Histologie osseuse décalcifiés fournit des informations importantes pour une variété d'applications cliniques et de recherche. Il est techniquement difficile, en particulier avec des spécimens de grande taille. Cette vidéo illustre le processus de production de sections de bonne qualité et démontre les difficultés techniques et des méthodes permettant de les surmonter.
Histologie osseuse décalcifiés démontre la micro-architecture du tissu osseux. Il montre à la fois les composants minéralisés et cellulaires de l'os, qui fournit des informations vitales sur le remodelage osseux ou de la formation et la résorption osseuse. Cela a une importance énorme dans une variété d'applications cliniques et de recherche. Il donne de belles images 1 et permet de techniques comme l'évaluation et l'histomorphométrie fluorochrome 2. Analyse fluorochrome est une technique où les colorants fluorescents qui se lient au calcium sont injectés à un point de moment particulier, qui permet de quantifier la quantité de minéralisation à ce moment donné. Histomorphométrie est un processus de quantification des os au niveau microscopique.
Exécution histologie osseuse décalcifiés est techniquement difficile, en particulier avec des spécimens de grande taille. Elle exige des variations dans la technique de celles utilisées dans de la paraffine Embedded Standard histologie. Cette vidéo illustre le processus de production de sections de bonne qualité et démontre les difficultés techniques et des méthodes permettant de les surmonter. Préparation de l'échantillon, la fixation et le traitement sont réalisés avec une manière similaire à d'autres tissus mous, mais en raison de la densité et la faible perméabilité de l'os considérablement plus longue de fixation et de délais de traitement sont nécessaires, prenant souvent plusieurs semaines. Embedding est réalisé en utilisant un milieu de support avec une dureté semblable ou égal et la densité de l'os comme le méthacrylate de résines à base de mais, contrairement à l'infiltration de paraffine et d'enrobage, il s'agit d'une étape irréversible. Sectionnement peut être réalisé par broyage qui produit une section plus épaisse, ce qui est optimal pour les études telles que l'analyse fluorochrome. Le mieux est réalisé en utilisant une lame de diamant sur une macrotome. Alternativement, des sections plus minces peuvent être produites pour la microscopie optique et ceci est réalisé à l'aide d'un microtome luge avec une lame très aiguisée. Le microtome luge fournit la force supplémentaire et la stabilité requises pour les grands, les blocs durs. Résine sections intégrées peuvent être colorés avec une variété de taches, qui sont démontrés.
Les auteurs tiennent à remercier l'assistance de Mme Sue Connell pour son expertise dans l'intégration de la résine et Mme Stephania Tombeaux pour son expertise en laboratoire. Les auteurs tiennent à remercier le professeur Frank Kandziora et le Dr Marie-Anne Polboth pour leurs conseils.
Goldner’s Trichrome stain
1. Weigert’s iron hemotoxylin (DeGroat)
a) Hemotoxylin solution | |
Hemotoxylin | 1g |
Absolute Alcohol | 100mL |
b) Iron Solution | |
30% aqueous ferric chloride | 4mL |
Hydrochloric acid (concentrated) | 1mL |
distilled Water | 95mL |
Filtered and added to equal volume of hemotoxylin immediately before stain used.
2. Ponceau-fuchsin-azophloxin stock solutions
a) Ponceau de xylidine solution | |
Ponceau de xylidine | 0.75g |
acid fuchsion | 0.25g |
Acetic Acid | 1mL |
mix, and add distilled water (100mL) | |
b) azophloxin solution | |
Azophloxin | 0.5g |
Acetic acid | 0.6mL |
mix, and add distilled water (100mL) | |
c) Final working stain solution | |
Ponceau-fuchsin solution | 5-10mL |
Azophloxin | 2mL |
0.2% acetic acid solution | 88mL |
3. Light Green Solution
Light Green | 1g |
acetic acid | 1mL |
Mix, and add distilled water (500mL) |
4. Phophomolybdic acid-Orange G solution
Phosphomolybdic acid | 3g |
Orange G | 2g |
Dissolve in 500mL of distilled water and add crystal thymol. |
Von Kossa Stain
1% aqueous silver nitrate |
2.5% sodium thiosulfate |
1% safranin O |
Alcian blue stain
Alcian blue 8GX | 1g |
3% acetic acid solution | 100mL |
Hemotoxylin and Eosin stain
a)Harris’s hemotoxylin | |
Hemotoxylin | 2.5g |
Absolute alcohol | 25mL |
Potassium Alum | 50g |
distilled water | 500mL |
mercuric oxide | 1.25g OR |
Sodium iodate | 0.5g |
Glacial acetic acid | 20mL |
b) Eosin solution | |
Commercially produced Eosin was used. |
All stain dye powders are Gurr dye powders.
All reagents are analytical reagents, and not Lab reagents
Fluorochromes
Manufacturer |
Fluorochrome | Catalogue Number |
Sigma-Aldrich, Sydney | Calcein Green | C0875 |
Sigma-Aldrich, Sydney | Alizarin Complexone | A3882 |
Intervet Australia, Victoria | Oxytetracycline (off the shelf antimicrobial drug) |
Tradename; Engemycin 100 |