Nicotiana benthamiana पौधों में कोशिका मृत्यु आधारित पीटीआई के लिए परख वर्णित है.
अपने वातावरण में संभावित रोगज़नक़ों अनुभव करने के लिए, पौधों का उपयोग पैटर्न मान्यता रिसेप्टर्स (PRRs) अपने प्लाज्मा झिल्ली पर मौजूद है. PRRs संरक्षित माइक्रोबियल रोगज़नक़ जुड़े आणविक पैटर्न (PAMPs) कहा जाता है सुविधाओं को समझते हैं और यह पता लगाने के PAMP ट्रिगर (पीटीआई) प्रतिरक्षा, जो प्रभावी रूप से गैर – रोगज़नक़ों 1,2 द्वारा संयंत्र के ऊतकों की उपनिवेशण रोकता होता. पीटीआई में सबसे अच्छी तरह से अध्ययन प्रणाली मार्ग FLS2 3 निर्भर है. FLS2 PAMP flg22 है कि बैक्टीरियल flagellin का एक घटक है पहचानता है.
सफल रोगज़नक़ों विषैलापन कारकों या effectors कि पीटीआई को दबाने और रोगज़नक़ 1 बीमारी का कारण करने की अनुमति कर सकते हैं अधिकारी. बदले में कुछ पौधों प्रतिरोध जीन है कि effectors या उनकी गतिविधि है, जो effector ट्रिगर (ETI) रोगक्षमता 2 करने के लिए सुराग का पता लगाने के अधिकारी हैं.
हम पीटीआई के लिए एक सेल मौत आधारित परख ओह, और 4 Collmer से संशोधित वर्णन . परख एन में मानकीकृत किया गया था benthamiana, जो संयंत्र रोगज़नक़ 5 बातचीत के अध्ययन के लिए एक मॉडल प्रणाली के रूप में इस्तेमाल किया जा रहा है तेजी से. पीटीआई पत्तियों में एक गैर रोगजनक जीवाणु तनाव की घुसपैठ से प्रेरित है. सात घंटे बाद, एक जीवाणु तनाव है कि या तो इस बीमारी का कारण बनता है या जो सक्रिय ETI एक मूल घुसपैठ क्षेत्र अतिव्यापी क्षेत्र में घुसपैठ है. पहली घुसपैठ द्वारा प्रेरित पीटीआई देरी या सेल दूसरी चुनौती घुसपैठ के कारण मौत की उपस्थिति को रोकने में सक्षम है. इसके विपरीत, टीका के अतिव्यापी क्षेत्र में कोशिका मृत्यु की उपस्थिति पीटीआई के टूटने का संकेत है.
पीटीआई चुनौती और inoculations के inducers के चार विभिन्न संयोजनों मानकीकृत थे (1 टेबल). परख गैर खामोश एन पर परीक्षण किया गया था benthamiana पौधों है कि नियंत्रण और FLS2 के लिए खामोश पौधों है कि उनके पीटीआई विकसित करने की क्षमता में समझौता होने की भविष्यवाणी की थी के रूप में सेवा की.
कोशिका मृत्यु आधारित परख पीटीआई में एक जीन की भागीदारी निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. उदाहरण के लिए, ब्याज की एक जीन के लिए नुकसान के समारोह म्यूटेंट इस परख का उपयोग कर परीक्षण किया जा सकता है. Inducer और चुनौती तालिका 1 में दी गई inoculations के 4 संयोजन के से, यह संभव है कि केवल एक संयोजन अपने संयंत्र की पृष्ठभूमि में एक phenotype में परिणाम कर सकते हैं. हमने देखा है कि FLS2 पौधों के लिए खामोश फाल्सीपेरम / डीसी और inducer और चुनौती inoculations (1 टेबल) के Pf/Q1-1 संयोजन में पीटीआई के एक बे्रकडाउन शो.
यह आवश्यक है कि परख के लिए पर्यावरण की स्थिति के रूप में 3.1 पार्ट में वर्णित उन लोगों के लिए संभव के रूप में बंद कर रहे हैं. कम नमी कोशिका मृत्यु का कारण बनता है बहुत तेजी से आगे बढ़ना, परख स्कोर करने के लिए मुश्किल बना. यदि हमारे प्रोटोकॉल में वर्णित शर्तों अपनी प्रयोगशाला में काम नहीं करते, तो चुनौती या टीका inducer के स्तर में फेरबदल करने की कोशिश करें. एक और पैरामीटर संशोधित किया जा सकता है कि प्रेरण और चुनौती के बीच समय अंतराल है, हालांकि हमने पाया है कि कम समय अंतराल परख नीचे तोड़ने के लिए नियंत्रण पौधों में भी जल्दी कारण.
हम अनुशंसा करते हैं कि कम से कम 4-5 पौधों एक प्रयोग में परीक्षण किया है और एक सकारात्मक phenotype कम से कम 3-4 स्वतंत्र प्रयोगों में दोहराया जाना चाहिए.
हम बहुमूल्य विचार – विमर्श के लिए हाय – Sook ओह, Joanne मोरेल्लो और एलन Collmer प्लांट पैथोलॉजी और संयंत्र – जीवविज्ञान सूक्ष्म जीव विभाग, कॉर्नेल विश्वविद्यालय, धन्यवाद. हम लेख पर टिप्पणी के लिए जेसी Munkvold धन्यवाद. अनुदान राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन प्लांट जीनोम प्रोग्राम द्वारा प्रदान की गई थी, पुरस्कार संख्या DBI 0605059 (जीबीएम).
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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MES | Fisher Scientific | BP300-100 | Prepare as a1M stock, adjust pH and filter sterilize. Store at room temperature. | |
Life Science UV/Vis Spectrophotometer | Beckman Coulter | DU 730 |