Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Fare Adrenal Kromafin Hücre İzolasyonu

doi: 10.3791/129 Published: January 5, 2007

Summary

Adrenal medüller kromafin hücre kültürü sistemleri, in vitro ortamda bir uyarım-salgılanması kaplin çalışması için son derece yararlı. Bu protokol adrenaller incelemek ve sonra Adrenal korteks uzak sıyırma medüller bölgede izole etmek için kullanılan yöntemi göstermektedir. Tek kromafin hücrelerine medulla sindirim sonra gösterilmiştir.

Abstract

Adrenal medüller kromafin hücre kültürü sistemleri, in vitro ortamda bir uyarım-salgılanması kaplin çalışması için son derece yararlı. Bu protokol adrenaller incelemek ve sonra Adrenal korteks uzak sıyırma medüller bölgede izole etmek için kullanılan yöntemi göstermektedir. Tek kromafin hücrelerine medulla sindirim sonra gösterilmiştir.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Kısaltmalar:
TKK - Adrenal Kromafin Hücreler, E. Soln - Enzim Çözüm, E. DMEM - Zenginleştirilmiş Dulbecco'nun Modifiye Kartal Orta

  1. Hazırlık
    1. E. Soln (40 adet papain / 1 ml E. Soln.) Istenilen miktar papain ekleyin.
    2. Carbogen ile yaklaşık 15 dakika boyunca buz üzerinde papain etkinleştirin. Oxygenate Locke buz tampon olarak.
  2. Diseksiyon
    1. 8-10 hafta fareyi kullanın.
    2. Kaldırmak sindirim önce Locke'un tampon ve buz üzerinde yer oksijenli.
    3. Diseksiyon işlemi için video bakın.
    4. Eksize sonra, yer bezleri Locke'un tampon oksijenli.
  3. Bezinin hazırlanması
    1. Yağ bezi çıkarın.
    2. Bezinin korteks Şeridi'nde.
  4. Enzimatik Sindirim
    1. Steril filtre papain oksijenli.
    2. Petri oksijenli papain dört havuzları olun.
      1. 3 havuzları 100uls ilgili olmalıdır.
      2. Havuzlarının 1 400uls ile ilgili olmalıdır.
    3. Medullae havuzları ile yıkayın
      1. 1. 3 100ul havuzları ile.
      2. Bundan sonra 400ul havuzu ile
      3. Mikrofuge'de tüpe 400ul havuzu Pippette 300ul E. Soln ve medulla adet.
      4. Mikrofuge'de tüp ve yer Qrap parafilm 37 ° C su banyosunda 20 dk.
      5. Papain içeren oksijen kalan E. Soln devam etmeyi unutmayın.
      6. 20 dakika sonra steril filtre E. Soln.
      7. Yeni süzülmüş E. Soln eski E. Soln banyo medullae değiştirin.
  5. Triturations
    1. E. Soln aspire edin ve atın.
    2. 1ml E. DMEM medullae yıkayın.
    3. E. DMEM aspire edin ve atın.
    4. 1ml ucu 300ul E. DMEM ve çiğnemek 20X ekleyin.
    5. 200ul ucu steril bir jiletle kesin.
    6. Kesme 200ul ucu ile 5-10X Karışım.
    7. E. DMEM banyo medullae parçaları atın. Orta enkaz içerecektir.
    8. Adet medullae 300uls taze E. DMEM ekleyin.
    9. 200ul ucu 20x ile Karışım
    10. Pippette E. DMEM tüp withough medullae adet mikrofuge'de. Orta ücretsiz TKK içerecektir.
    11. Adet medullae 300uls taze E. DMEM ekleyin.
    12. 23.5 göstergesi şırınga iğnesi 20x medullae Karışım.
    13. E. hem triturations DMEM birleştirin. Medullae parçaları olmamalı ve şimdi bir kuş tüyü bir görünüme sahip olmalıdır.
  6. Kaplama
    1. 3.7g s 2.5 dakika için son iki öğütme adımları mikrofuge'de E. DMEM
    2. 50uls-200 E. DMEM sonraki deneyler bağlı olarak yeniden süspanse pelet.
    3. Plaka, bir cam lamel 10-30uls.
    4. Uymaları hücreleri için 15 dakika bekleyin.
    5. E. DMEM 750uls ekleyin.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Fare Adrenal Kromafin Hücre İzolasyonu
Play Video
PDF DOI

Cite this Article

Kolski-Andreaco, A., Cai, H., Currle, D. S., Chandy, K. G., Chow, R. H. Mouse Adrenal Chromaffin Cell Isolation. J. Vis. Exp. (2), e129, doi:10.3791/129 (2007).More

Kolski-Andreaco, A., Cai, H., Currle, D. S., Chandy, K. G., Chow, R. H. Mouse Adrenal Chromaffin Cell Isolation. J. Vis. Exp. (2), e129, doi:10.3791/129 (2007).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter