Summary
Stemgent 독스의 Inducible 마우스 TF의 Lentivirus 세트 유도된 pluripotent 줄기 (IPS) 셀에 마우스 배아 섬유아 세포 (MEFs)를 재설 정할 수 있습니다. 다음은 마우스 프로그래밍 전사 요인 Oct4의 독스 - inducible 표현에 대한 프로토콜을 보여줍니다, Sox2, Klf4과 c - Myc은 표현하는 일반적인 MES pluripotency 마커 IPS의 식민지를 생성합니다.
Abstract
전사 요인과 세포 배양 조건 정의된 집합을 사용하여, 야마 나카와 동료는 레트로 바이러스 - 중재 전달과 표현 Oct4의 Sox2, C - Myc, 그리고 Klf4가 마우스 섬유아 세포에서 pluripotency 유도 할 수 있다고 증명 1. 후속 보고서 유틸리티를 보여준 doxycycline의 (독스) 기타 성인 마우스 체세포 유형의 다양한 기본 및 보조 모두 IPS 세포의 생성을 위해 lentiviral 전달 시스템을 inducible. 2,3
유도 pluripotent 줄기 (IPS) 세포는 형태, 증식 및 기형 종의 형성을 유도하는 능력 배아 줄기 (ES) 세포와 유사합니다. 세포의 두 종류의 재생 의료의 차별화된 세포 또는 조직의 생성에 대한 pluripotent 시작 재료로 사용할 수 있습니다.들이의 윤리적 딜레마없이 ES 세포의 주요 특성을 전시 등 4-6 IPS 세포는 또한 ES 세포에 비해 뚜렷한 이점을 가지고 배아 파괴.
여기서 우리는 Stemgent 독스의 Inducible 마우스 TF Lentivirus 세트와 마우스 배아 fibroblast (MEF) 세포를 프로그래밍을위한 프로토콜을 보여줍니다. 우리는 또한 Stemgent 독스의 Inducible 마우스 TF의 Lentivirus 세트는 따라서 ES 세포의 특징 pluripotency 마커를 표시하는 pluripotent 줄기 세포 상태를 유도 MEFs로 도입에 따라 네 개의 전사 요소의 각을 표현 할 수 있다고 설명합니다.
Protocol
Discussion
이러한 결과는 생쥐 배아 섬유아 세포에서 전사 요소를 transduced Stemgent 독스의 Inducible 마우스 TF의 Lentivirus 세트가 효율적으로의 이소성 표현을 유도하여 IPS의 식민지를 생성하는 데 사용할 수있는 것을 보여줍니다. 프로그래밍 실험을 설계할 때, 몇 가지 변수는 프로그래밍의 효율성을 최적화하는 것으로 간주되어야합니다. 첫째, 따라서 대상 셀 인구에 통합 바이러스의 숫자에 영향을 미치는, 전달 효율을 증가 또는 감소에 대한 기본 감염 단계에서 활성 바이러스 - 투 - 대상 세포 비율 (예 : 뫄)을 수정할 수 있습니다. 둘째, 세포 독스에 노출되는 시간의 길이를 조정하면 IPS 세포 콜로니 생성의 효율성에 영향을 줄 수 있습니다. 적극적인 성장과 분열 아르 셀 프로그래밍에 더 많은 의무가 있으므로 셋째, 대상 세포의 proliferative 용량, 프로그래밍 영향을 줄 수 있습니다. 마지막으로, 다른 휴대 전화 번호 또는 다른 크기의 조직 문화 요리에 대한 프로토콜을 수정할 때, 그것은 대상 셀 번호가 문화 요리의 표면 영역에 비례 조정하는 것이 좋습니다.
Disclosures
저자, 브래드 해밀턴은이 문서에서 사용되는 시약 및 악기를 생산 Stemgent으로 고용됩니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DOX Inducible Mouse TF Concentrated Lentifirus Set | Stemgent | 00-0003 |
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