Summary
Stemgent Dox inducible माउस TF lentivirus सेट माउस भ्रूणीय fibroblasts (MEFs) प्रेरित pluripotent स्टेम सेल (आईपीएस) के लिए reprogram कर सकते हैं. यहाँ हम माउस reprogramming में प्रतिलेखन Oct4 कारकों के Dox-inducible अभिव्यक्ति के लिए प्रोटोकॉल का प्रदर्शन, Sox2 Klf4, और सी Myc आईपीएस कालोनियों कि व्यक्त आम एमईएस pluripotency मार्करों उत्पन्न करने के लिए.
Abstract
प्रतिलेखन कारकों और सेल संस्कृति शर्तों के एक परिभाषित सेट का प्रयोग, Yamanaka और उनके सहयोगियों ने दिखा दिया कि retrovirus की मध्यस्थता वितरण और Oct4 की अभिव्यक्ति, Sox2, सी Myc और Klf4 माउस fibroblasts में pluripotency उत्प्रेरण के लिए सक्षम है 1 इसके बाद रिपोर्ट उपयोगिता का प्रदर्शन डॉक्सीसाइक्लिन (Dox) दोनों को प्राथमिक और माध्यमिक अन्य वयस्क माउस दैहिक सेल प्रकार की एक किस्म से आईपीएस कोशिकाओं की पीढ़ी के लिए lentiviral वितरण प्रणाली inducible 2,3.
प्रेरित pluripotent स्टेम सेल (आईपीएस) आकारिकी, प्रसार, और teratoma गठन को प्रेरित करने की क्षमता में भ्रूण स्टेम कोशिकाओं (ते) के लिए समान हैं. सेल के दोनों प्रकार के pluripotent पुनर्योजी चिकित्सा में विभेदित कोशिकाओं या ऊतकों की पीढ़ी के लिए सामग्री शुरू करने के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है 4-6 आईपीएस कोशिकाओं को भी ES कोशिकाओं पर एक विशिष्ट लाभ है के रूप में वे के नैतिक दुविधा बिना ES कोशिकाओं के प्रमुख गुण एक्ज़िबिट. भ्रूण विनाश.
यहाँ हम Stemgent Dox inducible माउस TF lentivirus सेट के साथ माउस भ्रूण fibroblast कोशिकाओं (MEF) reprogramming के लिए प्रोटोकॉल का प्रदर्शन. हम यह भी दिखाना है कि Stemgent Dox inducible माउस TF lentivirus सेट MEFs में पारगमन पर चार प्रतिलेखन कारकों के प्रत्येक व्यक्त जिससे कि pluripotency ES कोशिकाओं की विशेषता मार्करों को प्रदर्शित करता है एक pluripotent स्टेम सेल राज्य उत्प्रेरण के लिए सक्षम है.
Protocol
Discussion
इन परिणामों दिखाना है कि Stemgent Dox inducible माउस TF lentivirus सेट करने के लिए कुशलतापूर्वक के अस्थानिक अभिव्यक्ति उत्प्रेरण द्वारा आईपीएस कालोनियों को उत्पन्न करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है माउस भ्रूणीय fibroblasts में प्रतिलेखन कारकों transduced. जब reprogramming प्रयोगों डिजाइन, कई चर reprogramming की दक्षता का अनुकूलन करने के लिए विचार किया जाना चाहिए. सबसे पहले, यह संभव है को बढ़ाने या पारगमन दक्षता में कमी, जिससे लक्ष्य सेल की आबादी में एकीकृत वायरस की संख्या को प्रभावित प्राथमिक संक्रमण चरण के दौरान सक्रिय कक्ष वायरस लक्ष्य अनुपात (यानी MOI) को संशोधित. दूसरा, कोशिकाओं Dox उजागर कर रहे हैं समय की लंबाई का समायोजन आईपीएस सेल कॉलोनी पीढ़ी की दक्षता को प्रभावित कर सकते हैं. तीसरा, reprogramming लक्ष्य कोशिकाओं की proliferative क्षमता प्रभाव, के रूप में कोशिकाओं जो सक्रिय रूप से बढ़ रहे हैं और विभाजित अधिक reprogramming करने के लिए उत्तरदायी हैं कर सकते हैं. अंत में, जब अलग सेल नंबर या अलग आकार ऊतक संस्कृति व्यंजन के लिए प्रोटोकॉल को संशोधित, यह अनुशंसा की जाती है कि लक्ष्य कक्ष संख्या आनुपातिक संस्कृति डिश की सतह क्षेत्र के लिए समायोजित किया जा.
Disclosures
लेखक, ब्राड हैमिल्टन, Stemgent द्वारा नियोजित है कि अभिकर्मकों और इस लेख में इस्तेमाल उपकरणों का उत्पादन.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DOX Inducible Mouse TF Concentrated Lentifirus Set | Stemgent | 00-0003 |
References
- Takahashi, K., Yamanaka, S. Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors. Cell. 126, 663-676 (2006).
- Aoi, T., Yae, K., Nakagawa, M., Ichisaka, T., Okita, K., Takahashi, K., Chiba, T., Yamanaka, S. Generation of pluripotent stem cells from adult mouse liver and stomach cells. Science. 321, 699-702 (2008).
- Yu, J., Vodyanik, M. A., Smuga-Otto, K., Antosiewicz-Bourget, J., Frane, J. L., Tian, S., Nie, J., Jonsdottir, G. A., Ruotti, V., Stewart, R., Slukvin, I. I., Thomson, J. A. Induced pluripotent stem cell lines derived from human somatic cells. Science. 318, 1917-1920 (2007).
- Murry, C. E., Keller, G. Differentiation of embryonic stem cells to clinically relevant populations: lessons from embryonic development. Cell. 132, 661-680 (2008).
- Lerou, P. H., Daley, G. Q. Therapeutic potential of embryonic stem cells. Blood Rev. 19, 321-331 (2005).
- Wernig, M., Meissner, A., Foreman, R., Brambrink, T., Ku, M., Hochedlinger, K., Bernstein, B. E., Jaenisch, R. In vitro reprogramming of fibroblasts into a pluripotent ES-cell-like state. Nature. 448, 318-324 (2007).
