Summary
Stemgent Doxの誘導性マウスTFのレンチセットは、人工多能性幹（iPS）細胞に、マウス胚性繊維芽細胞（MEF）を再プログラムすることができます。ここでは、マウスプログラミング転写因子Oct4のDOX誘導性発現のためのプロトコルを示す、レトロウイルスベクター、KLF4およびc - Mycが発現する共通のMES多分化能マーカーのiPSコロニーを生成する。
Abstract
転写因子と細胞培養条件の定義セットを使用して、山中らは、レトロウイルス媒介送達および発現Oct4の、レトロウイルスベクター、c - Mycの、とKLF4がマウスの線維芽細胞における多能性誘導できることを実証した1以後のレポートは、ユーティリティを実証したドキシサイクリンの（DOX）他の大人のマウスの体細胞型のさまざまなプライマリおよびセカンダリの両方のiPS細胞の生成にレンチウイルスの配信システム誘導性。2,3
人工多能性幹（iPS）細胞は、形態、増殖と奇形腫の形成を誘導する能力の胚性幹（ES）細胞に類似しています。細胞の両方のタイプは、再生医療において、分化細胞または組織の世代のための多能性出発原料として使用することができます。4-6 iPS細胞は、それらがの倫理的ジレンマなしでES細胞の主要な特性を示すとしても、ES細胞上の明確な利点を持っている胚の破壊。
ここではStemgent DOX誘導性マウスTFレンチセットで、マウス胚性線維芽細胞（MEF）細胞を再プログラミングするためのプロトコルを示す。我々はまた、Stemgent DOX誘導性マウスTFのレンチセットは、それによってES細胞の特徴的な多分化能マーカーを表示する多能性幹細胞の状態を誘導するのMEFに伝達時に4つの転写因子のそれぞれを発現可能であることを示している。
Protocol
Discussion
これらの結果は、マウス胚線維芽細胞での転写因子を形質導入Stemgent DOX誘導性マウスTFのレンチセットが効率的に異所性発現を誘導することによりiPS細胞のコロニーを生成するために使用できることを示している。プログラミングの実験を設計するとき、いくつかの変数がリプログラミングの効率を最適化するために考慮されるべきである。まず、それによって標的細胞集団に統合されたウイルスの数に影響を与える、導入効率を増加または減少させる一次感染の段階でアクティブなウイルスから標的細胞の比（すなわちMOI）を変更することが可能です。第二に、細胞はDOXにさらされている時間の長さを調整すると、iPS細胞のコロニーの生成の効率に影響を与える可能性があります。活発に分裂を重ねて成長している細胞の再プログラミングに適しているとして、第三に、標的細胞の増殖能は、再プログラミング影響を及ぼす可能性があります。最後に、別のセルの番号または異なるサイズの組織培養皿のためのプロトコルを変更する際に、それが標的細胞数が培養皿の表面積に比例して調整することをお勧めします。
Disclosures
著者、ブラッドハミルトンは、この記事で使用した試薬と器具を生産するStemgentによって採用されている。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DOX Inducible Mouse TF Concentrated Lentifirus Set | Stemgent | 00-0003 |
References
- Takahashi, K., Yamanaka, S. Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors. Cell. 126, 663-676 (2006).
- Aoi, T., Yae, K., Nakagawa, M., Ichisaka, T., Okita, K., Takahashi, K., Chiba, T., Yamanaka, S. Generation of pluripotent stem cells from adult mouse liver and stomach cells. Science. 321, 699-702 (2008).
- Yu, J., Vodyanik, M. A., Smuga-Otto, K., Antosiewicz-Bourget, J., Frane, J. L., Tian, S., Nie, J., Jonsdottir, G. A., Ruotti, V., Stewart, R., Slukvin, I. I., Thomson, J. A. Induced pluripotent stem cell lines derived from human somatic cells. Science. 318, 1917-1920 (2007).
- Murry, C. E., Keller, G. Differentiation of embryonic stem cells to clinically relevant populations: lessons from embryonic development. Cell. 132, 661-680 (2008).
- Lerou, P. H., Daley, G. Q. Therapeutic potential of embryonic stem cells. Blood Rev. 19, 321-331 (2005).
- Wernig, M., Meissner, A., Foreman, R., Brambrink, T., Ku, M., Hochedlinger, K., Bernstein, B. E., Jaenisch, R. In vitro reprogramming of fibroblasts into a pluripotent ES-cell-like state. Nature. 448, 318-324 (2007).
