A Novel RFP Reporter till stöd i Visualisering av Eye Imaginal skiva i Drosophila</em

Summary

Vi beskriver en roman rött fluorescerande protein (RFP) reporter som uttrycks specifikt i<em> Drosophila</em> Ögat. Vi detaljerat en metod för dissekering av ögat imaginal skivan och hur detta reporter kan användas för stöd i dissekering och identifiering av specifika celltyper i utvecklingsländerna ögat.

Abstract

Den<em> Drosophila</em> Ögat är en kraftfull modell för att studera områden som neurogenes, signaltransduktion och neurodegeneration. Många av de upptäckter som gjorts med hjälp av detta system har dragit fördel av den Spatiotemporal natur fotoreceptor differentiering i utvecklingsländerna ögat imaginal skiva. För att använda detta system är det först nödvändigt för forskaren att lära sig att identifiera och dissekera ögat skivan. Vi beskriver en roman RFP reporter till stöd i identifieringen av ögat skivan och visualisering av specifika celltyper i utvecklingsländerna ögat. Vi detaljerat en metod för dissektion av ögat imaginal skivan från tredje INSTAR larver och beskriva hur ögat-RFP reporter kan stöd i denna dissektion. Denna ögon-RFP reporter enbart uttrycks i ögonen och kan visualiseras med hjälp av fluorescensmikroskopi antingen levande vävnad eller efter fixering utan behov av signalförstärkning. Vi visar också hur detta reporter kan användas för att identifiera specifika celler typer i ögat skivan. Detta protokoll och användning av eye-RFP reporter kommer att hjälpa forskare som använder<em> Drosophila</em> Öga för att ta itu fundamentalt viktiga biologiska frågeställningar.

Protocol

<ol><li> Första plats en droppe PBS på en Sylgard fat under en dissekera mikroskop.</li><li> Nästa bort flera vandrande third INSTAR larver från en flaska eller burk med hjälp av en spatel och placera dem i PBS.</li><li> För att börja dissekera använda din vänstra hand pincett (om du till höger lämnas) att greppa en larv två tredjedelar av vägen mot den bakre och sedan använda det andra paret att hålla mörka munnen krokar i framändan.</li><li> Nu drar du försiktigt larven isär genom att flytta både pa…

Discussion

Dissekering av Drosophila ögat imaginal skiva är enkelt, men kan ta tid att bemästra. De kritiska steg är identifieringen av ögat skivan och dess dissektion bort från larver hjärnan. Identifiering av ögat skivan underlättas med hjälp av eye-RFP linje som beskrivs här. Möjliga ändringar för att ta bort antennal skivan eller peripodial membran, eller lämna den optiska loben bifogas visualisera PR axoner in i hjärnan.

Ögat-RFP linje skapades genom kloning en roman öga…