Summary

ブラッドフォードプロテインアッセイの線形化

Published: April 12, 2010
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Summary

迅速かつ便利なブラッドフォードアッセイによるタンパク質定量の精度と感度は本質的な非線形性によって危険にさらされます。我々は、大幅に精度を向上させる簡単な線形化法を示して10倍程度アッセイの感度が向上し、大幅な洗剤による干渉を低減します。

Abstract

ブラッドフォードクマシーブリリアントブルーアッセイにおけるタンパク質のマイクログラム量の決定は、590nmでの吸光度を測定することによって達成される。この最も一般的なアッセイは、生化学的測定値の正規化の目的のために、細胞ライセート、細胞の分画、または組換えタンパク質サンプルの迅速でシンプルなタンパク質の定量が可能になります。しかし、本質的な非線形性は、この方法の感度と精度が低下します。それは標準的なアッセイ条件下で、590 nmと450 nmの吸光度測定の比はタンパク質濃度と厳密に線形であることが示されている。このシンプルな手順では、精度を向上させ、ダウンウシ血清アルブミンの50ngの10倍、許可定量化に関するアッセイの感度を向上させます。さらに、一般的に細胞ライセートを作成するために使用される界面活性剤によって導入された干渉が大幅に新しいプロトコルによって低減されます。線形方程式は、質量作用に基づいて開発され、ベールの法則は完璧に実験データをフィット。

Protocol

Bradfordタンパク質のキャリブレーションのグラフの線形化: 一般的にブラッドフォードアッセイ1として知られているクマシーブリリアントブルータンパク質アッセイは、広くために迅速かつ便利なプロトコルだけでなく、その相対的な感度で使用されています。残念なことに、タンパク質濃度の広い範囲(図1)上の曲率の大きい程度がある。そのため、比較的高…

Discussion

ブラッドフォードタンパク質アッセイは、原因で、パフォーマンスと相対感度のその使いやすさに人気があります。プロトコルによって得られた距離、タンパク質全体の濃度以上の線形化は、未知のサンプルは、キャリブレーションのグラフの範囲内にする必要がないようにここでさらに、アッセイを簡素化発表。

重要なのは、改良されたプロトコルでは、さらにオリ?…

Acknowledgements

本論文では、ここで説明する独自の研究をホストする故博士Zvi Selinger、の記憶に捧げられています。

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Bradford reagent   Bio-Rad Laboratories 500-0006  
Bovine Serum Albumin   Amersco 0332  
Multiplate absorbance reader   BioTek Synergy2  

References

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  6. Zor, T., Selinger, Z. Linearization of the Bradford protein assay increases its sensitivity: theoretical and experimental studies. Anal Biochem. 236, 302-308 (1996).

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Cite This Article
Ernst, O., Zor, T. Linearization of the Bradford Protein Assay. J. Vis. Exp. (38), e1918, doi:10.3791/1918 (2010).

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