Dissezione lordo e Arti di epiteli sensoriali dell'orecchio interno in adulti Zebrafish ( Danio rerio)
Summary
L'epitelio dell'orecchio interno sensoriale del pesce zebra adulta è un sistema di buon modello per la comprensione dei meccanismi di rigenerazione delle cellule dei capelli nei vertebrati adulti. Questo protocollo dimostra la dissezione belle degli epiteli, attraverso il quale possiamo ottenere campioni di tessuto per lo studio degli eventi rigenerativi a livello cellulare e subcellulare.
Abstract
Epiteli neurosensoriale nell'orecchio interno sono le strutture fondamentali per le funzioni dell'udito e dell'equilibrio. Pertanto, è importante capire le caratteristiche cellulari e molecolari degli epiteli, che sono principalmente composti da due tipi di cellule: cellule ciliate (HC) e le cellule di supporto (SC). Qui abbiamo scelto di studiare gli epiteli sensoriali dell'orecchio interno in zebrafish adulti non solo perché le strutture epiteliali sono altamente conservati in tutti i vertebrati studiati, ma anche perché il pesce zebra adulto è in grado di rigenerare HC, una capacità che i mammiferi perdere poco dopo la nascita. Usiamo l'orecchio interno di zebrafish adulti come sistema modello per studiare i meccanismi di rigenerazione dell'orecchio interno HC nei vertebrati adulti che potrebbero essere utili per la terapia clinica dell'udito / deficit in equilibrio umano a causa della perdita di HC.
Qui mostriamo come fare dissezioni lordo e multa di epiteli sensoriali dell'orecchio interno in zebrafish adulti. La dissezione lordo rimuove i tessuti circostanti l'orecchio interno ed è utile per la preparazione di sezioni di tessuto, che ci permette di esaminare la struttura dettagliata degli epiteli sensoriali. La dissezione multa pulisce il non-senso-tessuti epiteliali epitelio di ogni individuo e ci permette di esaminare l'eterogeneità dell'epitelio tutto facile per intero-mount campioni epiteliali.
Protocol
Discussion
In questo protocollo, abbiamo descritto la dissezione lordo e fine degli epiteli sensoriali dell'orecchio interno di zebrafish per adulti, che ci permette di preparare i campioni di tessuto per lo studio della funzionalità cellulare e subcellulare degli epiteli sensoriali.
Al fine di realizzare una dissezione di successo, il primo passo, la fissazione, è molto importante. Assicurarsi di utilizzare sempre la soluzione paraformaldeide preparata perché vecchia soluzione si tradurrà in s…
Acknowledgements
Questa ricerca è stata sostenuta dal Programma di ricerca intramurale del National Human Genome Research Institute, National Institutes of Health.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| MS222 (Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt) | Reagent | Sigma | A5040 | |
| PBS (Phosphate-buffered Saline, 10X) | Reagent | Mediatech | 46-013-CM | |
| Paraformaldehyde | Reagent | Sigma | P-6148 | |
| Triton X-100 | Reagent | Sigma | T8787 | |
| Alexa Fluor 488 phalloidin | Reagent | Invitrogen | A12379 | |
| VECTASHIELD Hard Set Mounting Medium with DAPI | Reagent | Vector Laboratories | H-1500 | |
| Dissection microscope | Microscope | Nikon | SMZ1000 | |
| Insect pins | Tool | Fine Science Tools | 26000-40 | |
| Scissors | Tool | Roboz | RS-5880 | |
| Tweezers | Tool | Roboz | RS-5045 | |
| Needle blade | Tool | Sharpoint | 78-6810 | |
| Fluorescent microscope | Microscope | Zeiss | Axiovert 200M | |
| Dissection pad | Tool | eNasco | SB07840M | |
| Zebrafish | Animal | various | n/a |
