Yetişkin Zebra balığı İç Kulak Duyu Epiteli Brüt ve Güzel Diseksiyon ( Danio rerio)
Summary
Yetişkin zebrafish iç kulak duyu epitel yetişkin omurgalıların saç hücre yenilenmesini mekanizmaları anlamak için iyi bir model sistem. Bu protokol, hücresel ve hücre içi düzeyde yenileyici olaylar çalışmak için doku örnekleri elde edebilirsiniz epitel ince diseksiyon, göstermektedir.
Abstract
Nörosensoryel epitel iç kulak, işitme ve denge fonksiyonları için önemli yapılardır. Bu nedenle, esas olarak iki tip hücre oluşan epitel, hücresel ve moleküler özelliklerini anlamak için önemlidir: saç hücreleri (HCS) ve destekleyen hücrelerin (SC'ler). Burada epitelyal yapılar çok incelenen bütün omurgalıların korunmuş çünkü yetişkin zebrafish sadece iç kulak duyu epitel çalışmak için seçer, ancak aynı zamanda yetişkin zebrafish HCS, memelilerde doğumdan kısa bir süre sonra kaybetmek bir yeteneği yeniden mümkün çünkü. Biz yetişkin zebrafish iç kulak HC kaybının bir sonucu olarak insan İşitme / denge açıklarının klinik tedavisi için yararlı olabilir yetişkin omurgalılarda iç kulak HC rejenerasyon mekanizmalarının çalışması için bir model sistem olarak kullanabilirsiniz.
Burada yetişkin zebrafish iç kulak duyu epitel kaba ve ince diseksiyonları nasıl göstermektedir. Brüt diseksiyonu, iç kulak çevresindeki dokuları temizler ve doku kesitlerinde, bize duyu epitel ayrıntılı yapısını incelemek için olanak hazırlamak için yararlı olur. Her bir epitel ince diseksiyon olmayan duyusal-epitel dokuların temizler ve bütün montaj epitel örnekleri kolayca tüm epitel heterojenite incelemek için bize sağlar.
Protocol
Discussion
Bu protokol, biz bize duyu epitel hücre ve hücre içi eğitim için doku örneği hazırlamak için yetişkin zebrafish, iç kulak duyu epiteli, kaba ve ince diseksiyon nitelendirdi.
Başarılı bir diseksiyon, ilk adım, fiksasyon yürütmek için çok önemlidir. Eski çözüm diseksiyonu sırasında ele sert dokuların altında fiksasyon neden olacaktır, çünkü her zaman taze hazırlanmış paraformaldehid çözüm emin olun. Ancak, diseksiyonu sonra immün / histolojik boyama sonuç…
Acknowledgements
Bu araştırma, Ulusal İnsan Genomu Araştırma Enstitüsü, Ulusal Sağlık Enstitüleri İntramural Araştırma Programı tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| MS222 (Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt) | Reagent | Sigma | A5040 | |
| PBS (Phosphate-buffered Saline, 10X) | Reagent | Mediatech | 46-013-CM | |
| Paraformaldehyde | Reagent | Sigma | P-6148 | |
| Triton X-100 | Reagent | Sigma | T8787 | |
| Alexa Fluor 488 phalloidin | Reagent | Invitrogen | A12379 | |
| VECTASHIELD Hard Set Mounting Medium with DAPI | Reagent | Vector Laboratories | H-1500 | |
| Dissection microscope | Microscope | Nikon | SMZ1000 | |
| Insect pins | Tool | Fine Science Tools | 26000-40 | |
| Scissors | Tool | Roboz | RS-5880 | |
| Tweezers | Tool | Roboz | RS-5045 | |
| Needle blade | Tool | Sharpoint | 78-6810 | |
| Fluorescent microscope | Microscope | Zeiss | Axiovert 200M | |
| Dissection pad | Tool | eNasco | SB07840M | |
| Zebrafish | Animal | various | n/a |
