Questo protocollo illustra la tecnica per l'estrazione di ovociti o di embrioni fecondati in fase iniziale dalla ovidotto di topi. La capacità di identificare i infindibulum e inserire un ago senza punta fine in esso è essenziale per eseguire correttamente la procedura.
Abstract
Fino ad oggi, solo pochi studi hanno riportato manipolazioni successo dell'embriogenesi Peromyscus o biologia riproduttiva. Insieme con la Borsa di Centro Genetico Peromyscus (http://stkctr.biol.sc.edu), si stanno caratterizzando le differenze salienti necessari per sviluppare questo sistema. Un obiettivo primario è stato quello di ottimizzare ovociti / recupero embrione precoce.
Protocol
Embrione / recupero degli ovociti Almeno due ore prima il recupero degli embrioni / ovociti, KSOM si trova nel 37 º C CO 2 incubatore e FHM devono essere scongelati da -20 °. Un piatto di vetro contenente tre pozzi poco profondi concava viene usato per gocce casa di KSOM nell'incubatrice. Per prevenire la disidratazione, la KSOM piatto e sono posti in un contenitore con coperchio che ha l'acqua sul fondo. Questo apparecchio evita l'evaporazione senza l'uso di olio minerale. …
Discussion
In questo articolo, dimostriamo il recupero di ovociti da ovulazione indotta (superovulated) Peromyscus. L'uso di superovulazione (al contrario di naturale ciclo estrale) è comune a causa del numero molto maggiore che ne derivano. Tuttavia, bisogna fare attenzione nell'interpretare tali risultati utilizzando ovociti / embrioni, in quanto entrambi gli ormoni usati per indurre l'ovulazione e la coltura può avere effetti.
Quando estrale è stata confermata, le femmine sono euthenized e ovidotti recuperato insieme ad una p…
Acknowledgements
Vorrei ringraziare Mike Dewey dal Centro Peromyscus patrimonio genetico per il suo aiuto, la pazienza e la conoscenza.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Flushing needle
Tool
Zephyrtronics
ZT5-130-L
30 gauge blunt
Forceps (2)
Tool
Roboz
RS-5060
Peromyscus
Animal
Peromyscus Genetic Stock Center
Scissors
Tool
Roboz
RS-5880
FHM HEPES Buffered Media
Reagent
Specialty Media
MR-025-d
KSOM Embryo Culture Medium (5×10 ml)
Reagent
Specialty Media
MR-020P-5F
Mouth Pipette
Tool
Pulled from glass capillaries and attached to rubber tubing