durch einfache Berechnungen kann Boden Wohnung Algen kultiviert werden.

Algen sind eine sehr heterogene Gruppe von Organismen, die eine Gemeinsamkeit, nämlich den Besitz der photosynthetische Pigmente, häufig Chlorophyll haben. Die überwiegende Mehrheit der Algen sind mikroskopisch, die genaue Definition der Gruppe ist jedoch umstritten, und umfasst auch Algen, die in der Regel makroskopischen sind.

In der Umgebung können Algen Probleme in den Gewässern wie Seen oder Stauseen, Bildung von Algenblüten, die dem Wasser Nährstoffe, blockieren leicht über der Wasseroberfläche übergeben und Giftstoffe zum Abbau. Die Möglichkeit, Algen in Proben aufzulisten ermöglicht es Wissenschaftlern, die Gesundheit des Ökosystems und das potenzielle Risiko von Algen Überwucherung zu bewerten.

Algen Populationen in Böden treten häufig bei rund 10.000 Zellen pro Gramm. Diese Zahlen sind in der Regel niedriger als entsprechende Konzentrationen von Bakterien, Pilzen oder Actinomyceten, wie benötigen Algen Sonnenlicht für die Photosynthese, die weit unterhalb der Bodenoberfläche nicht durchdringen können.

Dieses Video zeigen wie Sie Algen aus dem Boden im Labor Kultur und wie die Konzentration der Algen in der Ausgangspunkt Bodenprobe aufgelistet.

Algen haben positive Auswirkungen auf die Ökosysteme. Blau - grüne Algen oder Cyanobakterien, haben die Fähigkeit, Stickstoff aus der Atmosphäre, so dass sie nützlich bei der Erhöhung Boden Stickstoff in semi-ariden Umgebung sowie ein mögliches Instrument zur Erzeugung von Biokraftstoffen zu beheben.

Andere Algen sind eukaryotische und reichen von einzelnen-celled, komplexe vielzellige Organismen wie Algen. Dazu gehören Grünalgen, Euglenoids Dinoflagellaten und Kieselalgen, Braunalgen und Rotalgen.

Algen sind phototrophe, Energiegewinnung aus Photosynthese und Carbon für Biomasse aus Kohlendioxid. Infolgedessen können sie in den Medien völlig bestehend aus anorganischen Nährstoffen, ohne einen zusätzlichen organischen Kohlenstoff-Substrat angebaut werden. Dieser Mangel an organisches Substrat verhindert das Wachstum von heterotrophen Bakterien, die auf externen organischen Kohlenstoff für Wachstum angewiesen sind.

Kultur-Algen für die Enumeration, Boden Proben sind seriell verdünnt 10-6 g Boden pro mL, und kultiviert in Wachstumsmedien verzehnfacht. Mehrere Wiederholungen sind für jede Verdünnung gemacht. Sie werden dann in einem gut beleuchteten Raum für bis zu 4 Wochen Algenwachstum inkubiert.

Das Vorhandensein von Algen in jeder Verdünnung richtet sich nach ein positiven Zeichen des Wachstums in der Mitte, die in der Regel als einen grünen Schleim erscheint. Schließlich empirisch entwickelte MPN-Tabellen für Algenwachstum konzipiert werden konsultiert, ermöglicht dem Anwender die ursprüngliche Algen Konzentration basierend auf Wachstum in Verdünnung bestimmt repliziert. Die MPN-Methode stützt sich auf die serielle Verdünnung von Proben so, dass die Algen vom Aussterben bedroht verdünnt sind, was bedeutet, dass bei einigen Verdünnung kein Algenwachstum erfolgt.

Jetzt sind wir vertraut mit den Konzepten wächst und Auflisten von Algen aus Proben, werfen wir einen Blick auf wie dies im Labor durchgeführt wird.

Zu Beginn der Experiment, erste Gewicht, 10 Gramm für feuchten Boden, der entweder aus dem Bereich feucht gesammelt worden oder wurde rehydriert und blieb für 2 bis 3 Tage feucht. Der Boden sollte aber nicht gesättigt.

Als nächstes bereiten Sie eine zehnfache Verdünnungsreihen durch Zugabe von 10 Gramm Boden zuerst bis 95 mL Lösung modifiziert Bristol oder MBS. Dies als Suspension A. beschriften

Nach dem Schütteln kräftig, weiter die Verdünnungsreihe durch Zugabe von 1 mL der Suspension A bis 9 mL der MBS in einem Reagenzglas. Weiterhin die zehnfache Verdünnungsreihen noch 4 Mal Verdünnungen bis zu 10-6 g / mL.

Als nächstes impfen Sie 5 replizieren Röhren, jedes mit 9 mL von MBS mit 1 mL der einzelnen Verdünnungen 10-1 bis 10-5. Dies führt zu 5 Wiederholungen Rohre für jede Verdünnung von 10-2 bis 10-6. Die Rohre lose Kappe.

Inkubieren Sie die Rohre schließlich eine volle 4 Wochen in einer Gegend, die dem Sonnenlicht ausgesetzt. Beobachten Sie die Rohre für Algenwachstum einmal alle 7 Tage. Röhren, die ausstellenden Algenwachstum werden grün angezeigt.

Die meisten wahrscheinliche Anzahl oder MPN, Analyse ist eine häufig verwendete mathematische Methode aufzuzählenden Mikroorganismen von Verdünnung eine konzentrierte erste Substrat gewachsen. Durch die Berücksichtigung der Verdünnungsfaktoren der Lösungen und die Anzahl der Rohre, die bei jeder Verdünnung positive von Wachstum Anzeichen, kann die wahrscheinlichste Anzahl der Organismen pro Gramm des ursprünglichen Bodenprobe mit Hilfe MPN Tabelle und einer einfachen Formel berechnet werden.

Um MPN zu berechnen, ist die höchsten Verdünnung mit der höchsten Anzahl von positiven replizieren Röhren die Beschriftung von p1, in diesem Fall die Wiederholungen des Schlauches C. zugewiesen. Im Gegensatz dazu, einige der Röhren von D & E sind negativ, ohne Anzeichen von Algenwachstum.

Die Anzahl der Rohre in die nächsten beiden höhere Verdünnungen, die positive Wachstum zeigen werden als p2 und p3gekennzeichnet. Hier, p2 = D und p3 = E.

Der Wert für p1 finden Sie auf der Suche nach der ersten Spalte in der Tabelle MPN. Das gleiche sollte mit der Spalte p2 erfolgen. Schließlich wird der Wert p3, am oberen Rand verwendet, um die beiden festgelegten p1 und p2, um einen Wert für die wahrscheinlichste Anzahl der Organismen pro mL schneiden.

Als nächstes um die Konzentration von Organismen pro Gramm in der ursprünglichen Bodenprobe zu berechnen, diesen Wert durch die Konzentration des Bodens in der Verdünnung gliedert p2 zugewiesen wurde. Die folgende Gleichung wird verwendet, um die tatsächliche Zahl der Organismen pro Gramm Boden zu definieren.

Algen-Enumeration und MPN Analyse haben eine breite Palette von Anwendungen, von die einige hier erkundet werden.

Diese Kultivierung Methode Algen Enumeration kann in einer Vielzahl von Einstellungen verwendet werden. Es kann auf Flüssen oder Seen, um Algen zu bestimmen, und Bewertung der Risiken von schädlichen Algenblüten angewendet werden. Alternativ kann es verwendet werden, zu beurteilen, die Sauberkeit und Sicherheit des Wassers direkt von Menschen, einschließlich Schwimmbädern, Springbrunnen oder andere Trinkwasserquellen verwendet. Im Idealfall in Trinkwasser-Proben und Schwimmbäder gibt es keine Algen vorhanden.

Die MPN-Analyse für die Enumeration kann auch auf andere nicht-Algen Mikroorganismen angewendet werden. Beispielsweise kann die Wasserqualität mit Indikator-Organismen wie Coliformen oder E. Colibeurteilt werden. Hier können Proben kultiviert werden, mit Medien, die Chemikalien, die geändert werden, um Farbe oder Fluoreszenz im Beisein der Indikator-Organismen produzieren. Indem Sie mehrere kleine Wiederholungen des Experiments in Einzelzellen, mit Proben zu einer bekannten Konzentration verdünnt ausführen, kann das Verhältnis der positiven Zellen zu einer MPN Tabelle für den spezifischen Indikator Organismus und ab Konzentration in den Proben bestimmt verwiesen werden.

Algen können auch für kommerzielle Anwendungen kultiviert werden. Beispielsweise verwenden einige Arten von gezüchteten blau - grüne Algen, die als Symbionten mit Pflanzen, Unterstützung ihrer Befestigung und Aufnahme von Stickstoff, die besonders nützlich bei der Beihilfe Pflanzenwachstums in Bereichen mit mageren Böden ist fungieren können. Algen können in ähnlicher Weise für Biokraftstoffe oder als eine Quelle der Nährstoff reiche Nahrung für das Vieh angebaut werden.

Sie sah nur Jupiters Einführung in die Algenkultur und Enumeration. Sie sollten jetzt verstehen, wie, Bodenproben für Algenwachstum zu verwässern, wie Algen im Labor Kultur und wie die Algen Konzentration Schriftproben Start aufgelistet. Danke fürs Zuschauen!

Results

Abbildung 2 zeigt ein Beispiel der repräsentative Ergebnisse.

p 1 wird gewählt, um die Zahl replizieren Röhren der höchsten Verdünnung (zuletzt konzentriert im Boden), die die höchste von positiven Rohre Anzahl. Hier zählen die Wiederholungen von Rohr B nicht weil das Rohr C aus einer höheren Verdünnung sind. Im Gegensatz dazu ist die Anzahl der Röhren aus Rohr D, die ein positiven Zeichen des Wachstums zeigen weniger als die von Rohr C. Ja, p1 = 5.

p 2 und p3 sind gewählt, um die Anzahl der Rohre in die nächsten beiden höhere Verdünnungen, die ein positiven Zeichen des Wachstums zeigen. So, p2 = 3 und p3 = 1.

Der Wert für p1 finden Sie auf der Suche nach der ersten Spalte in Tabelle 2unten. Das gleiche Verfahren wird in der Spalte p2 . Dann schneidet der Wert p3 (ganz oben) die beiden definiert durch die Werte von p1 und p2. In diesem Beispiel ist der Wert 1,1 Organismen pro mL.

Teilen Sie diesen Wert durch die Konzentration des Bodens in der Verdünnung, die Sie p2zugewiesen. In diesem Beispiel ist das Rohr D.

Equation 1

So gab es in diesem Beispiel 1.1 x 104 Algenzellen pro g des Bodens. Dieser Wert ist ziemlich typisch für die Anzahl der Algen im Boden gefunden.

Figure 2
Abbildung 2:  Hypothetische Ergebnis eines Algen Enumeration Experiments. Schattigen Rohre weisen auf das Vorhandensein von Algen. Ungeschwärzt Röhren repräsentieren das Fehlen von Algen.

Wahrscheinlichste Anzahl für die angegebenen Werte von p-3
P1 P2 0 1 2 3 4 5
0
0
0
0
0
0
0
1
2
3
4
5
--
0,018
0,037
0,056
0,075
0.094
0,018
0,036
0,055
0,074
0.094
0,11
0,036
0,055
0,074
0.093
0,11
0.13
0.054
0.0.73.
0,092
0,11
0.13
0,15
0.072
0.091
0,11
0.13
0,15
0,17
0.090
0,11
0.13
0,15
0,17
0,19
1
1
1
1
1
1
0
1
2
3
4
5
0,020
0,040
0.061
0.083
0,11
0.13
0,040
0.061
0.082
0.1
0.13
0,16
0.060
0.081
0.10
0.13
0,15
0,17
0.080
0.10
0.12
0,15
0,17
0,19
0.10
0.12
0,15
0,17
0,19
0,22
0.12
0,14
0,17
0,19
0,22
0,24
2
2
2
2
2
2
0
1
2
3
4
5
0,045
0,068
0.093
0.12
0,15
0,17
0,068
0,092
0.12
0,14
0,17
0,20
0.091
0.12
0,14
0,17
0,20
0,23
0.12
0,14
0,17
0,20
0,23
0.26
0,14
0,17
0,19
0,22
0,25
0.29
0,16
0,19
0,22
0,25
0,28
0,32
3
3
3
3
3
3
0
1
2
3
4
5
0,078
0,11
0,14
0,17
0.21
0,25
0,11
0,14
0,17
0.21
0,24
0.29
0.13
0,17
0,20
0,24
0,28
0,32
0,16
0,20
0,24
0,28
0,32
0,37
0,20
0,23
0,27
0,31
0,36
0,41
0,23
0,27
0,31
0,35
0,40
0,45
4
4
4
4
4
4
0
1
2
3
4
5
0.13
0,17
0,22

0,34
0,41
0,17
0.21
0.26
0,33
0,40
0,48
0.21
0.26
0,32
0,39
0,47
0,56
0,25
0,31
0,38
0,45
0,54
0.64
0,30
0,36
0,44
0,52
0,62
0,72
0,36
0,42
0,5
0,59
0.69
0.81
5
5
5
5
5
5
0
1
2
3
4
5
0,23
0,33
0.49
0.79
1.3
2.4
0,31
0,46
0,7
1.1
1.7
3.5
0,43
0.64
0.95
1.4
2.2
5.4
0,58
0,84
1.2
1.8
2.8
9.2
0,76
1.1
1.5
2.1
3.5
16
0.95
1.3
1.8
2.5
4.3
--

Tabelle 2. Am wahrscheinlichsten Zahlen für die Verwendung mit dem experimentellen Design in dieser Übung.

Applications and Summary

Die MPN-Methode ist nützlich, weil es ermöglicht die Abschätzung einer funktionalen Bevölkerung basierend auf eine prozessuale Zuschreibung. Im Beispiel wurde die funktionale Prozess Photosynthese von Algen, die für das Wachstum in der Abwesenheit von organischem Kohlenstoff erlaubt durchgeführt. Dies ermöglichte Algen Gesamtbevölkerung im Boden aufgelistet werden sollen.

MPN wird auch verwendet, um die Anzahl eines bestimmten Typs von mikrobiellen Krankheitserregern im Wasser, wie Salmonellen, unter Verwendung des Widerstands von Salmonellen , Malachitgrün schätzen.

Eine weitere Anwendung ist die Schätzung von Mykorrhiza-Pilzen durch impfen Boden Verdünnungen auf vielfältige Pflanze und Wurzel Kolonisierung durch die Pilze suchen.

  1. Wiegen Sie ein 10 g Probe des Bodens, die entweder gesammelt hat Feuchte aus dem Feld, oder hatte Wasser hinzugefügt, so dass es für 2-3 Tage feucht bleibt. Beachten Sie, dass der Boden feucht, aber nicht gesättigt sein sollte.
  2. Bereiten Sie ein 10-divisibel Verdünnungsreihen durch Zugabe von 10 g des Bodens in 95 mL geändert Bristol-Lösung (Abbildung 1). Um geändert Bristol Lösung zu erstellen, Folgendes in 1.000 mL Wasser auflösen: 0,25 g NaNO3, 0,025 g CaCl2, 0,075 g MgSO4 · 7H2O, 0,075 g K2HPO40,018 g KH2PO4, 0,025 g NaCl und 0,5 mg FeCl3.
  3. Die Verdünnung-Serie durch die Zugabe von 1 mL der Suspension A bis 9 mL Bristol-Lösung und zusätzliche sequentielle Verdünnungen weiter.
  4. Impfen Sie 5 replizieren Rohre jedes mit 9 mL geändert Bristol-Lösung mit 1 mL der Verdünnungen 10-2 bis 10-6 (Tabelle 1).
  5. Inkubieren Sie die verschlossene Rohre für bis zu 4 Wochen in einer Gegend, die dem Sonnenlicht ausgesetzt.
  6. Beobachten Sie die Rohre für Algenwachstum einmal alle 7 Tage. Rohre mit Algenwachstum erscheinen grün.

Figure 1
Abbildung 1. Wie erstelle ich ein 10-divisibel Verdünnungsreihe.

Rohr Verdünnung
B 10-2
C 10-3
D 10-4
E 10-5
F 10-6

Tabelle 1. Röhren und Verdünnungen.

Algen sind photosynthetischen Organismen, die in einer Vielzahl von Umgebungen leben. Im Labor und ihrer Konzentration aufgelistet, durch einfache Berechnungen kann Boden Wohnung Algen kultiviert werden.

Algen sind eine sehr heterogene Gruppe von Organismen, die eine Gemeinsamkeit, nämlich den Besitz der photosynthetische Pigmente, häufig Chlorophyll haben. Die überwiegende Mehrheit der Algen sind mikroskopisch, die genaue Definition der Gruppe ist jedoch umstritten, und umfasst auch Algen, die in der Regel makroskopischen sind.

In der Umgebung können Algen Probleme in den Gewässern wie Seen oder Stauseen, Bildung von Algenblüten, die dem Wasser Nährstoffe, blockieren leicht über der Wasseroberfläche übergeben und Giftstoffe zum Abbau. Die Möglichkeit, Algen in Proben aufzulisten ermöglicht es Wissenschaftlern, die Gesundheit des Ökosystems und das potenzielle Risiko von Algen Überwucherung zu bewerten.

Algen Populationen in Böden treten häufig bei rund 10.000 Zellen pro Gramm. Diese Zahlen sind in der Regel niedriger als entsprechende Konzentrationen von Bakterien, Pilzen oder Actinomyceten, wie benötigen Algen Sonnenlicht für die Photosynthese, die weit unterhalb der Bodenoberfläche nicht durchdringen können.

Dieses Video zeigen wie Sie Algen aus dem Boden im Labor Kultur und wie die Konzentration der Algen in der Ausgangspunkt Bodenprobe aufgelistet.

Algen haben positive Auswirkungen auf die Ökosysteme. Blau - grüne Algen oder Cyanobakterien, haben die Fähigkeit, Stickstoff aus der Atmosphäre, so dass sie nützlich bei der Erhöhung Boden Stickstoff in semi-ariden Umgebung sowie ein mögliches Instrument zur Erzeugung von Biokraftstoffen zu beheben.

Andere Algen sind eukaryotische und reichen von einzelnen-celled, komplexe vielzellige Organismen wie Algen. Dazu gehören Grünalgen, Euglenoids Dinoflagellaten und Kieselalgen, Braunalgen und Rotalgen.

Algen sind phototrophe, Energiegewinnung aus Photosynthese und Carbon für Biomasse aus Kohlendioxid. Infolgedessen können sie in den Medien völlig bestehend aus anorganischen Nährstoffen, ohne einen zusätzlichen organischen Kohlenstoff-Substrat angebaut werden. Dieser Mangel an organisches Substrat verhindert das Wachstum von heterotrophen Bakterien, die auf externen organischen Kohlenstoff für Wachstum angewiesen sind.

Kultur-Algen für die Enumeration, Boden Proben sind seriell verdünnt 10-6 g Boden pro mL, und kultiviert in Wachstumsmedien verzehnfacht. Mehrere Wiederholungen sind für jede Verdünnung gemacht. Sie werden dann in einem gut beleuchteten Raum für bis zu 4 Wochen Algenwachstum inkubiert.

Das Vorhandensein von Algen in jeder Verdünnung richtet sich nach ein positiven Zeichen des Wachstums in der Mitte, die in der Regel als einen grünen Schleim erscheint. Schließlich empirisch entwickelte MPN-Tabellen für Algenwachstum konzipiert werden konsultiert, ermöglicht dem Anwender die ursprüngliche Algen Konzentration basierend auf Wachstum in Verdünnung bestimmt repliziert. Die MPN-Methode stützt sich auf die serielle Verdünnung von Proben so, dass die Algen vom Aussterben bedroht verdünnt sind, was bedeutet, dass bei einigen Verdünnung kein Algenwachstum erfolgt.

Jetzt sind wir vertraut mit den Konzepten wächst und Auflisten von Algen aus Proben, werfen wir einen Blick auf wie dies im Labor durchgeführt wird.

Zu Beginn der Experiment, erste Gewicht, 10 Gramm für feuchten Boden, der entweder aus dem Bereich feucht gesammelt worden oder wurde rehydriert und blieb für 2 bis 3 Tage feucht. Der Boden sollte aber nicht gesättigt.

Als nächstes bereiten Sie eine zehnfache Verdünnungsreihen durch Zugabe von 10 Gramm Boden zuerst bis 95 mL Lösung modifiziert Bristol oder MBS. Dies als Suspension A. beschriften

Nach dem Schütteln kräftig, weiter die Verdünnungsreihe durch Zugabe von 1 mL der Suspension A bis 9 mL der MBS in einem Reagenzglas. Weiterhin die zehnfache Verdünnungsreihen noch 4 Mal Verdünnungen bis zu 10-6 g / mL.

Als nächstes impfen Sie 5 replizieren Röhren, jedes mit 9 mL von MBS mit 1 mL der einzelnen Verdünnungen 10-1 bis 10-5. Dies führt zu 5 Wiederholungen Rohre für jede Verdünnung von 10-2 bis 10-6. Die Rohre lose Kappe.

Inkubieren Sie die Rohre schließlich eine volle 4 Wochen in einer Gegend, die dem Sonnenlicht ausgesetzt. Beobachten Sie die Rohre für Algenwachstum einmal alle 7 Tage. Röhren, die ausstellenden Algenwachstum werden grün angezeigt.

Die meisten wahrscheinliche Anzahl oder MPN, Analyse ist eine häufig verwendete mathematische Methode aufzuzählenden Mikroorganismen von Verdünnung eine konzentrierte erste Substrat gewachsen. Durch die Berücksichtigung der Verdünnungsfaktoren der Lösungen und die Anzahl der Rohre, die bei jeder Verdünnung positive von Wachstum Anzeichen, kann die wahrscheinlichste Anzahl der Organismen pro Gramm des ursprünglichen Bodenprobe mit Hilfe MPN Tabelle und einer einfachen Formel berechnet werden.

Um MPN zu berechnen, ist die höchsten Verdünnung mit der höchsten Anzahl von positiven replizieren Röhren die Beschriftung von p1, in diesem Fall die Wiederholungen des Schlauches C. zugewiesen. Im Gegensatz dazu, einige der Röhren von D & E sind negativ, ohne Anzeichen von Algenwachstum.

Die Anzahl der Rohre in die nächsten beiden höhere Verdünnungen, die positive Wachstum zeigen werden als p2 und p3gekennzeichnet. Hier, p2 = D und p3 = E.

Der Wert für p1 finden Sie auf der Suche nach der ersten Spalte in der Tabelle MPN. Das gleiche sollte mit der Spalte p2 erfolgen. Schließlich wird der Wert p3, am oberen Rand verwendet, um die beiden festgelegten p1 und p2, um einen Wert für die wahrscheinlichste Anzahl der Organismen pro mL schneiden.

Als nächstes um die Konzentration von Organismen pro Gramm in der ursprünglichen Bodenprobe zu berechnen, diesen Wert durch die Konzentration des Bodens in der Verdünnung gliedert p2 zugewiesen wurde. Die folgende Gleichung wird verwendet, um die tatsächliche Zahl der Organismen pro Gramm Boden zu definieren.

Algen-Enumeration und MPN Analyse haben eine breite Palette von Anwendungen, von die einige hier erkundet werden.

Diese Kultivierung Methode Algen Enumeration kann in einer Vielzahl von Einstellungen verwendet werden. Es kann auf Flüssen oder Seen, um Algen zu bestimmen, und Bewertung der Risiken von schädlichen Algenblüten angewendet werden. Alternativ kann es verwendet werden, zu beurteilen, die Sauberkeit und Sicherheit des Wassers direkt von Menschen, einschließlich Schwimmbädern, Springbrunnen oder andere Trinkwasserquellen verwendet. Im Idealfall in Trinkwasser-Proben und Schwimmbäder gibt es keine Algen vorhanden.

Die MPN-Analyse für die Enumeration kann auch auf andere nicht-Algen Mikroorganismen angewendet werden. Beispielsweise kann die Wasserqualität mit Indikator-Organismen wie Coliformen oder E. Colibeurteilt werden. Hier können Proben kultiviert werden, mit Medien, die Chemikalien, die geändert werden, um Farbe oder Fluoreszenz im Beisein der Indikator-Organismen produzieren. Indem Sie mehrere kleine Wiederholungen des Experiments in Einzelzellen, mit Proben zu einer bekannten Konzentration verdünnt ausführen, kann das Verhältnis der positiven Zellen zu einer MPN Tabelle für den spezifischen Indikator Organismus und ab Konzentration in den Proben bestimmt verwiesen werden.

Algen können auch für kommerzielle Anwendungen kultiviert werden. Beispielsweise verwenden einige Arten von gezüchteten blau - grüne Algen, die als Symbionten mit Pflanzen, Unterstützung ihrer Befestigung und Aufnahme von Stickstoff, die besonders nützlich bei der Beihilfe Pflanzenwachstums in Bereichen mit mageren Böden ist fungieren können. Algen können in ähnlicher Weise für Biokraftstoffe oder als eine Quelle der Nährstoff reiche Nahrung für das Vieh angebaut werden.

Sie sah nur Jupiters Einführung in die Algenkultur und Enumeration. Sie sollten jetzt verstehen, wie, Bodenproben für Algenwachstum zu verwässern, wie Algen im Labor Kultur und wie die Algen Konzentration Schriftproben Start aufgelistet. Danke fürs Zuschauen!

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