Nichtentkalktem Knochenhistologie liefert wichtige Informationen für eine Vielzahl von klinischen und wissenschaftlichen Anwendungen. Es ist technisch anspruchsvoll, vor allem bei großformatigen Proben. Dieses Video zeigt den Prozess der Herstellung guter Qualität Abschnitte und zeigt die technischen Schwierigkeiten und Methoden, mit denen sie zu überwinden.
Nichtentkalktem Knochenhistologie zeigt die Mikroarchitektur des Knochens. Es zeigt sowohl die mineralisierten und zellulären Bestandteile des Knochens, die wichtige Informationen auf den Knochenumbau oder Knochenbildung und Resorption zur Verfügung stellt. Dies hat enorme Bedeutung in einer Vielzahl von klinischen und wissenschaftlichen Anwendungen. Es liefert schöne Bilder 1 und ermöglicht Techniken wie Fluorochrom Beurteilung und Histomorphometrie 2. Fluorochrom-Analyse ist eine Technik, bei der Fluoreszenz-Farbstoffe, die Kalzium binden zu einem bestimmten Zeitpunkt, der für die Quantifizierung der Menge der Mineralisierung können an diesem bestimmten Zeitpunkt gespritzt werden. Histomorphometrisch ist ein Prozess des Knochen-Quantifizierung auf der mikroskopischen Ebene.
Performing nichtentkalktem Knochenhistologie ist technisch anspruchsvoll, vor allem bei großformatigen Proben. Es erfordert Veränderungen in Technik von den in Standard-Paraffin eingebetteten Histologie verwendet. Dieses Video zeigt den Prozess der Herstellung guter Qualität Abschnitte und zeigt die technischen Schwierigkeiten und Methoden, mit denen sie zu überwinden. Probenvorbereitung, Fixierung und Verarbeitung sind mit einer ähnlichen Weise wie andere Weichteile, aber aufgrund der Dichte und eine geringere Durchlässigkeit des Knochens erheblich länger Fixierung und Verarbeitung gefordert sind, oft unter mehreren Wochen erreicht. Embedding erfolgt über ein Trägermedium mit ähnlichen oder gleichen Härte und Dichte des Knochens wie Methacrylat-Harze, aber im Gegensatz zu Paraffin Infiltration und Einbettung, ist dies ein irreversibler Schritt. Schnitte können durch Schleifen, die zu einer dickeren Abschnitt, der optimal für Studien wie Fluorochrom Analyse erreicht werden. Dies ist am besten mit einem Diamant-Trennscheibe auf einem macrotome. Alternativ können dünnere Abschnitte für die Lichtmikroskopie hergestellt werden und erreichen Sie dies über einen Schlitten Mikrotom mit einem sehr scharfen Messer. Der Schlitten Mikrotom bietet die zusätzliche Festigkeit und Stabilität für große, harte Blöcke benötigt. Resin eingebettet Abschnitte können mit einer Vielzahl von Flecken, die gezeigt gefärbt werden.
Die Autoren bedanken sich bei der Unterstützung von Frau Sue Connell für ihr Know-how erkennen in Harz eingebettet und Frau Stephania Gräber für ihre Labor-Know-how. Die Autoren bedanken sich bei Professor Frank Kandziora und Dr. Marie-Anne Polboth für ihre Ratschläge danken.
Goldner’s Trichrome stain
1. Weigert’s iron hemotoxylin (DeGroat)
a) Hemotoxylin solution | |
Hemotoxylin | 1g |
Absolute Alcohol | 100mL |
b) Iron Solution | |
30% aqueous ferric chloride | 4mL |
Hydrochloric acid (concentrated) | 1mL |
distilled Water | 95mL |
Filtered and added to equal volume of hemotoxylin immediately before stain used.
2. Ponceau-fuchsin-azophloxin stock solutions
a) Ponceau de xylidine solution | |
Ponceau de xylidine | 0.75g |
acid fuchsion | 0.25g |
Acetic Acid | 1mL |
mix, and add distilled water (100mL) | |
b) azophloxin solution | |
Azophloxin | 0.5g |
Acetic acid | 0.6mL |
mix, and add distilled water (100mL) | |
c) Final working stain solution | |
Ponceau-fuchsin solution | 5-10mL |
Azophloxin | 2mL |
0.2% acetic acid solution | 88mL |
3. Light Green Solution
Light Green | 1g |
acetic acid | 1mL |
Mix, and add distilled water (500mL) |
4. Phophomolybdic acid-Orange G solution
Phosphomolybdic acid | 3g |
Orange G | 2g |
Dissolve in 500mL of distilled water and add crystal thymol. |
Von Kossa Stain
1% aqueous silver nitrate |
2.5% sodium thiosulfate |
1% safranin O |
Alcian blue stain
Alcian blue 8GX | 1g |
3% acetic acid solution | 100mL |
Hemotoxylin and Eosin stain
a)Harris’s hemotoxylin | |
Hemotoxylin | 2.5g |
Absolute alcohol | 25mL |
Potassium Alum | 50g |
distilled water | 500mL |
mercuric oxide | 1.25g OR |
Sodium iodate | 0.5g |
Glacial acetic acid | 20mL |
b) Eosin solution | |
Commercially produced Eosin was used. |
All stain dye powders are Gurr dye powders.
All reagents are analytical reagents, and not Lab reagents
Fluorochromes
Manufacturer |
Fluorochrome | Catalogue Number |
Sigma-Aldrich, Sydney | Calcein Green | C0875 |
Sigma-Aldrich, Sydney | Alizarin Complexone | A3882 |
Intervet Australia, Victoria | Oxytetracycline (off the shelf antimicrobial drug) |
Tradename; Engemycin 100 |