Un journaliste Roman DP pour faciliter la visualisation du disque Eye Imaginal au Drosophile</em

Summary

Nous décrivons une nouvelle protéine fluorescente rouge (RFP) journaliste qui est exprimé spécifiquement dans le<em> Drosophile</emOeil>. Nous détaillons une méthodologie pour la dissection du disque imaginal des yeux et comment ce journaliste peut être utilisé pour aider à la dissection et l'identification des types cellulaires spécifiques dans les yeux en développement.

Abstract

L'<em> Drosophile</emOeil> est un système puissant modèle pour étudier des domaines tels que la neurogenèse, la transduction du signal et la neurodégénérescence. Beaucoup de découvertes faites en utilisant ce système ont profité de la nature spatio-temporelle de la différenciation des photorécepteurs dans le disque imaginal des yeux de développement. Pour utiliser ce système, il est d'abord nécessaire pour le chercheur d'apprendre à identifier et disséquer le disque oculaire. Nous décrivons un journaliste roman DP afin d'aider à l'identification du disque oeil et la visualisation de types de cellules spécifiques dans l'œil en développement. Nous détaillons une méthodologie pour la dissection du disque imaginal des yeux du stade larvaire troisième et décrire comment le journaliste oeil-DP peut aider à cette dissection. Ce journaliste oeil-DP est exprimé uniquement dans les yeux et peuvent être visualisées en utilisant la microscopie à fluorescence, soit dans les tissus vivants ou après fixation sans la nécessité d'amplification du signal. Nous montrons aussi comment ce journaliste peut être utilisé pour identifier les types spécifiques de cellules à l'intérieur du disque oeil. Ce protocole et l'utilisation de la journaliste oeil-DP aidera les chercheurs utilisant le<em> Drosophile</em> Œil à l'adresse d'une importance fondamentale des questions biologiques.

Protocol

<ol><li> Première place une goutte de PBS sur un plat Sylgard sous un microscope à dissection.</li><liSuivant> supprimer plusieurs larves errer troisième stade larvaire à partir d'un flacon ou une bouteille à l'aide d'une spatule et les placer dans le PBS.</li><li> Pour commencer la dissection d'utiliser votre main gauche une pince à épiler (si vous êtes droitier) de saisir une larve des deux tiers de la voie vers le postérieur et ensuite utiliser l'autre paire de tenir les crochets colorés sombre…

Discussion

Dissection du disque imaginal des yeux chez la drosophile est simple, mais peut prendre du temps à maîtriser. Les étapes essentielles sont l'identification du disque oeil et sa dissection loin du cerveau larvaire. Identification du disque œil est rendue plus facile en utilisant la ligne de l'œil-DP décrites ici. Les modifications éventuelles sont à retirer le disque antennaire ou la membrane peripodial, ou de quitter le lobe optique attaché à visualiser les axones PR entrant dans le cerveau. <…