Una novela RFP reportero para ayudar en la visualización del disco imaginal del ojo en Drosophila</em

Summary

Se describe una nueva proteína fluorescente roja (RFP) periodista que se expresa específicamente en el<em> Drosophila</em> Ojo. Se detalla una metodología para la disección del disco imaginal del ojo y cómo este indicador puede ser utilizado para ayudar en la disección y la identificación de tipos específicos de células en el ojo en desarrollo.

Abstract

La<em> Drosophila</emLos ojos> es un sistema poderoso modelo para el estudio de áreas como la transducción de señales neurogénesis y neurodegeneración. Muchos de los descubrimientos realizados mediante este sistema se han aprovechado de la naturaleza espacio-temporal de la diferenciación de los fotorreceptores en el disco imaginal del ojo de desarrollo. Para utilizar este sistema, primero es necesario para el investigador que aprender a identificar y analizar el disco de los ojos. Se describe un periodista de la novela RFP para ayudar en la identificación de los discos del ojo y la visualización de determinados tipos de células en el ojo en desarrollo. Se detalla una metodología para la disección del disco imaginal del ojo de larvas de tercer estadio y describir cómo el periodista de ojos RFP puede ayudar en esta disección. Este reportero ojo-RFP sólo se expresa en el ojo y puede ser visualizada mediante microscopía de fluorescencia, ya sea en tejido vivo o después de la fijación, sin necesidad de amplificación de la señal. También mostramos cómo este reportero se puede utilizar para identificar los tipos de células específicas dentro del disco del ojo. Este protocolo y el uso de la reportera del ojo-RFP ayudará a los investigadores con el<em> Drosophila</em> Los ojos para hacer frente a cuestiones biológicas de importancia fundamental.

Protocol

<ol><li> En primer lugar una gota de PBS en un plato Sylgard bajo un microscopio de disección.</li><li> A continuación, retire varias larvas errantes estadio tercero de un frasco o una botella con una espátula y colocarlos en la PBS.</li><li> Para comenzar la disección usar pinzas mano izquierda (si eres diestro) para captar una larva de dos tercios del camino hacia la parte posterior y luego usar el otro par para mantener los ganchos de la boca de color oscuro en el extremo anterior.</li><li> Ahora, tire suavemente …

Discussion

La disección del ojo disco imaginal de Drosophila es sencillo, pero puede tomar tiempo para dominar. Los pasos fundamentales son la identificación de los discos del ojo y su disección fuera del cerebro de larvas. Identificación de los discos del ojo se hace más fácil el uso de la línea de los ojos-RFP se describe aquí. Modificaciones posibles son para extraer el disco antenas o la membrana peripodial, o dejar el lóbulo óptico conectado a visualizar los axones de relaciones públicas en el cerebro. </p…