Grove en fijne Dissectie van binnenoor Sensory epitheel in Adult zebravis ( Danio rerio)
Summary
Het binnenoor sensorische epitheel van volwassen zebravis is een goed model voor het begrijpen van de mechanismen van haar cel regeneratie in volwassen gewervelde dieren. Dit protocol laat de fijne ontleding van het epitheel, waardoor we kunnen weefselmonsters krijgen voor het bestuderen van de regeneratieve gebeurtenissen in cellulaire en subcellulaire niveau.
Abstract
Neurosensorische epitheel in het binnenoor zijn de cruciale structuren voor gehoor en evenwicht functies. Daarom is het belangrijk om te begrijpen van de cellulaire en moleculaire kenmerken van het epitheel, die hoofdzakelijk zijn samengesteld uit twee soorten cellen: haarcellen (HCS) en het ondersteunen van cellen (SC). Hier kiezen we ervoor om het binnenoor sensorische epitheel bij volwassen zebravissen niet alleen studeren, omdat de epitheliale structuren zijn sterk geconserveerd in de bestudeerde alle gewervelde dieren, maar ook omdat de volwassen zebravis is in staat om HC, een vermogen dat zoogdieren te verliezen kort na de geboorte te regenereren. We maken gebruik van het binnenoor van volwassen zebravis als model systeem om de mechanismen van binnenoor HC regeneratie studie bij volwassen gewervelde dieren die nuttig zouden kunnen zijn voor de klinische behandeling van het gehoor / balans tekorten in de menselijke als gevolg van de HC verlies.
Hier laten we zien hoe de grove en fijne dissecties van binnenoor sensorische epitheel bij volwassen zebravissen doen. De bruto dissectie verwijdert de weefsels rondom het binnenoor en is nuttig voor het bereiden van weefselcoupes, die ons in staat stelt te onderzoeken of het gedetailleerde structuur van de sensorische epitheel. De fijne dissectie ruimt de niet-zintuiglijke-epitheliale weefsels van elke individuele epitheel en stelt ons in staat om de heterogeniteit van de gehele epitheel gemakkelijk te onderzoeken in zijn geheel-mount epitheliale monsters.
Protocol
Discussion
In dit protocol beschrijven we de grove en fijne ontleding van het binnenoor sensorische epitheel van volwassen zebravissen, die ons in staat stelt weefselmonster voor te bereiden op het bestuderen van de cellulaire en subcellulaire kenmerken van de sensorische epitheel.
Met het oog op het uitvoeren van een succesvolle dissectie, de allereerste stap, fixatie, is erg belangrijk. Zorg ervoor dat u altijd vers bereide paraformaldehyde oplossing te gebruiken omdat oude oplossing zal resulteren i…
Acknowledgements
Dit onderzoek werd ondersteund door de Intramurale Research Program van de National Human Genome Research Institute, National Institutes of Health.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| MS222 (Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt) | Reagent | Sigma | A5040 | |
| PBS (Phosphate-buffered Saline, 10X) | Reagent | Mediatech | 46-013-CM | |
| Paraformaldehyde | Reagent | Sigma | P-6148 | |
| Triton X-100 | Reagent | Sigma | T8787 | |
| Alexa Fluor 488 phalloidin | Reagent | Invitrogen | A12379 | |
| VECTASHIELD Hard Set Mounting Medium with DAPI | Reagent | Vector Laboratories | H-1500 | |
| Dissection microscope | Microscope | Nikon | SMZ1000 | |
| Insect pins | Tool | Fine Science Tools | 26000-40 | |
| Scissors | Tool | Roboz | RS-5880 | |
| Tweezers | Tool | Roboz | RS-5045 | |
| Needle blade | Tool | Sharpoint | 78-6810 | |
| Fluorescent microscope | Microscope | Zeiss | Axiovert 200M | |
| Dissection pad | Tool | eNasco | SB07840M | |
| Zebrafish | Animal | various | n/a |
