Dissection גרוס פיין epithelia של האוזן הפנימית חושית למבוגרים דג הזברה ( Danio rerio)
Summary
האפיתל באוזן הפנימית החושית של דג הזברה מבוגר היא מערכת מודל טוב להבנת מנגנוני התחדשות התאים שיער חוליות מבוגר. פרוטוקול זה מדגים את לנתיחה קנס של האפיטל, שבאמצעותו אנו יכולים לקבל דגימות רקמה לחקר אירועי משובי ברמות הסלולר subcellular.
Abstract
נוירו epithelia באוזן הפנימית הם מבנים חיוני פונקציות השמיעה ושיווי המשקל. לכן, חשוב להבין את התכונות תאית ומולקולרית של האפיטל, אשר מורכב בעיקר שני סוגים של תאים: תאים שיער (HCS) ותאים תומכים (SCS). כאן אנו בוחרים ללמוד את epithelia האוזן הפנימית חושית דג הזברה מבוגר לא רק בגלל המבנים אפיתל הם שמור ביותר בכל חוליות למד, אלא גם משום דג הזברה מבוגר הוא מסוגל להתחדש HCS, יכולת כי היונקים לאבד זמן קצר לאחר הלידה. אנו משתמשים האוזן הפנימית של דג הזברה בוגר כמודל למערכת ללמוד את מנגנוני התחדשות פנימית HC אוזניים אצל בעלי החוליות מבוגר שיכול להיות מועיל עבור הטיפול הקליני של שמיעה / איזון גירעונות האדם כתוצאה של אובדן HC.
כאן אנו מדגימים איך לעשות והניתוחים הגולמי קנס של epithelia האוזן הפנימית חושית דג הזברה מבוגר. דיסקציה ברוטו מסיר את הרקמות הסובבות את האוזן הפנימית מועיל להכנת סעיפים רקמות, אשר מאפשר לנו לבחון את המבנה המפורט של epithelia החושי. דיסקציה בסדר שמנקה את אי – חושית, רקמות אפיתל של האפיתל בנפרד ומאפשר לנו לבחון את ההטרוגניות של האפיתל כל בקלות כל הר דגימות אפיתל.
Protocol
Discussion
בפרוטוקול זה, אנו תיאר את לנתיחה הגולמי קנס של epithelia האוזן הפנימית החושית של דג הזברה למבוגרים, אשר מאפשר לנו להכין דגימה לחקר תכונות הסלולר subcellular של epithelia החושי.
על מנת לבצע דיסקציה מוצלח, הצעד הראשון מאוד, קיבעון, הוא מאוד חשוב. ו?…
Acknowledgements
מחקר זה נתמך על ידי תוכנית המחקר עירונית הלאומי לחקר הגנום האנושי, המכונים הלאומיים לבריאות.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| MS222 (Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt) | Reagent | Sigma | A5040 | |
| PBS (Phosphate-buffered Saline, 10X) | Reagent | Mediatech | 46-013-CM | |
| Paraformaldehyde | Reagent | Sigma | P-6148 | |
| Triton X-100 | Reagent | Sigma | T8787 | |
| Alexa Fluor 488 phalloidin | Reagent | Invitrogen | A12379 | |
| VECTASHIELD Hard Set Mounting Medium with DAPI | Reagent | Vector Laboratories | H-1500 | |
| Dissection microscope | Microscope | Nikon | SMZ1000 | |
| Insect pins | Tool | Fine Science Tools | 26000-40 | |
| Scissors | Tool | Roboz | RS-5880 | |
| Tweezers | Tool | Roboz | RS-5045 | |
| Needle blade | Tool | Sharpoint | 78-6810 | |
| Fluorescent microscope | Microscope | Zeiss | Axiovert 200M | |
| Dissection pad | Tool | eNasco | SB07840M | |
| Zebrafish | Animal | various | n/a |
