Vivere Imaging della migrazione cellule gliali nella Eye Disco Drosophila immaginale
Summary
Qui descriviamo un protocollo per esaminare la migrazione delle cellule gliali in un occhio lo sviluppo di Drosophila mediante l'analisi microscopica vivono in coppia con tag GFP cellule gliali.
Abstract
Cellule gliali di entrambi gli organismi vertebrati e invertebrati devono migrare verso le regioni obiettivo finale per ensheath e supportare i neuroni associati. Anche se i recenti progressi sono stati fatti per descrivere la migrazione live delle cellule gliali nell'ala sviluppo pupale (1), gli studi di<em> Drosophila</emLa migrazione delle cellule> gliali sono in genere impegnati l'esame di tessuto fissato. Vivono analisi al microscopio delle cellule mobili offre la possibilità di esaminare il comportamento cellulare durante tutto il processo migratorio, ivi compresa la determinazione del tasso di cambi di direzione e di crescita. In coppia con l'uso di strumenti genetici, immagini dal vivo possono essere utilizzati per determinare i ruoli più precisi per i geni specifici nel processo di sviluppo. Precedenti lavori Silies<em> Et al.</em> (2) ha descritto la migrazione di cellule gliali provenienti dal gambo ottica, una struttura che collega l'occhio e il cervello in via di sviluppo, nel disco occhio immaginale in tessuto fissato. Qui delineare un protocollo per l'esame della migrazione live delle cellule gliali nella<em> Drosophila</em> Disco occhio immaginale. Ci avvaliamo di una linea di Drosophila che esprime GFP in cellule gliali di sviluppo per seguire la progressione delle cellule gliali di tipo negli animali selvatici e mutanti.
Protocol
Discussion
In questo protocollo si descrivono osservazione della migrazione delle cellule gliali nel disco occhio immaginale usando la microscopia dal vivo. Nel nostro esempio wild-type (figura 1 dC), abbiamo utilizzato un marcatore nucleare GFP per osservare il movimento delle cellule gliali nel disco occhio nel corso di un'ora. In un mutante di un gene candidato necessaria per la migrazione delle cellule gliali attualmente allo studio nel nostro laboratorio, abbiamo osservato uno stallo dei nuclei delle cellule glia…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Patrick Cafferty è supportato da una borsa di studio post-dottorato dalla Multiple Sclerosis Society of Canada.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Poly-L-lysine | Reagent | Sigma | P8920 | |
| Schneider’s Insect Media | Reagent | Sigma | S0146 | |
| Penicillin-Streptomycin | Reagent | Sigma | P4458 | |
| Insulin solution from bovine pancreas | Reagent | Sigma | I0516 | |
| Chamlide Magnetic chamber | Tool | Live cell Instrument | CM-R-10 | 35 mm dish type chamber for 18 mm coverslip |
| Ultra fine clipper scissors | Tool | Fine scientific tools | 15200-00 | |
| Dumont #5 forceps | Tool | Fine scientific tools | 11251-20 | |
| Fluorescent microscope | Microscope | Zeiss | Any fluorescent imaging system that has the necessary filters and excitation for GFP can be used. |
References
- Aigouy, B., Lepelletier, L., Giangrande, A. Glial chain migration requires pioneer cells. J. Neurosci. 28, 11635-11641 (2008).
- Silies, M., Yuva, Y., Engelen, D., Aho, A., Stork, T., Klambt, C. Glial cell migration in the eye disc. J. Neurosci. 27, 13130-13139 (2007).
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
- Sepp, K. J., Auld, V. J. Conversion of lacZ enhancer trap lines to GAL4 lines using targeted transposition in Drosophila melanogaster. Genetics. 151, 1093-1101 (1999).
- Gibson, M. C., Patel, A. B., Nagpal, R., Perrimon, N. The emergence of geometric order in proliferating metazoan epitheia. Nature. 442, 1038-1041 (2006).
- Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) for Drosophila neural development. Trends Neurosci. 24, 251-254 (2001).
