Nous décrivons ici un protocole visant à étudier la migration des cellules gliales dans le développement de l'œil de drosophile en utilisant l'analyse microscopique direct couplé à la GFP taggés cellules gliales.
Abstract
Les cellules gliales du vertébrés et invertébrés organismes doivent migrer vers des régions cibles finale afin de ensheath et de soutien des neurones associés. Bien que des progrès récents ont été faits pour décrire la migration en direct des cellules gliales dans l'aile de développement nymphal (1), les études de<em> Drosophile</em> Migration des cellules gliales ont généralement impliqués l'examen des tissus fixés. Analyse microscopique direct des cellules mobiles offre la possibilité d'examiner le comportement cellulaire tout au long du processus migratoire, y compris la détermination du taux de change et en direction de la croissance. Couplé à l'utilisation d'outils génétiques, imagerie en temps réel peut être utilisé pour déterminer les rôles plus précis pour des gènes spécifiques dans le processus de développement. Les travaux antérieurs de Silies<em> Et al.</em> (2) a décrit la migration des cellules gliales en provenance de la tige optique, une structure qui relie l'œil et le cerveau de développement, dans le disque imaginal des yeux dans les tissus fixés. Nous exposons ici un protocole pour examiner la migration en direct des cellules gliales dans le<em> Drosophile</emDisque oeil> imaginale. Nous profitons d'une ligne de drosophile qui exprime la GFP dans glie en développement de suivre la progression des cellules gliales de type sauvage et chez les animaux mutants.
Protocol
Partie 1: Pré-montage expérimental. Une semaine à l'avance, compagnon mouches pour générer larve qui expriment la GFP sous le contrôle d'un promoteur spécifique gliales. Pour notre expérience, nous visualisés GFP taggés avec une séquence de localisation nucléaire exprimé dans les cellules gliales en utilisant les inversions de polarité (repo) promoteur (3, 4). Préparer la couverture glisse au moins un jour à l'avance par trempage 18 mm de diamètre glisse couverc…
Discussion
Dans ce protocole, nous décrivons l'observation de la migration des cellules gliales dans le disque imaginal des yeux en utilisant la microscopie vivre. Dans notre exemple de type sauvage (figure 1 après JC), nous avons utilisé un marqueur GFP nucléaires d'observer le mouvement des cellules gliales dans le disque les yeux au cours d'une heure. Dans un mutant d'un gène candidat requis pour la migration des cellules gliales actuellement à l'étude dans notre laboratoire, nous avons obser…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Patrick Cafferty est soutenu par une bourse de recherche postdoctorale de la Société canadienne de la sclérose.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Poly-L-lysine
Reagent
Sigma
P8920
Schneider’s Insect Media
Reagent
Sigma
S0146
Penicillin-Streptomycin
Reagent
Sigma
P4458
Insulin solution from bovine pancreas
Reagent
Sigma
I0516
Chamlide Magnetic chamber
Tool
Live cell Instrument
CM-R-10
35 mm dish type chamber for 18 mm coverslip
Ultra fine clipper scissors
Tool
Fine scientific tools
15200-00
Dumont #5 forceps
Tool
Fine scientific tools
11251-20
Fluorescent microscope
Microscope
Zeiss
Any fluorescent imaging system that has the necessary filters and excitation for GFP can be used.
Cafferty, P., Xie, X., Browne, K., Auld, V. J. Live Imaging of Glial Cell Migration in the Drosophila Eye Imaginal Disc. J. Vis. Exp. (29), e1155, doi:10.3791/1155 (2009).