प्रौढ़ Zebrafish में इनर कान संवेदी epithelia के सकल और ठीक विच्छेदन ( Danio rerio)
Summary
वयस्क zebrafish के भीतरी कान संवेदी उपकला वयस्क रीढ़ में बाल सेल पुनर्जनन के तंत्र को समझने के लिए एक अच्छा मॉडल प्रणाली है. इस प्रोटोकॉल epithelia के ठीक विच्छेदन, जिसके माध्यम से हम सेलुलर और subcellular स्तर पर पुनर्योजी घटनाओं का अध्ययन करने के लिए ऊतक के नमूने प्राप्त कर सकते हैं दर्शाता है.
Abstract
Neurosensory epithelia भीतरी कान में सुनने और शेष कार्यों के लिए महत्वपूर्ण संरचनाओं हैं. इसलिए, यह महत्वपूर्ण है epithelia, जो मुख्य रूप से कोशिकाओं के दो प्रकार से बना रहे हैं के सेलुलर और आणविक सुविधाओं को समझने: बाल (HCS) कोशिकाओं और समर्थन कोशिकाओं (एससी). यहाँ हम न केवल वयस्क zebrafish में भीतरी कान संवेदी epithelia अध्ययन है क्योंकि उपकला संरचनाओं अत्यधिक सभी अध्ययन रीढ़ में संरक्षित कर रहे हैं के लिए चुनते हैं, लेकिन भी क्योंकि वयस्क zebrafish HCS, एक क्षमता है कि स्तनधारियों के जन्म के बाद शीघ्र ही खो पुनर्जन्म में सक्षम है. हम एक मॉडल प्रणाली के रूप में वयस्क रीढ़ है कि कोर्ट के झड़ने के एक परिणाम के रूप में मानव में सुनवाई / संतुलन घाटे के नैदानिक उपचार के लिए सहायक हो सकता में भीतरी कान कोर्ट उत्थान के तंत्र का अध्ययन वयस्क zebrafish के भीतरी कान का उपयोग करें.
यहाँ हम कैसे करने के लिए वयस्क zebrafish में भीतरी कान संवेदी epithelia के सकल और ठीक dissections प्रदर्शित. सकल विच्छेदन भीतरी कान के आसपास के ऊतकों को हटा और ऊतक वर्गों, जो हमें संवेदी epithelia की विस्तृत संरचना की जांच करने के लिए अनुमति देता है की तैयारी के लिए उपयोगी है. ठीक विच्छेदन साफ प्रत्येक व्यक्ति उपकला के गैर संवेदी उपकला ऊतकों और हमें सक्षम बनाता है आसानी से पूरे माउंट उपकला नमूनों में पूरे उपकला की विविधता की जांच है.
Protocol
Discussion
इस प्रोटोकॉल में, हम वयस्क zebrafish, जो हमें संवेदी epithelia के सेलुलर और subcellular सुविधाओं का अध्ययन करने के लिए ऊतक का नमूना तैयार करने के लिए सक्षम बनाता है के भीतरी कान संवेदी epithelia के सकल और ठीक विच्छेदन में वर्णित ?…
Acknowledgements
इस शोध राष्ट्रीय मानव जीनोम रिसर्च इंस्टीट्यूट, राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान के अंदर का रिसर्च प्रोग्राम द्वारा समर्थित किया गया था.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| MS222 (Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt) | Reagent | Sigma | A5040 | |
| PBS (Phosphate-buffered Saline, 10X) | Reagent | Mediatech | 46-013-CM | |
| Paraformaldehyde | Reagent | Sigma | P-6148 | |
| Triton X-100 | Reagent | Sigma | T8787 | |
| Alexa Fluor 488 phalloidin | Reagent | Invitrogen | A12379 | |
| VECTASHIELD Hard Set Mounting Medium with DAPI | Reagent | Vector Laboratories | H-1500 | |
| Dissection microscope | Microscope | Nikon | SMZ1000 | |
| Insect pins | Tool | Fine Science Tools | 26000-40 | |
| Scissors | Tool | Roboz | RS-5880 | |
| Tweezers | Tool | Roboz | RS-5045 | |
| Needle blade | Tool | Sharpoint | 78-6810 | |
| Fluorescent microscope | Microscope | Zeiss | Axiovert 200M | |
| Dissection pad | Tool | eNasco | SB07840M | |
| Zebrafish | Animal | various | n/a |
