Imagens ao vivo da migração das células da glia no Disco Drosophila Eye Imaginal
Summary
Aqui nós descrevemos um protocolo para analisar a migração de células gliais no olho Drosophila desenvolvimento, utilizando análise microscópica ao vivo emparelhado com GFP tag células gliais.
Abstract
Células gliais de ambos os vertebrados e organismos invertebrados devem migrar para regiões de destino final para ensheath e apoio neurônios associados. Embora o progresso recente tem sido feito para descrever a migração de células gliais na ala desenvolvimento pupal (1), estudos de<em> Drosophila</em> Migração de células gliais têm tipicamente envolvidos no exame de tecido fixo. Análise microscópica de células móveis ao vivo oferece a capacidade de examinar o comportamento celular em todo o processo migratório, incluindo a determinação da taxa de e mudanças na direção do crescimento. Emparelhado com o uso de ferramentas genéticas, imagens ao vivo pode ser usado para determinar os papéis mais precisos para genes específicos no processo de desenvolvimento. Os trabalhos anteriores por Silies<em> Et al.</em> (2) descreveu a migração de células gliais provenientes do talo óptico, uma estrutura que liga o olho eo cérebro em desenvolvimento, no disco imaginal olho no tecido fixo. Aqui destacamos um protocolo para a análise da migração de células gliais na<em> Drosophila</em> Disco olho imaginal. Aproveitamos uma linha de Drosophila que expressa GFP em células gliais em desenvolvimento para acompanhar a progressão de células gliais no tipo selvagem e mutante em animais.
Protocol
Discussion
Neste protocolo, descrevemos a observação da migração de células gliais no disco imaginal olho através de microscopia ao vivo. No nosso exemplo de tipo selvagem (Figura 1 AD), foi utilizado um marcador GFP nuclear para observar a movimentação das células gliais no disco do olho ao longo de uma hora. Em um mutante de um gene candidato necessários para a migração de células gliais actualmente em estudo no nosso laboratório, observamos um adiamento de núcleos de células gliais no talo óptico duran…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Patrick Cafferty é apoiado por uma bolsa de pós-doutorado da Sociedade de Esclerose Múltipla do Canadá.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Poly-L-lysine | Reagent | Sigma | P8920 | |
| Schneider’s Insect Media | Reagent | Sigma | S0146 | |
| Penicillin-Streptomycin | Reagent | Sigma | P4458 | |
| Insulin solution from bovine pancreas | Reagent | Sigma | I0516 | |
| Chamlide Magnetic chamber | Tool | Live cell Instrument | CM-R-10 | 35 mm dish type chamber for 18 mm coverslip |
| Ultra fine clipper scissors | Tool | Fine scientific tools | 15200-00 | |
| Dumont #5 forceps | Tool | Fine scientific tools | 11251-20 | |
| Fluorescent microscope | Microscope | Zeiss | Any fluorescent imaging system that has the necessary filters and excitation for GFP can be used. |
References
- Aigouy, B., Lepelletier, L., Giangrande, A. Glial chain migration requires pioneer cells. J. Neurosci. 28, 11635-11641 (2008).
- Silies, M., Yuva, Y., Engelen, D., Aho, A., Stork, T., Klambt, C. Glial cell migration in the eye disc. J. Neurosci. 27, 13130-13139 (2007).
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
- Sepp, K. J., Auld, V. J. Conversion of lacZ enhancer trap lines to GAL4 lines using targeted transposition in Drosophila melanogaster. Genetics. 151, 1093-1101 (1999).
- Gibson, M. C., Patel, A. B., Nagpal, R., Perrimon, N. The emergence of geometric order in proliferating metazoan epitheia. Nature. 442, 1038-1041 (2006).
- Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) for Drosophila neural development. Trends Neurosci. 24, 251-254 (2001).
