Живая изображений глиальных миграции клеток в диск дрозофилы глаз имагинальных
Summary
Здесь мы опишем протокол для изучения миграции глиальных клеток в развивающихся дрозофилы глаз с использованием живых микроскопического анализа в паре с меткой GFP глиальных клеток.
Abstract
Глиальных клеток обеих позвоночных и беспозвоночных организмов должны перейти на заключительный целевых регионов для того, чтобы ensheath и поддержки связанных нейронов. Хотя в последнее время прогресс был достигнут, чтобы описать живую миграцию глиальных клеток в развивающемся куколки крыло (1), исследования<em> Drosophila</em> Глиальных миграции клеток, как правило, участвуют обследование основных тканей. Живая микроскопический анализ подвижных клеток дает возможность исследовать поведение всей сотовой миграционных процессов, в том числе определения скорости и изменения в сторону роста. В сочетании с использованием генетических инструментов, живые изображения могут быть использованы для определения более точной роли определенных генов в процессе развития. Предыдущая работа Silies<em> Соавт.</em> (2) описал миграции глии, происходящих из глазного стебля, структура, которая соединяет развивающийся глаз и мозга, в глаз имагинальных дисков в основной ткани. Здесь мы опишем протокол рассмотрения живая миграция глиальных клеток в<em> Drosophila</em> Глаза имагинальных дисков. Воспользуемся линии дрозофилы, что выражает GFP в развивающихся глии следовать глиальных прогрессии ячейку в дикого типа и мутантных животных.
Protocol
Discussion
В этом протоколе описываются наблюдения миграции клеток глии в глаз имагинальных дисков с использованием живых микроскопии. В нашем примере дикого типа (рис. 1 г. н.э.), мы использовали ядерное маркера GFP наблюдать глиальных движения ячейки в глазу диск в течение одного часа. В мутан?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Патрик Кафферти поддерживается докторской стипендий, начиная с нескольких общества рассеянного склероза Канады.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Poly-L-lysine | Reagent | Sigma | P8920 | |
| Schneider’s Insect Media | Reagent | Sigma | S0146 | |
| Penicillin-Streptomycin | Reagent | Sigma | P4458 | |
| Insulin solution from bovine pancreas | Reagent | Sigma | I0516 | |
| Chamlide Magnetic chamber | Tool | Live cell Instrument | CM-R-10 | 35 mm dish type chamber for 18 mm coverslip |
| Ultra fine clipper scissors | Tool | Fine scientific tools | 15200-00 | |
| Dumont #5 forceps | Tool | Fine scientific tools | 11251-20 | |
| Fluorescent microscope | Microscope | Zeiss | Any fluorescent imaging system that has the necessary filters and excitation for GFP can be used. |
References
- Aigouy, B., Lepelletier, L., Giangrande, A. Glial chain migration requires pioneer cells. J. Neurosci. 28, 11635-11641 (2008).
- Silies, M., Yuva, Y., Engelen, D., Aho, A., Stork, T., Klambt, C. Glial cell migration in the eye disc. J. Neurosci. 27, 13130-13139 (2007).
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
- Sepp, K. J., Auld, V. J. Conversion of lacZ enhancer trap lines to GAL4 lines using targeted transposition in Drosophila melanogaster. Genetics. 151, 1093-1101 (1999).
- Gibson, M. C., Patel, A. B., Nagpal, R., Perrimon, N. The emergence of geometric order in proliferating metazoan epitheia. Nature. 442, 1038-1041 (2006).
- Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) for Drosophila neural development. Trends Neurosci. 24, 251-254 (2001).
