PTI Nicotiana benthamiana bitkiler için bir hücre ölümü tabanlı test açıklanmıştır.
Çevreleri potansiyel patojen algıladıkları için, bitkiler, örüntü tanıma reseptörleri (PRRs) plazma membranlar mevcut kullanın. PRRs patojen ilişkili moleküler desenleri (PAMPs) olarak adlandırılan korunmuş mikrobiyal özelliklerini tanımak ve bu algılama, etkili olmayan patojenlerin 1,2 bitki dokularında kolonizasyonu engeller PAMP tetiklenen bağışıklık (PTI), yol açar. PTI içinde en çok çalışılan sistem FLS2-bağımlı yolak 3. FLS2 bakteriyel flagellin bir bileşeni olan PAMP flg22 tanır.
Başarılı patojenlerin virülans faktörleri veya PTI bastırmak ve patojen hastalık 1 neden izin etkileyiciler sahiptir. Sırayla Bazı bitkiler effektör veya efektör tetiklenen bağışıklık (ETİ) 2 yol açar faaliyet tespit direnç genlerine sahip.
Oh ve Collmer 4 değiştirilmiş PTI için bir hücre ölümü tabanlı test açıklar. Testin N. standardize benthamiana giderek bitki-patojen etkileşimi 5 çalışma için bir model sistemi olarak kullanılmaktadır. PTI, bir yaprak patojen olmayan bakteri suşunun infiltrasyonu indüklenir. Yedi saat sonra, bir bakteri suşunun da hastalığa neden ya da ETİ orijinal infiltrasyon bölge örtüşen bir alana sızmış harekete geçirir. Ilk infiltrasyonu ile indüklenen PTI görünümünü ikinci bir meydan okuma infiltrasyon nedeniyle hücre ölümü geciktirmek veya önlemek mümkün. Tersine, inokülasyon örtüşen alanda hücre ölümüne görünümünü PTI bir dökümünü gösterir.
PTI ve meydan aşılar indükleyicileri dört farklı kombinasyon standardize edilmiştir (Tablo 1). Tahlil sessiz N. üzerinde test edildi benthamiana bitkiler kontrolü ve PTI geliştirmek için yeteneklerini tehlikeye gireceği tahmin edilmiştir FLS2 için susturuldu bitkiler olarak görev yaptı.
Hücre ölümü tabanlı test PTI bir gen katılımı belirlemek için kullanılır. Örneğin, bir gen ilgi kaybı fonksiyon-mutantlar Bu testte kullanılarak test edilebilir. Indükleyicisi ve Tablo 1'de verilen mücadele aşılar 4 kombinasyonları Out, sadece tek bir kombinasyonu bitki arka planda bir fenotip neden olabilir mümkündür. Biz FLS2 susturulması için bitkiler Pf / DC ve indükleyicisi ve meydan aşılar (Tablo 1) Pf/Q1-1 kombinasyonları PTI bir dökümünü gösterir olduğunu gözlemledik.
Bu testi için çevre koşulları, Bölüm 3.1 'de açıklanan olanlar mümkün olduğu kadar yakın olduğunu esastır. Düşük nem puan tahlil zorlaştırır, çok hızlı devam etmek için hücre ölümüne neden olur. Protokolde belirtilen şartlar laboratuarında işe yaramazsa, daha sonra indükleyicisi veya meydan aşılama düzeyini değiştirerek deneyin. Değiştirilmiş olabilir başka bir parametre daha kısa zaman aralıkları tahlil kontrolü bitkiler çok hızlı bir şekilde yıkmak için neden olduğu bulundu olmasına rağmen, gidiş ve meydan arasındaki zaman aralığı.
Biz en az 4-5 bitkiler bir deneyde test edilmesi ve olumlu bir fenotip en az 3-4 bağımsız deneyler tekrar edilmesi önerilir.
Hye-Sook Oh, Joanne Morello ve Alan Collmer, Bitki Patolojisi ve Bitki-Mikrop Biyoloji Bölümü, Cornell Üniversitesi, değerli tartışmalar için teşekkür ederiz. Biz Jesse Munkvold yazı hakkında yorum için teşekkür ederim. Finansman Ulusal Bilim Vakfı Bitki Genomu Programı tarafından sağlanan, ödül sayısı DBI-0605059 (GBM).
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
MES | Fisher Scientific | BP300-100 | Prepare as a1M stock, adjust pH and filter sterilize. Store at room temperature. | |
Life Science UV/Vis Spectrophotometer | Beckman Coulter | DU 730 |