ES सेल व्युत्पन्न Neuroepithelial सेल संस्कृतियों
Summary
भ्रूण स्टेम (ते) stromal उत्प्रेरण सेल व्युत्पन्न गतिविधि (SDIA) का उपयोग कोशिकाओं से neuroepithelial व्यापारियों की व्युत्पत्ति.
Abstract
ES कोशिकाओं सभी रोगाणु परतें, जो उन्हें नए उपचारों के विकास के लिए एक आकर्षक उपकरण बनाती से कोशिकाओं में अंतर करने की क्षमता है. सामान्य में, ES कोशिकाओं की भेदभाव की अवधारणा का अनुसरण करने के लिए पहली बार अपरिपक्व पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं, जो तब और प्रचारित किया जा सकता है परिपक्व सेलुलर phenotypes में भेदभाव उत्पन्न. यह भी ES neurogenesis सेल व्युत्पन्न के लिए लागू होता है, तंत्रिका कोशिकाओं के विकास में जो दो प्रमुख चरणों में निम्न प्रकार है: पहले, व्युत्पत्ति और परिपक्व तंत्रिका कोशिकाओं में विस्तार अपरिपक्व neuroepithelial व्यापारियों और दूसरे, उनके भेदभाव के. एक सामान्य विधि ES कोशिकाओं से तंत्रिका progenitors उत्पादन embryoid शरीर (EB) के गठन, जो neuroectoderm सहित सभी रोगाणु परतें से कोशिकाओं की भिन्नता से पता चलता है पर आधारित है. Neuroepithelial सेल के विकास को प्रेरित करने के लिए एक वैकल्पिक और अधिक कुशल पद्धति stromal उत्प्रेरण सेल व्युत्पन्न (SDIA) गतिविधि है, जो सह संवर्धन खोपड़ी की हड्डी मज्जा stromal कोशिकाओं व्युत्पन्न (1) के साथ ES कोशिकाओं के द्वारा प्राप्त किया जा सकता का उपयोग करता है. दोनों EB गठन और SDIA, थाली की तरह संरचनाओं के विकास, ट्यूब और जो तंत्रिका सदृश करने के लिए लगा रहे हैं / या तंत्रिका शिखा की तरह progenitors प्रकट करते हैं. तंत्रिका व्यापारियों, अलग किया जा सकता है विस्तार और विशिष्ट न्यूरॉन्स और glia कोशिकाओं परिभाषित संस्कृति शर्तों का उपयोग करने में आगे विभेदित. यहाँ, हम पीढ़ी और stromal सेल MS5 लाइन (2-5) के साथ सह संस्कृति प्रयोगों में ऐसे rosettes के अलगाव का वर्णन.
Protocol
Discussion
इस प्रोटोकॉल पैदा करने और मानव ES SDIA का उपयोग कोशिकाओं से neuroepithelial कोशिकाओं में अलग अलग चरणों को दर्शाता है. इस विधि का आवेदन कई गुना है और कई प्रोटोकॉल में इस्तेमाल किया गया है निर्दिष्ट न्यूरॉन्स का उत्पादन (1 उदाह?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| L-glutamine | Gibco | 25030 | ||
| alpha-MEM | Gibco | 12571 | ||
| penicillin/streptomycin | Gibco | 15140 | ||
| Knockout-DMEM | Gibco | 10829 | ||
| Knockout serum replacement | Gibco | 10828 | ||
| MEM non-essential amino acid solution | Gibco | 12383 | ||
| DMEM/F12 | Gibco | 11330 | ||
| N2-A supplement | Stem Cell Technologies | 07152 | ||
| mitomycin-C | Sigma | M0503 | ||
| gelatine type-A | Sigma | G1890 | ||
| poly-L-ornithine | Sigma | P4957 | 0.01 % solution | |
| laminin | Sigma | L-2020 | ||
| fibronectin | Sigma | F2006 | ||
| basic fibroblast growth factor (bFGF) | Invitrogen | 13256 | ||
| 1 ml syringe with 27 1/2 G needle | Becton Dickinson | 309623 | ||
| N2-A media | medium | DMEM/F12 + 1% N2-A supplement | ||
| Serum replacement media (SRM) | medium | Knockout-DMEM + 20 % Knockout serum replacement +1% MEM non-essential amino acid solution + 2 mM L-glutamine | ||
| α-MEM media | medium | α-MEM + 10 % FBS + 2 mM L-glutamine + 1%penicillin/streptomycin | ||
| MS5 | cell line | stromal cells | ||
| Microscope | ||||
| 6 well plates | for tissue culture |
References
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