نحن هنا وصف بروتوكول لدراسة الهجرة من الخلايا الدبقية في عين ذبابة الفاكهة النامية باستخدام التحليل المجهري مع الخلايا الحية المقترنة GFP الدبقية المفتاحية.
Abstract
يجب أن الخلايا الدبقية كل من الفقاريات واللافقاريات الكائنات على الهجرة الى مناطق الهدف النهائي من أجل ensheath ودعم الخلايا العصبية المرتبطة بها. بينما أحرز التقدم الذي أحرز مؤخرا لوصف الهجرة حية من خلايا الدبقية في الجناح العذراء النامية (1) ، ودراسات<em> ذبابة الفاكهة</emوقد شملت> الهجرة الخلية الدبقية عادة فحص الأنسجة الثابتة. تحليل مجهري للخلايا حية متحركة يوفر القدرة على دراسة السلوك الخلوية في جميع مراحل عملية الهجرة ، بما في ذلك تحديد سعر والتغيرات في اتجاه النمو. يقترن استخدام الأدوات الوراثية ، ويمكن استخدام التصوير العيش لتحديد أدوار أكثر دقة لجينات معينة في عملية التنمية. العمل السابقة Silies<em> وآخرون.</emوقد وصفت> (2) هجرة الدبقية مصدره السويقة البصرية ، وهو الهيكل الذي يربط بين العين والدماغ النامي ، في قرص تخيلي في أنسجة العين الثابتة. نحن هنا الخطوط العريضة لبروتوكول لدراسة الهجرة حية من خلايا الدبقية في<em> ذبابة الفاكهة</em> القرص العين تخيلي. علينا أن نستفيد من خط ذبابة الفاكهة التي تعبر عن GFP في الدبقية النامية لمتابعة تطور الخلايا الدبقية في نوع الحيوانات البرية ومتحولة.
Protocol
الجزء 1 : قبل انشاء التجريبية. أسبوع واحد في وقت مبكر ، لم الذباب لتوليد اليرقة التي تعبر عن GFP تحت سيطرة أحد المروجين الدبقية محددة. لتجربتنا نحن تصور GFP المفتاحية مع تسلسل توطين النووية التي أعرب عنها في الخلايا الدبقي…
Discussion
في هذا البروتوكول وصفنا مراقبة الهجرة الخلايا الدبقية إلى القرص العين تخيلي باستخدام المجهر العيش. في مثالنا اكتب البرية (الشكل 1 م) ، استخدمنا علامة GFP النووية لمراقبة حركة الخلايا الدبقية في القرص العين على مدى ساعة واحدة. في متحولة عن الجينات المطلوبة للمرشح ل…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
معتمد من قبل باتريك كافرتى زمالات ما بعد الدكتوراه من جمعية التصلب المتعدد في كندا.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Poly-L-lysine
Reagent
Sigma
P8920
Schneider’s Insect Media
Reagent
Sigma
S0146
Penicillin-Streptomycin
Reagent
Sigma
P4458
Insulin solution from bovine pancreas
Reagent
Sigma
I0516
Chamlide Magnetic chamber
Tool
Live cell Instrument
CM-R-10
35 mm dish type chamber for 18 mm coverslip
Ultra fine clipper scissors
Tool
Fine scientific tools
15200-00
Dumont #5 forceps
Tool
Fine scientific tools
11251-20
Fluorescent microscope
Microscope
Zeiss
Any fluorescent imaging system that has the necessary filters and excitation for GFP can be used.
Cafferty, P., Xie, X., Browne, K., Auld, V. J. Live Imaging of Glial Cell Migration in the Drosophila Eye Imaginal Disc. J. Vis. Exp. (29), e1155, doi:10.3791/1155 (2009).