Este protocolo ilustra a técnica para extrair óvulos ou embriões em estágio inicial fertilizado do oviduto de camundongos. A capacidade de identificar o infindibulum e inserir uma agulha na extremidade sem corte, é essencial a correta execução do procedimento.
Abstract
Até o momento, poucos estudos têm relatado manipulações sucesso da embriogênese Peromyscus ou biologia reprodutiva. Juntamente com o Peromyscus genética de Stock Center (http://stkctr.biol.sc.edu), estamos caracterizando as diferenças importantes necessários para desenvolver este sistema. A meta principal tem sido a de otimizar oócito / recuperação embrionária precoce.
Protocol
Embrião / oócito de recuperação Pelo menos duas horas antes da recuperação de embriões / óvulos, KSOM é colocado na 37 º C incubadora de CO 2 e FHM devem ser descongeladas de -20 °. Um prato de vidro contendo três poços rasos côncava é usada para casa de gotas KSOM na incubadora. Para evitar a desidratação, o KSOM e prato são colocados em um recipiente com tampa que tem água no fundo. Este aparelho evita a evaporação, sem o uso de óleo mineral. As tubas u…
Discussion
Neste artigo, demonstramos a recuperação de ovócitos de ovulação induzida (superovuladas) Peromyscus. O uso de superovulação (em oposição ao ciclo estral natural) é comum, devido ao número muito maior resultante. No entanto, o cuidado deve ser tomado na interpretação dos resultados utilizando oócitos tais / embriões, já que ambos os hormônios usados para induzir a ovulação e cultura podem ter efeitos.
Quando estral foi confirmado, as fêmeas são euthenized e tubas uterinas recuperados, juntamente com uma pe…
Acknowledgements
Gostaria de agradecer a Mike Dewey do Centro de Ações Peromyscus Genéticos para a sua ajuda, paciência e conhecimento.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Flushing needle
Tool
Zephyrtronics
ZT5-130-L
30 gauge blunt
Forceps (2)
Tool
Roboz
RS-5060
Peromyscus
Animal
Peromyscus Genetic Stock Center
Scissors
Tool
Roboz
RS-5880
FHM HEPES Buffered Media
Reagent
Specialty Media
MR-025-d
KSOM Embryo Culture Medium (5×10 ml)
Reagent
Specialty Media
MR-020P-5F
Mouth Pipette
Tool
Pulled from glass capillaries and attached to rubber tubing