一个细胞死亡为基础的公共交通交汇处的检测在烟草benthamiana植物描述。
察觉到他们的环境中潜在的病原体,植物使用其细胞膜上的模式识别受体(PRRS)。 PRRS承认保守的微生物称为病原体相关分子模式(PAMPS)的功能,这种检测PAMP触发的免疫力(PTI),从而有效地防止非致病菌 1,2的定植植物组织。在公共交通交汇处的最深入研究的系统是FLS2 依赖途径3。 FLS2识别PAMP flg22是细菌鞭毛蛋白的一个组成部分。
成功的病原体具有致病因素或效应,可以抑制公共运输交汇处和允许的病原体引起的疾病 1 。反过来,有些植物具有耐药基因检测的效应或他们的活动,从而导致效应触发免疫“(ETI)2 。
我们描述了一个公共交通交汇处的细胞死亡为基础的检测OH和Collmer 4修改。该实验是在 N标准化benthamiana,正在越来越多地用来作为一个模型系统研究植物病原体的相互作用5。 PTI是诱导渗透到叶的非致病细菌菌株。七个小时后,一个细菌菌株引起的疾病或激活ETI是渗透到原来的渗透区重叠地区。第一浸润引起PTI是能够延缓或阻止细胞死亡的第二个挑战浸润的外观。相反,在接种重叠区的出现表明细胞死亡的一个公共交通交汇处的击穿。
4个公共交通交汇处和挑战接种诱导的不同组合进行了规范(见表1)。检测测试对非沉默北路benthamiana植物,作为控制和FLS2沉默的植物进行了预测,在他们的能力,发展公共交通交汇处受到损害。
可用于细胞死亡为基础的检测,以确定参与基因在公共交通交汇处。例如,一个感兴趣的基因丧失功能的突变体,可以使用这个实验测试。诱导和表1中给出的挑战接种的4种组合,这是可能的,只有一个组合可能会导致在您的工厂背景的表型。我们观察到植物FLS2沉默PF / DC和Pf/Q1-1诱导和挑战接种(见表1)组合在一个公共交通交汇处击穿。
它是必不可少的,检测的环境条件尽可能接近3.1部分所述。湿度低,导致细胞死亡进行太快,使检测难以得分。我们的协议中所描述的条件,如果不工作在自己的实验室,然后尝试改变诱导或挑战接种水平。另一个参数是可以修改的诱导和挑战之间的时间差距,虽然我们已经发现,较短的时间差距造成的检测,以打破在控制植物太快。
我们建议,至少4-5植物在实验测试和积极的表型应至少在3-4个独立实验重复。
我们感谢惠淑哦,乔安妮黑樱桃和阿兰Collmer,植物病理学和植物 – 微生物生物学系,康奈尔大学,有价值的讨论。我们感谢Munkvold文章评论杰西。是由美国国家科学基金会植物基因组计划提供资金,奖DBI – 0605059(GBM)的。