Summary
Ce protocole illustre comment la tension colorants sensibles pour permettre l'enregistrement optique de l'activité électrique de réseaux de neurones intacts tels que les réseaux de la Guinée-cochon système nerveux entérique, avec une résolution réglable allant de simples cellules à multi-ganglionnaires circuits.
Abstract
Le système nerveux entérique (ENS) est un réseau autonome avec fonctions identifiées, capable de réaliser des comportements complexes dans l'isolement. Ses neurones (10 à 25 um de diamètre) sont disposées en plexus qui se limitent à des plans distincts de la paroi intestinale
Protocol
Partie 1: Préparation des tissus
- Les préparatifs sous-muqueux et plexus myentérique sont isolées par la dissection séquentielle de l'intestin grêle de 150-200g (2-3 semaines) Hartley porcs Guinée qui ont été anesthésiés par inhalation d'isoflurane et décapité. Après l'euthanasie, l'intestin grêle est excisée et son contenu retiré en rinçant la lumière avec une ambiance chaleureuse, solution oxygénée. Nous utilisons Milieu 199 complété avec 25 mM HEPES, 5 mM NaHCO 3 et 2 mM de glutamine, et le pH ajusté à 7,4 (appelé, à partir de maintenant, comme M199-MS), qui a été préchauffé à 37 ° C. Toutes les étapes restantes du protocole, cependant, sera effectuée à température ambiante.
- Un segment intestinal, 8-10 cm de longueur, est transféré dans une boîte contenant Sylgard M199-DM, a ouvert le long de la frontière mésentérique, et monté muqueuse côte jusqu'à utilisant des broches d'insectes. Il est extrêmement important de maintenir la tension, même, de sorte qu'après épinglant le tissu présente une forme rectangulaire avec des rangées de villosités muqueuses régulièrement alignés.
- En utilisant des pinces fines Dumont avec des conseils droite, dans une position presque horizontale, il est facile à peler la muqueuse en saisissant les villosités à une extrémité de la préparation et écartant le long de l'axe longitudinal du tissu. Lorsque l'échantillon est également épinglée, des rubans de la muqueuse peuvent être séparés en quelques coups individuels, exposant la sous-muqueuse qui contient les ganglions sous-muqueux et la vascularisation sous-muqueuse.
- Pour la dissection fine de la plexus, nous vous recommandons d'utiliser un microscope à dissection avec éclairage sur fond noir. En effet, le pseudo effet tridimensionnel créé par ce type d'éclairage permet de distinguer les différentes couches, empêchant ou minimisant instrument infligé des dommages.
- Pour faire une préparation sous-muqueux, nous suivons la procédure classique de Hirst et McKirdy 4 qui exige: a) faire une coupe dans la couche sous-muqueuse suivant l'orientation des fibres musculaires circulaires, ce qui peut être réalisé en utilisant des ciseaux très fins (comme une Moria MC19 ou son équivalent), b) la sous-muqueuse de levage très doucement avec des pinces fines, tout en poussant la couche musculaire circulaire bas en utilisant les ciseaux fins; c) la découpe le long des bords longitudinaux de la séparation progresse pour libérer la sous-muqueuse du reste de l' préparation; d) de faire une deuxième coupe suivant l'orientation des fibres musculaires circulaires à une distance du premier, afin de définir la taille finale de la préparation sous-muqueux. Le segment résultant sous-muqueux, qui est seulement 30 à 50 um d'épaisseur et a une apparence arachnéenne, peuvent être transférés à un autre plat contenant Sylgard frais M199-DM, doucement épinglé et sans tension, et conservés dans une chambre d'oxygénation pour une utilisation ultérieure.
- L'original gut-segment, désormais privés de la muqueuse et la sous-muqueuse, et avec le muscle circulaire exposés, peuvent toujours être utilisés pour donner une préparation plexus myentérique. Pour exposer le plexus myentérique, on doit éliminer autant que possible de la couche musculaire circulaire. Ceci peut être réalisé en utilisant la même droite pince fine pointe employées dans les étapes précédentes. Des faisceaux de fibres peut être tiré doucement, d'abord d'un, puis de l'autre côté de la préparation. Le plexus myentérique exposés ne peuvent pas être séparée de la couche longitudinale de muscle et de la séreuse sous-jacente. Par conséquent, ce qu'on appelle la préparation plexus myentérique est le segment qui peut être coupé le long des broches. Parce qu'il contient des muscles en direct, il est conseillé de mettre le doigt très vaguement dans le plat contenant oxygénée M199-DM jusqu'à l'expérimentation physiologique commence.
- Depuis la muqueuse est le capteur principal ENS, et tous les effecteurs sont également intégrées dans la paroi intestinale, il est possible de disséquer semi-intactes les préparations qui préservent toute les voies réflexes. Ces préparations spécialement conçus nécessitent des combinaisons des étapes décrites au paragraphe 1.3. à 1,6., appliquée à des zones adjacentes du segment isolé intestinale.
- Quelques minutes avant l'expérience réelle optique, la préparation de choix est monté dans la chambre expérimentale, en s'assurant que la tension est répartie uniformément et le tissu se trouve complètement à plat contre le fond Sylgard. Ceci est réalisé par la tenue de l'échantillon avec de multiples broches très fines qui peuvent être positionnés tout autour du périmètre sans infliger des dommages aux tissus.
Partie 2: Préparation d'échantillons de tissus pour l'enregistrement optique
- (Facultatif) Pour éviter que la fluorescence de fond de colorant se liant à des muscles lisses résiduelles et du tissu conjonctif, à la fois plexus isolés peuvent être incubés pendant 30-60 min dans M199-DM contenant de la collagénase VII (≤ 50 U / ml) et la protéase IX (≤ 0,5 pg / ml). Après le traitement enzymatique de la préparation doivent être lavés avec, et maintenue pendant la nuit dans, M199-DM, plus 10% de sérum des animaux (par exemple, équidés ou de bovins) et des antibiotiques (pénicilline, 100U/ml; streptomycine, 100 ug / ml), dans un chambre de saturation wie 95% d'O 2 et 5% de CO 2. Cette procédure, que nous avons utilisés pendant de nombreuses années car il améliore sensiblement le rapport signal-bruit des enregistrements optiques, peut-être pas utile pour les débutants et devrait être adopté avec prudence. En effet, une préparation endommagé lors de la dissection court le risque de se désintégrer pendant le traitement enzymatique. Cependant, même en l'absence du traitement enzymatique, nous recommandons que les préparatifs seront maintenus pendant la nuit dans M199-DM avec du sérum et des antibiotiques. Cette étape favorise la cicatrisation des tissus après une lésion dissection aiguë, et accroît la transparence de l'échantillon.
- Enregistrements optique de l'activité électrique ne peut être atteint dans une préparation dans laquelle le muscle se contracte. Ainsi, pour éviter la contraction des muscles lors de l'enregistrement du plexus myentérique, quelques minutes avant l'expérience d'optique nous ajoutons 2 nifédipine pM à la baignade M199-DM le tissu.
Partie 3: Coloration avec di-4-ANEPPDHQ
- Di-4-ANEPPDHQ est disponible commercialement sous forme lyophilisée. Nous vous recommandons de le dissoudre dans de l'éthanol pur, ce qui rend une solution mère concentrée [ml par exemple, de 15-20 mg /]. Ce stock, lorsqu'ils sont conservés à -20 ° C, est extrêmement stable. En effet, dans notre laboratoire, nous avons juste fini la dernière goutte d'une solution stock de ce colorant que nous avions fait près de 6 ans.
- La solution de coloration doit être préparé dans les M199-DM, et devrait contenir deux nifédipine uM si le protocole l'exige. La concentration finale de colorant peut être aussi bas que 5 ug / ml et ne doivent pas être supérieures à 50 pg / ml. Toutefois, selon la concentration du stock, une certaine quantité d'éthanol seront présents dans la solution de coloration et devrait être pris en compte. Par exemple, une solution de coloration avec 50 ug / ml de teinture contient éthanol ~ 0,3% si elle est faite à partir d'un 15 mg / ml stock, mais proche de 1% d'éthanol si le stock avait une concentration de seulement 5 mg / ml.
- Pour la coloration, la préparation est submergée pendant 10-30 minutes dans la solution de colorant. Après cette période, le colorant est emporté et remplacé par frais, oxygéné M199-DM. Depuis di-4-ANEPPDHQ est un colorant membranaire imperméants qui devient fluorescent que lorsque dans un environnement lipidique, les neurones sains à partir d'un préparation colorée entérique devrait avoir l'apparence de ballons vides.
Partie 4: La stimulation électrique
- La stimulation peut être piloté par une tension ou en courant. Nous utilisons la stimulation actuelle, délivré par un ordinateur contrôlé, générateur de relance de 4 canaux avec une puissance maximale de 16 mA par canal.
- Le modèle d'électrode à être utilisés dans une expérience donnée est déterminée par l'objectif expérimental. Pipettes intracellulaire ou électrodes de patch peut être utilisé lorsque l'objectif est la stimulation d'un neurone particulier. Lorsque la stimulation est destiné à activer plus d'un neurone dans un ganglion donné, une électrode extracellulaire toucher un connecteur peut être utilisé. Pour étudier les ganglions de l'interconnexion, les grands, à faible résistance des électrodes et / ou multi-éléments matrices d'électrodes peuvent être utilisées, mais lors de l'utilisation actuelle de stimulation que nous le font généralement, des tableaux multi-éléments deviennent la seule option. De nombreux modèles d'électrodes extracellulaires, ainsi que quelques matrices d'électrodes linéaires, sont facilement disponibles auprès de sources commerciales.
- Les électrodes peuvent être positionnés en utilisant différents types de micromanipulateurs. Pour éviter les vibrations induites par les fûts longs et fins, nous favorisons l'aide micromanipulateurs petites bases magnétiques qui peuvent être positionnées à proximité de la chambre expérimentale, et en soutenant les barils flexible des électrodes de tungstène avec des barres de métal mince, mais très rigide.
Partie 5: Perfusion
Nous utilisons une pompe péristaltique à 2 canaux avec un canal d'entrée des solutions oxygénées, et l'autre pour la sortie. Pour éliminer les perturbations mécaniques induites par la perfusion, la pompe est mise hors tension de lors de l'acquisition des données optiques.
Partie 6: Appareils pour l'enregistrement de sites multiples optiques du potentiel de membrane
- Les composants optiques:
Les appareils pour l'enregistrement de sites multiples optiques du potentiel de membrane comprend une caméra NeuroCCD-SM (RedShirtImaging) et un demagnifier 01h10 / relais objectif monté sur le tube trinoculaire d'un microscope droit. Le microscope se déplace sur un traducteur XY, indépendamment d'une étape qui est rigidement fixée au sommet d'une table d'isolation des vibrations actives. Pour minimiser les vibrations atmosphériques, l'ensemble du dispositif est entouré par des rideaux acoustiques lourds et un toit en mylar. Epi-illumination est fournie par une 100W tungstène-halogène alimenté par une alimentation ultra-faible ondulation de rétroaction alimentation stabilisée. La lumière incidente est quasi-monochromatique à l'aide d'un filtre de chaleur, un facteur Q élevé filtre d'interférence (HQ530/50) et une 565 nm (50% de transmission) miroir dichroïque. D'émission de fluorescence est séparée en utilisant le miroir dichroïque et un filtre passe-temps (HQ572LP). Les intentionssité de la lumière incidente est ajustée en utilisant les filtres de densité neutre. Trans-illumination, pour vif champ de vision de la préparation est assurée par une seconde de 100 W tungstène-halogène entraîné par un V 0-55, 1-10 Une alimentation qui n'est pas requise pour posséder tous les attributs spéciaux. - Spécifications de la caméra à haute vitesse:
La conception électronique et les caractéristiques de performance de la caméra NeuroCCD-SM ont été décrites en détail 3. Brièvement, il s'agit d'un refroidissement, faible résolution, de précision à haute vitesse qui utilise la caméra à l'arrière-aminci, rétro-éclairé Marconi CCD39-01 puces (80x80 pixels). La numérisation est de 14 bits, et la fréquence d'image maximale est de 2 kHz. Cependant, à des fins spécifiques, on peut augmenter le frame-rate, jusqu'à un maximum de 10 kHz en utilisant des combinaisons différentes binning ou de réduire le nombre de pixels fonctionnelle. La caméra a l'avantage important de bruit de lecture extrêmement basse (23 électrons à 2 kHz; 9 électrons à 1 kHz). En outre, ses pixels ont une profondeur relativement importante bien (215 000 électrons), ce qui permet des intensités de lumière modérée à des cadences élevées. - Acquisition de données et le logiciel d'analyse:
L'expérience d'optique est contrôlé par Neuroplex, un logiciel à partir RedShirtImaging, qui fonctionne comme une application au sein de la plate-forme IDL (Interactive Data Language) et inclut des fonctionnalités multiples nécessaires pour l'acquisition, l'affichage et l'analyse des données optiques. - Caméra supplémentaire:
En tant que partie intégrante de l'appareil, un séparateur de faisceau sur la tête trinoculaire des relais de microscope à l'image de la préparation sur une deuxième caméra haute résolution CCD connectée à un capteur d'images. L'image, qui est acquise et stockée en utilisant l'image globale Lab / 2 logiciels, peuvent être superposés sur l'affichage de la milliseconde sous-résolue en temps des signaux optiques capturée par la caméra NeuroCCD-SM pour générer une carte précise de l'origine spatiale de la optiquement enregistré des signaux de tension. Dans notre laboratoire, l'acquisition d'image pour cet appareil réside dans un ordinateur différent de celui responsable de l'acquisition de données fonctionnelles. Par conséquent, le fichier image doit être transféré d'un ordinateur à un autre, et les ajustements de petite taille et la position de l'image à haute résolution sont nécessaires avant l'enregistrement parfait des deux caméras est réalisé.
Partie 7: expériences optiques
- Avant chaque enregistrement fonctionnel, nous acquérons de l'image à haute résolution en noir et blanc de la région à partir de laquelle nous avons l'intention d'enregistrer l'activité électrique par des moyens optiques (comme indiqué au paragraphe 6.4). Cette image, quand il est superposé sur le pixel-carte de la caméra à haute vitesse, nous aide à identifier les structures qui sont la source des signaux optiques.
- Dans la configuration du système approprié, Neuroplex (voir 6.3) contrôle également le volet, et déclenche la stimulation électrique. Depuis l'acquisition de données haute vitesse exige une puissance informatique considérable, il est conseillé, si possible, d'utiliser un ordinateur dédié avec une grande quantité de mémoire et un disque dur haute capacité. Cela, cependant, n'est pas trivial. Notre propre système, par exemple, déjà vieux de plusieurs années, emploie conseils d'acquisition de données qui sont trop gros pour tenir dans l'état de l'art des ordinateurs. En guise de compromis, nous avons adopté et consacré à notre système optique, un Dell Precision 390 équipé d'un lecteur dur de 500 Go et 4 Go de RAM. Cet ordinateur nous a permis de garder nos anciens, mais suffisant, A / D et D / A planches, tout en offrant une puissance suffisante pour faire fonctionner nos expériences.
- Dès que l'acquisition est terminée, Neuroplex pouvez afficher les résultats dans de multiples formats complémentaires, dont certaines sont détaillées ci-dessous:
- Une zone de l'écran appelée affichage de la page montre l'image brute de la préparation comme capturés par les 80X80 haute vitesse caméra comme un cadre individuel. Superposition sur ce pixel carte de l'image à haute résolution acquises avec la seconde caméra (comme expliqué en 6.4 et 7.1) affine la capacité de l'opérateur s pour identifier des domaines d'intérêt.
- Lorsque pixels de cette affichage de la page sont sélectionnés sous le contrôle de la souris, Neuroplex convertit automatiquement leurs sorties optiques dans les traces qui montrent l'ampleur du changement optiques enregistrés par ces pixels en fonction du temps. (Par exemple, AF / F Temps vs). L'opérateur peut décider si ces traces doivent refléter la sortie de chacun des pixels, ou plutôt, la sortie spatiale moyenne de loci multiples sur une région donnée de la préparation.
- Les données peuvent également être affichées dans le film de format.
Afin de s'assurer que toutes les informations contenues dans les courses individuelles expérimentale est entièrement extraite, cependant, nous privilégions l'analyse hors ligne des données optiques. Les résultats représentatifs de cette analyse sont disponibles.
Partie 8: Comment atteindre la qualité technique dans une expérience d'optique
Th.e succès technique d'une expérience d'optique est mesurée, en définitive, par le signal sur bruit des enregistrements. Par ailleurs, un bon rapport signal sur bruit ne vient pas d'une révélation, mais d'un voyage. Comme dans un opéra, le résultat final est déterminé par une multiplicité de facteurs qui interagissent de manière synergique. Ainsi, pour réaliser une expérience technique du son optique, il est indispensable d'affiner, de manière indépendante, l'appareil optique et les compétences requises pour chaque étape du protocole. Ce qui suit est une liste de potentiels problèmes-domaines, et quelques suggestions pour éviter des problèmes pas toujours attendu 5:
- Les sources de bruit
La stabilité mécanique et optique sont cruciales lors de l'enregistrement d'activité électrique avec une tension de colorants sensibles, parce que le changement fractionnaire (AF / F) reflétant les réponses physiologiques est relativement faible (<10% / 100 mV dans la plupart des enregistrements intestin) et une trace bruyante toujours augure un mauvais résultat. Par conséquent, afin d'optimiser le rapport signal-bruit, il est impératif d'éliminer, ou du moins, de minimiser, les contributions des deux pires contrevenants: un des vibrations mécaniques), et b) les fluctuations source de lumière.- Les vibrations mécaniques sont générés par une variété de sources aussi diverses que configuration, la construction de la stabilité, la proximité des équipements motorisés, les courants d'air, le bruit acoustique, un mouvement fluide, ou des particules flottant dans la solution de bain. Une bonne isolation des vibrations du système, et des rideaux acoustiques pour des cas extrêmes (voir, par exemple, la description en 5.1), faire une grande différence et valent bien leur prix. De plus, le bon sens des approches, comme la filtration des solutions utilisées dans l'expérience, ou l'utilisation de bases magnétiques pour les petites, les pièces mobiles de l'installation, sont assez efficaces.
- Les sources lumineuses sont les plus stables au quasi-maximale d'intensité. Par conséquent, on devrait fixer une limite de courant-pour l'alimentation, et, si nécessaire, de réduire l'intensité de la lumière en insérant des filtres de densité neutre dans le trajet de la lumière au lieu d'en réduisant la tension. Les lampes à arc sont intrinsèquement bruyant. Tungstène-halogène ampoules ou les diodes électroluminescentes sont beaucoup plus stables et devraient être le choix préféré 6.
- L'âge des animaux
Les dissections doivent être fait en utilisant les intestins des animaux jeunes, car, comme le tissu conjonctif au sein de l'intestin avec durcit âge, il devient plus difficile de séparer les couches de tissu individuels sans infliger d'importants dommages sur les neurones des deux plexus, dont afférentes et efférentes processus peut traverser les frontières couche et / ou de projet pour une grande distance le long de l'axe longitudinal de l'intestin. Ce conseil, qui peut être négligée lorsque l'on étudie intra-ganglionnaire connexions, est d'une importance capitale lorsque l'objectif est l'analyse expérimentale des circuits inter-ganglionnaires ou l'activation des voies de réflexe. - Internalisation Dye
Il est important d'utiliser aussi peu une concentration de colorant que possible, et pour minimiser l'exposition de lumière inutile. Bien di-4-ANEPPDHQ s'est avéré être beaucoup moins que les autres colorants phototoxiques, il obtiendra intériorisé, finalement, que la santé de la préparation se détériore. Internalisation Dye diminue le rapport signal-bruit en augmentant considérablement le 3 fluorescence de fond. - Entretien des électrodes
- Les électrodes doivent être lavées soigneusement et minutieusement après chaque expérience. Des dépôts organiques à l'extrémité des électrodes de tungstène augmenter la résistance des électrodes et d'éviter la stimulation.
- L'isolation de l'électrode de tungstène disponibles dans le commerce est très délicate et sujette aux dommages. Une fuite dans l'isolation sera shunt de courant, de compromettre l'efficacité de la stimulation et de compromettre le succès de l'expérience.
- Périls perfusion
Ne laissez jamais sans surveillance de la mise en place tandis que la perfusion est en marche. Si l'afflux et hors-débit de la pompe péristaltique ne sont pas correctement équilibrés, deux événements catastrophiques peuvent avoir lieu:- Une inondation peut causer des dommages irréversibles à la loupe.
- La préparation peut se dessécher pendant l'expérience.
- Tracas Software
Il est essentiel de se familiariser avec le logiciel qui contrôle l'acquisition ainsi que l'analyse. Rapide d'acquisition de données et / ou la création de très gros fichiers ont tendance à conduire le système au bord de l'effondrement, et Neuroplex, ce qui est assez impitoyable, va se planter sans relâche à moins que ses conditions aux limites sont respectées. Subtilités dans les dossiers, facilement manquée lorsque l'analyse se limite à des régions limitées de l'intérêt, se révèlent souvent dans les écrans de cinéma des données.
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Discussion
Ce protocole a été écrit avec deux objectifs en tête. Le premier est de convaincre d'autres chercheurs qui, grâce à des nombreux progrès technologiques de la dernière décennie, l'enregistrement optique de l'activité électrique en utilisant la tension colorants sensibles est devenu l'un des plus puissants, des méthodologies fiables et abordables pour étudier les réseaux neuronaux intacts; effet , il pourrait être facilement mis en œuvre, même dans un laboratoire disposant de ressources modestes. Le deuxième objectif est de promouvoir le système nerveux entérique comme un modèle expérimental unique dans lequel de corréler les événements moléculaires et cellulaires avec le comportement électrique des deux plexus de neurones et de leurs résultats biologiques.
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Acknowledgments
Nous tenons à remercier DA Coulter (CHOP) pour nous avoir permis d'utiliser ses deux photons microscope pour acquérir les images 2-photons montré au début de la vidéo, et H. Takano pour le partage avec nous son expertise technique.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Medium 199 | Sigma-Aldrich | M3769 | With Earle’s salts Without L-Glutamine, Phenol Red and Sodium Bicarbonate |
| Sylgard | Dow Corning | 184 silicone elastomer kit | |
| Insect pins used for dissection | F.S.T. | 26001-30 | |
| Dumont forceps | F.S.T. | 11203-23 or 11200-33 | |
| Moria MC19/B Pascheff-Wolff Spring Scissors | F.S.T. | 15371-92 | |
| Pins to hold the tissue during the experiment | Seirin Corp. | Seirin Spinex | |
| Collagenase VII | Sigma-Aldrich | C0773 | |
| Protease IX | Sigma-Aldrich | P6141 | |
| Fetal Bovine Serum | Invitrogen | 10439-016 | |
| PenStrep | GIBCO, by Life Technologies | 15140 | |
| L-Glutamine 100X | GIBCO, by Life Technologies | 25030 | |
| Nifedipine | Sigma-Aldrich | ||
| Di-4-ANEPPDHQ | Molecular Probes, Life Technologies | D36802 | |
| 4-Channel Stimulus Generator | Multi Channel System MCS GmbH | 2000 Series | |
| Peristaltic pump | Rainin | 2-channel Dinamax RP-1 | |
| High-speed camera | RedShirtImaging, LLC | NeuroCCD-SM | |
| 1:10 demagnifier / relay lens | Optem, Qioptiq Inc. | ||
| Upright microscope | Olympus Corporation | BX61TRF | |
| Gibraltar fixed stage with motorized X-Y translator | Gibraltar, Burleigh Instruments, EXFO, Quebec, Canada | PSSG--BX2 | |
| Linear matrix electrodes | FHC, Inc. | Custom made | |
| Active vibration-isolation table | Halcyonics,Inc., Menlo Park, CA | Micro 60 | |
| Ultra-low-ripple feedback stabilized power supply | Kepco, Flushing, NY | ATE 75-15M | |
| Heat filter | Schott AG | KG-1 | |
| High-Q interference filter | Chroma Inc. | HQ530/50 | |
| Dichroic mirror | Chroma Inc. | 565 nm (50% transmission) | |
| Long-pass filter | Chroma Inc. | HQ572LP | |
| Acoustic curtains | Acoustical Surfaces, Inc. | BSC-25 | |
| Neuroplex | RedShirtImaging, LLC | ||
| IDL | ITT Visual Information Solutions | ||
| High-resolution CCD camera, with its own camera controller | Hamamatsu Corp. | ||
| Frame-grabber for high-resolution camera | Data Translation | DT3120K-1 | |
| Imaging software for high-resolution camera | Data Translation | Global Lab Image/2 |
References
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- Obaid, A. L. Spatiotemporal patterns of activity in an intact mammalian network with single-cell resolution: optical studies of nicotinic activity in an enteric plexus. J Neurosci. 19 (8), 3073-3073 (1999).
- Obaid, A. L., Loew, L. M., Wuskell, J. P., Salzberg, B. M. Novel naphthylstyryl-pyridinium potentiometric dyes offer advantages for neural network analysis. J. Neurosci. Methods. 134 (2), 179-179 (2004).
- Hirst, G. D., McKirdy, H. C. Synaptic potentials recorded from neurones of the submucous plexus of guinea-pig small intestine. J Physiol (Lond). 249 (2), 369-369 (1975).
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- Salzberg, B. M. An ultra-stable non-coherent light source for optical measurements in neuroscience and cell physiology. Journal of Neuroscience Methods. 141, 165-16 (2005).
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- Obaid, A. L., Zou, D. J., Rohr, S., Salzberg, B. M. Optical recording with single cell resolution from a simple mammalian nervous system: Electrical activity in ganglia from the submucous plexus of the guinea-pig ileum. Biol. Bull. 183, 344-344 (1992).
- Salzberg, B. M., Davila, H. V., Cohen, L. B. Optical recording of impulses in individual neurones of an invertebrate central nervous system. Nature. 246 (5434), 508-508 (1973).
