Summary
يمكن للمحرض دوكس Stemgent ماوس TF تعيين الفيروسة البطيئة إعادة برمجة الخلايا الليفية الماوس الجنينية (MEFs) إلى الخلايا المحفزة التي يسببها (آي بي إس) الجذعية. نحن هنا لشرح بروتوكول للDOX - محرض التعبير من العوامل الماوس النسخ برمجة Oct4 ، Sox2 ، وKlf4 ج Myc إلى توليد المستعمرات التي تعبر عن الجذع المشترك علامات MES تعدد القدرات.
Abstract
باستخدام مجموعة محددة من عوامل النسخ وظروف ثقافة الخلية ، ياماناكا وزملاؤه أظهرت أن الفيروس الارتجاعي بوساطة التسليم والتعبير عن Oct4 ، Sox2 ، C - Myc وKlf4 قادر على حمل تعدد القدرات في الخلايا الليفية الماوس. 1 التقارير اللاحقة أثبتت فائدة من الدوكسيسيكلين (DOX) محرض lentiviral نظام التسليم لتوليد خلايا الجذع في المرحلتين الابتدائية والثانوية من مجموعة متنوعة من غيرها من أنواع الماوس الكبار الخلية الجسدية. 2،3
الجذعية المحفزة التي يسببها (آي بي إس) خلايا مماثلة للخلايا الجنينية (ES) الجذعية في الانتشار ، والقدرة على التشكل للحث على تشكيل مسخي. ويمكن استخدام كلا النوعين من الخلايا مثل المادة المحفزة انطلاق لجيل من الخلايا أو الأنسجة المختلفة في مجال الطب التجديدي. 4-6 خلايا الجذع أيضا أن يكون لها ميزة واضحة على خلايا ES لأنها مفتاح خواص الخلايا من دون وفاق معضلة أخلاقية جنين التدمير.
نحن هنا لشرح بروتوكول لإعادة برمجة الخلايا الليفية الماوس الجنينية (MEF) الخلايا مع محرض DOX Stemgent تعيين ماوس الفيروسة البطيئة TF. علينا أيضا أن تثبت محرض DOX Stemgent ماوس TF تعيين الفيروسة البطيئة هي قادرة على التعبير عن كل واحد من عوامل النسخ four على تنبيغ في MEFs مما يحفز الخلية الجذعية المحفزة الدولة الذي يعرض العلامات المميزة للخلايا تعدد القدرات وفاق.
Protocol
Discussion
هذه النتائج تثبت أنه يمكن استخدام الماوس محرض DOX Stemgent TF تعيين الفيروسة البطيئة لتوليد بكفاءة الجذع المستعمرات بالتحريض على التعبير خارج الرحم من transduced عوامل النسخ في الخلايا الليفية الماوس الجنينية. عند تصميم التجارب برمجة ، ينبغي النظر في متغيرات عدة لتحسين كفاءة إعادة برمجة. الأول ، أنه من الممكن تعديل نسبة الخلايا النشطة الفيروس إلى الهدف (أي وزارة الداخلية) أثناء الخطوة الإصابة الأولية إلى زيادة أو نقصان الكفاءة تنبيغ ، مما يؤثر على عدد من الفيروسات متكامل في الهدف السكان الخلية. الثانية ، يمكن تعديل طول الوقت تتعرض الخلايا لDOX يؤثر على كفاءة الخلية الجذع الجيل مستعمرة. ثالثا ، يمكن للقدرة التكاثري للتأثير إعادة برمجة الخلايا المستهدفة ، والخلايا التي تنمو بشكل نشط وتقسيم أكثر قابلية لإعادة البرمجة. أخيرا ، عند تعديل البروتوكول لأعداد مختلفة من الخلايا أو أطباق مختلفة ثقافة حجم الأنسجة ، فمن المستحسن أن تعدل أرقام الخلية المستهدفة نسبيا إلى مساحة الصحن الثقافة.
Disclosures
ويستخدم المؤلف ، براد هاملتون ، الذي ينتج بواسطة Stemgent الكواشف والأدوات المستخدمة في هذه المقالة.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DOX Inducible Mouse TF Concentrated Lentifirus Set | Stemgent | 00-0003 |
References
- Takahashi, K., Yamanaka, S. Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors. Cell. 126, 663-676 (2006).
- Aoi, T., Yae, K., Nakagawa, M., Ichisaka, T., Okita, K., Takahashi, K., Chiba, T., Yamanaka, S. Generation of pluripotent stem cells from adult mouse liver and stomach cells. Science. 321, 699-702 (2008).
- Yu, J., Vodyanik, M. A., Smuga-Otto, K., Antosiewicz-Bourget, J., Frane, J. L., Tian, S., Nie, J., Jonsdottir, G. A., Ruotti, V., Stewart, R., Slukvin, I. I., Thomson, J. A. Induced pluripotent stem cell lines derived from human somatic cells. Science. 318, 1917-1920 (2007).
- Murry, C. E., Keller, G. Differentiation of embryonic stem cells to clinically relevant populations: lessons from embryonic development. Cell. 132, 661-680 (2008).
- Lerou, P. H., Daley, G. Q. Therapeutic potential of embryonic stem cells. Blood Rev. 19, 321-331 (2005).
- Wernig, M., Meissner, A., Foreman, R., Brambrink, T., Ku, M., Hochedlinger, K., Bernstein, B. E., Jaenisch, R. In vitro reprogramming of fibroblasts into a pluripotent ES-cell-like state. Nature. 448, 318-324 (2007).
