我々は、胚発生時のライブイメージング細胞挙動のためのキメラゼブラフィッシュの胚を生成するプロトコルを示しています。
細胞は、胚形成の間にその場所とプロパティで広く変わる。これらの変化は、細胞とその環境との相互作用によって調節される。異なる遺伝的背景のセルで構成されているキメラ胚は、、、目的の遺伝子により媒介される細胞間相互作用を研究するための優れたツールです。初期の発達段階におけるゼブラフィッシュの胚の透明性は、細胞レベルでの組織や臓器の形態形成の直接可視化を可能にします。ここで、我々は、ゼブラフィッシュ胚におけるキメラ網膜と脳を生成するために、ドナー細胞のライブイメージングを実行するプロトコルを示しています。プロトコルは、移植針、GFP陰性のホストへのGFP発現ドナー割球の移植、およびライブ共焦点顕微鏡下でドナー細胞の挙動の試験の準備をカバーしています。若干の修正で、このプロトコルはまた、ゼブラフィッシュの他の組織や臓器の胚発生を研究するために使用することができます。ラベルのドナー細胞にGFPを使用する利点についても説明します。
このビデオでは、我々はゼブラフィッシュの網膜や脳の発達を分析する割球移植する方法を示しています。このプロトコルはまた、単に、ホスト胚の対応する場所にドナー割球を放出することによって、他の組織や器官の発達を分析するために使用することができます。 GFP分子による標識は、蛍光色素標識デキストラン(ホーとケイン1990)で標識よりクリーンなバックグラウンドをもたら?…
NIHグラントR01EY016099と盲目のキャリア開発賞を防止する研究:この研究は国立衛生研究所(NIH)コアグラント(5P30EY008098)と、以下の資金XWのによってサポートされていました。我々は、共焦点イメージングにおける援助のためにキラのラスロップに感謝。
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