Summary
Die Stemgent Dox Inducible Maus TF Lentivirus Set kann embryonalen Maus-Fibroblasten (MEFs), um induzierte pluripotente Stammzellen (iPS-Zellen) neu zu programmieren. Hier haben wir das Protokoll für DOX-induzierbare Expression von Maus Umprogrammierung Transkriptionsfaktoren Oct4 zu demonstrieren, Sox2, Klf4 und c-Myc iPS Kolonien, die ausdrückliche gemeinsamen mES Pluripotenz Marker zu generieren.
Abstract
Mit einem definierten Satz von Transkriptionsfaktoren und Zellkultur-Bedingungen zeigte Yamanaka und seine Kollegen, dass Retrovirus-vermittelte Lieferung und die Expression von Oct4, Sox2, c-Myc und Klf4 induzieren kann Pluripotenz in Maus-Fibroblasten ist. 1 Nachfolgende Berichte haben gezeigt, das Dienstprogramm der Doxycyclin (DOX) induzierbare lentivirale Abgabesystem für die Erzeugung von primären und sekundären iPS-Zellen aus einer Vielzahl von anderen erwachsenen Maus somatische Zelltypen. 2,3
Induzierte pluripotente Stammzellen (iPS-Zellen) sind ähnlich wie embryonale Stammzellen (ES-Zellen) in der Morphologie, Proliferation und die Fähigkeit, Teratom-Bildung zu induzieren. Beide Zelltypen können als pluripotent Ausgangsmaterial für die Erzeugung von differenzierten Zellen oder Gewebe in der regenerativen Medizin eingesetzt werden. 4-6 iPS-Zellen haben auch einen entscheidenden Vorteil gegenüber embryonalen Stammzellen, da sie wichtige Eigenschaften von ES-Zellen ohne das ethische Dilemma der Ausstellung Embryo zerstört.
Hier zeigen wir das Protokoll für die Reprogrammierung embryonalen Maus-Fibroblasten (MEF)-Zellen mit dem Stemgent DOX Inducible Maus TF Lentivirus Set. Wir zeigen auch, dass die Stemgent DOX Inducible Maus TF Lentivirus Set auszudrücken vermag jede der vier Transkriptionsfaktoren auf Transduktion in MEFs dabei wird eine pluripotente Stammzelle, dass die Pluripotenz Marker charakteristisch für ES-Zellen anzeigt.
Protocol
Discussion
Diese Ergebnisse zeigen, dass die Stemgent DOX Inducible Maus TF Lentivirus Set verwendet werden, um effizient zu generieren iPS Kolonien durch Induktion der ektopische Expression von transduziert werden Transkriptionsfaktoren in embryonalen Maus-Fibroblasten. Bei der Gestaltung Umprogrammierung Experimente sollten mehrere Variablen berücksichtigt, um die Effizienz der Reprogrammierung zu optimieren. Erstens ist es möglich, die aktive Virus-to-Target-Zelle-Verhältnis (dh MOI) während der Erstinfektion Schritt zu erhöhen oder zu verringern Transduktionseffizienz, wird dadurch beeinträchtigt die Anzahl der integrierten Viren in die Zielzelle Bevölkerung zu ändern. Zweitens kann die Anpassung der Länge der Zeit werden die Zellen in DOX ausgesetzt Einfluss auf die Effizienz der iPS-Zelle Kolonie Generation. Drittens kann die proliferative Kapazität der Zielzellen Auswirkungen Umprogrammierung, wie Zellen, die aktiv wachsen und Dividieren zugänglicher Umprogrammierung sind. Schließlich bei der Änderung des Protokolls für verschiedene Zellzahlen oder unterschiedlicher Größe Gewebekulturschalen, ist es empfehlenswert, dass Zielzelle Zahlen proportional zur Oberfläche der Kulturschale eingestellt werden.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DOX Inducible Mouse TF Concentrated Lentifirus Set | Stemgent | 00-0003 |
References
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