アダルトゼブラフィッシュの内耳感覚上皮のグロスとファイン解剖（ゼブラフィッシュ）

Summary

大人のゼブラフィッシュの内耳感覚上皮は成人脊椎動物で有毛細胞の再生のメカニズムを理解するための良いモデルシステムです。このプロトコルは、我々は、細胞と細胞内レベルでの再生イベントを研究するための組織サンプルを取得できるような上皮の微細な解剖を、示しています。

Abstract

内耳の感覚神経上皮は、聴覚やバランス機能のための重要な構造です。有毛細胞（HCS）と支持細胞（SCS）：そのため、主に細胞の2つの型で構成された上皮の細胞および分子の機能を理解することが重要です。ここでは、上皮構造が高度に調査したすべての脊椎動物で保存されているので、大人のゼブラフィッシュではないだけに内耳感覚上皮を勉強するだけでなく、大人のゼブラフィッシュは、HCS、哺乳類は出生後まもなく失うことの能力を再生成することができるからです。我々は、HCの損失の結果として人間の聴覚/バランス赤字の臨床治療に役立つ可能性がある成人の脊椎動物の内耳HCの再生のメカニズムを研究するモデル系として成人ゼブラフィッシュの内耳を使用してください。

ここでは、成人のゼブラフィッシュの内耳感覚上皮のグロスと微細な解剖を行う方法を示します。総解剖は内耳の周囲の組織を取り除き、私たちは感覚上皮の詳細な構造を調べることができます組織切片を調製するのに便利です。細かい解剖では、個々の上皮の非感覚上皮組織をクリーンアップし、ホールマウント上皮サンプルで簡単に全体の上皮の不均一性を調べるために私達が可能になります。

Protocol

パート1：組織の準備バッファリングされたMS – 222（3 – アミノ安息香酸エチルメタンスルホン酸塩、0.03％）と成人ゼブラフィッシュを安楽死させる。 魚を刎ねる。 、下顎を切断し、最大腹側と解剖のパッドの上にヘッドを置き、虫ピンで組織を固定化する。頭蓋骨の腹側の軟部組織を削除し、解剖顕微鏡下で微細なピンセットで頭蓋骨のカプセルの腹側部分を開口割れ目。 </li…

Discussion

このプロトコルでは、我々は、私たちは、感覚上皮の細胞と細胞内機能を研究するための組織サンプルを準備することができる大人のゼブラフィッシュの内耳感覚上皮のグロスと微細な解剖を説明した。

成功した解剖を行うために、非常に最初のステップは、固定では、非常に重要です。古いソリューションは、解剖時に扱うことが困難な組織の下で、固定につながる?…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
MS222 (Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt)	Reagent	Sigma	A5040
PBS (Phosphate-buffered Saline, 10X)	Reagent	Mediatech	46-013-CM
Paraformaldehyde	Reagent	Sigma	P-6148
Triton X-100	Reagent	Sigma	T8787
Alexa Fluor 488 phalloidin	Reagent	Invitrogen	A12379
VECTASHIELD Hard Set Mounting Medium with DAPI	Reagent	Vector Laboratories	H-1500
Dissection microscope	Microscope	Nikon	SMZ1000
Insect pins	Tool	Fine Science Tools	26000-40
Scissors	Tool	Roboz	RS-5880
Tweezers	Tool	Roboz	RS-5045
Needle blade	Tool	Sharpoint	78-6810
Fluorescent microscope	Microscope	Zeiss	Axiovert 200M
Dissection pad	Tool	eNasco	SB07840M
Zebrafish	Animal	various	n/a