蛋白泛素化的检测
Summary
泛素化是一个关键的三种酶进行转录后修饰。在此修改有关的基因突变与许多不同的人类疾病。在这里，我们描述了协议检测培养细胞中的蛋白质的泛素<em>在体内</em>和试管<em>在体外</em>。
Abstract
泛素化，多肽靶蛋白的泛素共价结合，是一个重要的三种酶进行转录后修饰。它们包括泛素激活酶E1，泛素结合酶E2和泛素连接酶E3。不同于以E1和E2，E3泛素连接酶显示底物特异性。另一方面，众多deubiquitylating酶处理polyubiquitinated蛋白质的作用。泛素蛋白的稳定性，细胞定位及生物活性的变化可能导致。在参与泛素/ deubiquitination途径或系统功能改变泛的基因突变与许多不同的人类疾病，如癌症，神经退行性疾病和代谢性疾病，各类。改变或正常靶蛋白的泛素化的检测可能会提供一个更好地了解这些疾病的发病机制。在这里，我们描述了协议检测培养细胞中的蛋白质的泛素<em>在体内</em>和试管<em>在体外</em>。这些协议也用于检测其他泛素样小分子修饰，如sumolyation和neddylation。
Protocol
Discussion
在此演示中，我们首先描述的步骤，允许检测的兴趣培养的哺乳动物细胞中的蛋白质的泛素修饰。为了检测蛋白质的利益，不会对非共价键相互作用的蛋白质，泛素化，特别是，我们用一个严格的条件下裂解细胞，免疫沉淀和洗涤 1,3 。泛素化，反泛素免疫印迹在这样一个苛刻的条件的目标蛋白的免疫检测，因此可能是特定目标蛋白质。为了防止在实验过程中的蛋白质deubiquitination， 如…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是支持由美国国立卫生研究院拨款RO1 DC006497，RO1 NS057289，PO1 ES016738（张到Z）;加州再生医学赠款，RS1 – 00331 – 1研究所和RL1 – 00682 – 1（张到Z）;美国帕金森病协会（Z. Zhang和黏Choo的）和迈克尔J.福克斯帕金森病研究基金会（Z.张）。
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