A Novel RFP Reporter Steun in de visualisatie van het oog denkbeeldige Disc in Drosophila</em

Summary

Beschrijven we een nieuw rood fluorescerend eiwit (RFP) reporter dat specifiek wordt uitgedrukt in de<em> Drosophila</em> Oog. We detail een methodologie voor dissectie van het oog denkbeeldige schijf en hoe deze verslaggever kan worden gebruikt om steun in de dissectie en identificatie van specifieke celtypes in de zich ontwikkelende oog.

Abstract

De<em> Drosophila</em> Oog is een krachtig modelsysteem voor de bestudering van gebieden, zoals neurogenese, signaaltransductie en neurodegeneratie. Veel van de ontdekkingen gemaakt met behulp van dit systeem gebruik gemaakt hebben van de spatio-temporele aard van de fotoreceptor differentiatie bij de ontwikkeling oog imaginaire disc. Voor het gebruik van dit systeem is het eerst nodig voor de onderzoeker om te leren te identificeren en ontleden het oog disc. Beschrijven we een nieuwe RFP verslaggever om te helpen bij de identificatie van het oog schijf en de visualisatie van specifieke celtypes in de zich ontwikkelende oog. We detail een methodologie voor dissectie van het oog denkbeeldige schijf uit derde instar larven en beschrijven hoe de eye-RFP reporter kan helpen in deze dissectie. Dit in het oog RFP reporter is alleen tot uitdrukking in het oog en kunnen worden gevisualiseerd met behulp van fluorescentie microscopie, hetzij in levend weefsel of na fixatie zonder de noodzaak voor signaalversterking. We laten ook zien hoe deze reporter kan worden gebruikt om specifieke cellen te typen in het oog schijf te identificeren. Dit protocol en het gebruik van de eye-RFP reporter zal helpen onderzoekers met behulp van de<em> Drosophila</em> Oog op het fundamenteel belangrijke biologische vragen te beantwoorden.

Protocol

<ol><li> Plaats eerst een druppel PBS op een Sylgard schotel onder een dissectie microscoop.</li><li> Volgende verwijder enkele omzwervingen derde instar larven uit een flacon of fles met behulp van een spatel en plaats ze in het PBS.</li><li> Om te beginnen de dissectie met je linkerhand een pincet (als je rechts bent overhandigd) om een ​​larve greep twee derde van de weg naar de achterkant en dan het andere paar te gebruiken om de donker gekleurde mond haken houden aan het voorste einde.</li><li> Nu voorzichtig ui…

Discussion

Dissectie van de Drosophila oog denkbeeldige schijf is eenvoudig, maar kan de tijd nemen om te beheersen. De kritische stappen zijn de identificatie van het oog schijf en de dissectie uit de buurt van het larvale hersenen. Identificatie van het oog schijf is eenvoudiger met behulp van de eye-RFP lijn hier. Eventuele wijzigingen zijn aan de antennaal schijf of de peripodial membraan te verwijderen, of om de optische kwab aan de PR-axonen het invoeren van de hersenen te visualiseren verlaten.

<p class="jove_c…