조직학, 조직 형태 측정 및 분석을위한 Fluorochrome Undecalcified 본 준비

Summary

Undecalcified 뼈 조직학은 임상 및 연구 애플 리케이션의 다양한 중요 정보를 제공합니다. 그것은 기술적으로 특히 대형 표본과 도전이다. 이 동영상은 좋은 품질의 섹션을 제작하는 과정을 설명하고이를 극복하기 위해있는 기술적인 문제와 방법을 보여줍니다.

Abstract

Undecalcified 뼈 조직학은 뼈의 마이크로 아키텍처를 보여줍니다. 그것은 뼈 회전율이나 뼈 형성과 재흡수에 대한 중요한 정보를 제공 뼈의 mineralized과 세포 구성 요소를 모두 보여줍니다. 이것은 임상 및 연구 애플 리케이션의 다양한 엄청난 중요성을했다. 그것은 아름다운 이미지 ^1을 산출 등 fluorochrome 평가 및 조직 형태 ^측정이 같은 기술을 허용합니다. Fluorochrome 분석 칼슘에 바인딩 형광 염료가 그 주어진 시간에 mineralization의 금액의 부량을 허용 특정 시점에서 주입하는 기술입니다. 조직 형태 측정은 현미경 수준에서 뼈 부량의 과정이다.

undecalcified 뼈 조직학을 수행하는 것은 기술적으로 특히 대형 표본과 도전이다. 그것은 조직학 임베디드 표준 파라핀에 사용되는 이들의 기술 변화가 필요합니다. 이 동영상은 좋은 품질의 섹션을 제작하는 과정을 설명하고이를 극복하기 위해있는 기술적인 문제와 방법을 보여줍니다. 표본 준비, 고정 및 처리는 종종 몇 주간 복용 밀도와 낮은 뼈의 투자율 상당히 긴 고정 및 처리 시간이 필요하기 때문에 그러나 다른 부드러운 조직과 유사한 방식으로, 함께 달성하고 있습니다. 퍼가기 그러한 메타 크릴 레이트 기반 수지로 뼛속까지 비슷하거나 동일한 경도와 밀도 지원 매체를 사용하여 달성하지만, 파라핀 침투와 포함 달리, 이것은 돌이킬 단계입니다. Sectioning 그러한 fluorochrome 분석과 같은 연구를위한 최적있는 두꺼운 섹션을 생산하는 연삭에 의해 얻을 수 있습니다. 이것은 가장 macrotome에 다이아몬드 블레이드를 사용하여 이루어진다. 또한, 얇은 부분은 빛을 현미경을 위해 생산 수 있으며 이것은 매우 날카로운 칼날과 슬레지 마이크로톰를 사용하여 이루어진다. 썰매 마이크로톰 큰 하드 블록에 필요한 추가적인 강도와 안정성을 제공합니다. 수지 포함된 섹션은 시연 아르 얼룩 다양한 물들일 수 있습니다.

Protocol

조직은 10 % 인산을 포함하는 밀봉된 컨테이너가 포르말린 용액 3 버퍼에 저장됩니다. fluorochrome 분석 fluorochromes가 빛을 구분으로 수행할 수있다면, 빛을 최소한의 노출을 보장합니다. 필요하게 될 조직의 어느 방향 수립. 크기로 시편을, 트림 올바른 방향으로, 밴드를 사용하여 보았다. 안전 보장 조치을 준수하고 있습니다. 표본은 다음 불투명 용기에 위치의 볼륨 충분한 고정을 달성하…

Materials

Solvents:

• 10% Normal Buffered Formalin, Ethanol, Xylene and Butanol acid
  All histology grade, sulfur free.
  Grale Scientific Pty Ltd.
  http://www.grale.com.au

Moulds:

• Peel away, plastic moulds
  Grale Scientific

Slides:

• SUPERFROST PLUS Microscope slides
  Lomb Scientific Pty Ltd.
  http://www.lomb.com.au

Resin:

• GlycolMethacrylate Technovit 7100
  Heraeus Kulzer
  http://www.kulzer-technik.de/168/Products/Histology/Technovit_7100.htm
• Backing Block Resin- Technovit 3040 Histo block
  Heraeus Kulzer

Stains
(Reagents from Grale Scientific)

Goldner’s Trichrome stain

1. Weigert’s iron hemotoxylin (DeGroat)

a) Hemotoxylin solution
Hemotoxylin	1g
Absolute Alcohol	100mL
b) Iron Solution
30% aqueous ferric chloride	4mL
Hydrochloric acid (concentrated)	1mL
distilled Water	95mL

Filtered and added to equal volume of hemotoxylin immediately before stain used.

2. Ponceau-fuchsin-azophloxin stock solutions

a) Ponceau de xylidine solution
Ponceau de xylidine	0.75g
acid fuchsion	0.25g
Acetic Acid	1mL
mix, and add distilled water (100mL)
b) azophloxin solution
Azophloxin	0.5g
Acetic acid	0.6mL
mix, and add distilled water (100mL)
c) Final working stain solution
Ponceau-fuchsin solution	5-10mL
Azophloxin	2mL
0.2% acetic acid solution	88mL

3. Light Green Solution

Light Green	1g
acetic acid	1mL
Mix, and add distilled water (500mL)

4. Phophomolybdic acid-Orange G solution

Phosphomolybdic acid	3g
Orange G	2g
Dissolve in 500mL of distilled water and add crystal thymol.

Von Kossa Stain

1% aqueous silver nitrate

2.5% sodium thiosulfate

1% safranin O

Alcian blue stain

Alcian blue 8GX	1g
3% acetic acid solution	100mL

Hemotoxylin and Eosin stain

a)Harris’s hemotoxylin
Hemotoxylin	2.5g
Absolute alcohol	25mL
Potassium Alum	50g
distilled water	500mL
mercuric oxide	1.25g OR
Sodium iodate	0.5g
Glacial acetic acid	20mL
b) Eosin solution
Commercially produced Eosin was used.

All stain dye powders are Gurr dye powders.
All reagents are analytical reagents, and not Lab reagents

Fluorochromes

Manufacturer	Fluorochrome	Catalogue Number
Sigma-Aldrich, Sydney	Calcein Green	C0875
Sigma-Aldrich, Sydney	Alizarin Complexone	A3882
Intervet Australia, Victoria	Oxytetracycline (off the shelf antimicrobial drug)	Tradename; Engemycin 100