Nicotiana benthamiana 공장에서 PTI에 대한 세포 죽음 기반 분석을 설명합니다.
자신의 환경에서 잠재적인 병원체를 인식하기 위해, 식물은 패턴 인식 수용체 (PRRs)가 자신의 플라즈마 점막에있는 사용합니다. PRRs는 병원체 – 관련 분자 패턴 (PAMPs)라는 미생물 보존 기능을 인식하고이 감지 효과적으로 비 병원균의 1,2에 의해 식물 조직의 식민을 방지 PAMP – 트리거 면역 (PTI)에 연결됩니다. PTI에서 가장 잘 연구 시스템 FLS2 – 의존 경로 3입니다. FLS2은 박테리아 flagellin의 구성 요소입니다 PAMP flg22를 인식합니다.
성공적인 병원균은 독성 요인이나 PTI을 억제하고 병원균이 질병 1가 발생할 수 있습니다 effectors을 보유하고 있습니다. 차례로 일부 식물 effectors 또는 효과기 – 트리거 면역 (ETI) 2 리드 그들의 활동을 감지 저항 유전자를 보유하고 있습니다.
우리는 아와 Collmer 4 수정 PTI에 대한 세포 사망 기반의 분석을 설명합니다. 분석은 N.의 표준되었습니다 식물 병원체 상호 작용 5 연구의 모델 시스템으로 점차 사용되고 있습니다 benthamiana. PTI는 나뭇잎으로 비 병원성 박테리아 스트레인의 침투에 의해 유발됩니다. 세븐 시간 후에, 그 박테리아 변종도 질병의 원인이나 어느 ETI 원래 침투 영역을 중복 영역으로 가득 활성화됩니다. 최초의 침투에 의해 유도된 PTI는 두 번째 도전 침투에 의한 세포 사망의 모양을 지연 또는 방지하기 위해 수 있습니다. 반대로, 접종의 중복 영역에서 세포 죽음의 모습은 PTI의 고장을 나타냅니다.
PTI 도전 예방 접종 inducers의 네 가지 조합 (표 1) 표준화되었습니다. 분석이 아닌 침묵 N.에서 테스트되었습니다 제어 및 PTI를 개발하는 능력에 손상 될 것으로 예측되었다 FLS2에 대한 입막음을 식물로 재직 benthamiana 식물.
세포 죽음을 기반 분석은 PTI에있는 유전자의 참여를 결정하는 데 사용할 수 있습니다. 예를 들어, 관심있는 유전자에 대한 손실 기능 돌연변이 분석을 사용하여 테스트하실 수 있습니다. 유도와 표 1에서 주어진 도전 예방 접종의 4 조합의 출력, 그것은 하나의 조합이 당신의 식물을 배경으로 표현형을 초래할 수도 있습니다. 우리는 FLS2에 대한 침묵 식물 PF / DC 및 유도 도전 예방 접종 (표 1) Pf/Q1-1 조합 PTI의 세부를 표시 것을 관찰했습니다.
그것은 분석을위한 환경 조건의 일부로 3.1에 설명된 것과 가능한 한 가까운 것을 중요합니다. 낮은 습도는 점수에 대한 분석이 어렵게 너무 빨리 진행하기 위해 세포를 파괴됩니다. 우리 프로토콜에서 설명한 조건이 연구실에 작동하지 않는 경우, 유도 또는 도전의 접종 수준을 변경하십시오. 우리가 짧은 시간 간격은 분석이 통제 공장에서 너무 빨리 무너뜨리는 원인 것으로 나타났습니다하지만 수정할 수 있습니다 또 다른 매개 변수는 유도와 도전 사이의 시간 간격입니다.
우리는 적어도 4-5 식물 실험에 테스트하고 긍정적인 표현형 적어도 3-4 독립적인 실험으로 반복되어야하는 것이 좋습니다.
우리는 귀중한 토론 이완 – 숙 아, 조앤 모렐로와 앨런 Collmer, 식물 병리학과 식물 – 미생물의 생물학학과, 코넬 대학, 감사합니다. 우리는이 기사에 대한 의견을 제시 Munkvold 감사합니다. 기금은 국립 과학 재단 (National Science Foundation)의 식물 게놈 프로그램에 의해 제공되었다, 보너스 번호 DBI – 0605059 (GBM).
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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MES | Fisher Scientific | BP300-100 | Prepare as a1M stock, adjust pH and filter sterilize. Store at room temperature. | |
Life Science UV/Vis Spectrophotometer | Beckman Coulter | DU 730 |