ووصف موت الخلايا المستندة للمقايسة الوكالة في محطات benthamiana نيكوتيانا.
ينظرون إلى مسببات الأمراض المحتملة في بيئتهم ، واستخدام النباتات مستقبلات التعرف على الأنماط (PRRs) موجودة على أغشية البلازما الخاصة بهم. PRRs الاعتراف ميزات الميكروبية الحفظ يسمى الممرض المرتبطة بأنماط الجزيئي (PAMPs) وهذا يؤدي إلى الكشف عن العوامل PAMP الحصانة (كونا) ، الذي يمنع بشكل فعال استعمار الأنسجة النباتية من غير مسببات 1،2. النظام الأكثر مدروسة في الوكالة هو السبيل 3 FLS2 المعتمدة. FLS2 تعترف flg22 PAMP الذي هو عنصر من عناصر فلاجيلين البكتيرية.
الممرضة الناجحة تمتلك عوامل الفوعة المستجيبات أو التي يمكن أن قمع الوكالة والسماح للالممرض لتسبب المرض 1. بعض النباتات بدورها تمتلك جينات المقاومة التي تكشف عن المستجيبات أو نشاطها ، مما يؤدي إلى تحفيز استخدام الحصانة المستجيب (ETI) 2.
وصفنا زنزانة المحكوم عليهم بالإعدام على أساس مقايسة للتعديل من الوكالة يا وCollmer 4. كانت موحدة في مقايسة N. benthamiana ، الذي يستخدم على نحو متزايد على نظام نموذجي لدراسة التفاعلات بين النبات والممرض 5. هي التي يسببها تسلل الوكالة لسلالة من البكتيريا المسببة للأمراض غير في الأوراق. سبع ساعات في وقت لاحق ، وهي السلالة البكتيرية التي تسبب المرض أو إما هو الذي ينشط ETI تسللت إلى منطقة تداخل المنطقة تسلل الأصلي. الوكالة الناجمة عن تسلل الأولى هي قادرة على تأخير أو منع ظهور موت الخلايا بسبب تسلل التحدي الثاني. على العكس ، وظهور موت الخلايا في منطقة تداخل التلقيح يدل على انهيار الوكالة.
وكانت أربع مجموعات مختلفة من المستحثات من الوكالة والتطعيمات التحدي موحدة (الجدول 1). تم اختبار الفحص على عدم إسكات N. benthamiana النباتات التي كانت بمثابة محطات مراقبة وإسكات للFLS2 التي يتوقع أن تتعرض للخطر في قدرتها على تطوير الوكالة.
ويمكن استخدام الخلية مقايسة الموت القائم على تحديد تورط الجينات في الوكالة. على سبيل المثال ، يمكن اختبار الخسارة من وظيفة الجين المسوخ عن الاهتمام باستخدام هذا الاختبار. من أصل 4 من تركيبات محفز والتطعيمات التحدي الوارد في الجدول رقم 1 ، فمن الممكن أن تركيبة واحدة فقط قد يؤدي إلى النمط الظاهري في الخلفية محطة الخاص بك. وقد لاحظنا أن النباتات لإسكات FLS2 تظهر انهيار الوكالة في الجبهة الوطنية / DC Pf/Q1-1 وتركيبات من محفز والتطعيمات التحدي (الجدول 1).
فمن الضروري أن الظروف البيئية للمقايسة قريبة قدر الإمكان من تلك الموصوفة في الجزء 3.1. الرطوبة المنخفضة أسباب موت الخلايا والمضي قدما بسرعة كبيرة جدا ، مما يجعل من الصعب فحص درجة. إذا كانت الشروط الواردة في بروتوكول لدينا لا تعمل في المختبر الخاص بك ، ثم حاول تغيير مستوى محفز أو التلقيح التحدي. مقياس آخر يمكن تعديلها هي الفجوة الزمنية بين الاستقراء والتحدي ، على الرغم من أننا قد وجدت أن الفجوات الزمنية الأقصر تسببت في مقايسة لكسر بسرعة كبيرة جدا في محطات التحكم.
نوصي بأن ما لا يقل عن 4-5 نباتات يتم اختبارها في تجربة وينبغي تكرار النمط الظاهري إيجابية في تجارب مستقلة على الأقل 3-4.
نشكر هاي سوك أوه ، مريللو جوان ألن وCollmer ، قسم أمراض النبات وعلم الأحياء النباتية ، ميكروب ، جامعة كورنيل ، لإجراء مناقشات قيمة. نشكر جيسي Munkvold للتعليقات على هذه المادة. تم توفير التمويل من قبل البرنامج الوطني لمؤسسة العلوم النباتية الجينوم ، وعدد الجوائز DBI – 0605059 (GBM).
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
MES | Fisher Scientific | BP300-100 | Prepare as a1M stock, adjust pH and filter sterilize. Store at room temperature. | |
Life Science UV/Vis Spectrophotometer | Beckman Coulter | DU 730 |