Ткань Определение Использование трансплантации животных Cap (ACT) в Пробирной Xenopus laevis</em
Summary
Животное шапки гиперэкспрессией гена продукт (ы) пересаживают на фланге развивающихся<em> Xenopus laevis</em> Эмбрионов для того, чтобы установить, является ли ткани определяется.
Abstract
Многие белки играют двойную роль в эмбриональном развитии. Те, которые регулируют определение ячейки судьбу в конкретной ткани также может влиять на развитие большей области эмбриона. Это делает определение ее роли в определенной ткани трудно анализировать. Например,<em> Башка</em> Гиперэкспрессия в<em> Xenopus laevis</em> Эмбрионов вызывает расширение всей передней части, в том числе глаз<sup> 1,2</sup>. Из этого результата, то не известно, если Ноггин играет непосредственную роль в определении глаза или, что, вызывая расширение нервной ткани, Ноггин косвенно влияет на формирование глаз. Наличие этого комплекса фенотип делает изучение его глаз особую роль в ячейке определения судьбы трудно анализировать. Мы разработали анализа, что позволяет преодолеть эту проблему. Воспользовавшись плюрипотентных характер<em> Xenopus laevis</em> Животное крышкой<sup> 3</sup>, Мы разработали анализ, чтобы проверить способность гена продукт (ы), как и<em> Башка</em> Или глаз поле транскрипционных факторов (EFTFs), превратить шапки в определенной ткани или типов клеток путем пересадки этой ткани на стороне эмбриона<sup> 4</sup>. Хотя мы нашли либо лечения Ноггин белка или коллекции транскрипционных факторов может определить судьбу сетчатки ячейку в животных шапки, эта процедура может быть использована для идентификации гена продукт (ов), участвующего в определении других тканей, а также.
Protocol
Discussion
В этом видео, мы продемонстрировали нашу версию классических методов, используемых биологами Xenopus, которые мы переставить создать трансплантации животным шапка анализа. При комнатной температуре эмбрионы Xenopus развиваются очень быстро через этапы 9 и 15. Разместив их на 14 ° C, ра…
Acknowledgements
Эта работа была поддержана грантами от исследований в области профилактики слепоты (по развитию карьеры награждения МЭЗ и АСВ и неограниченный предоставляют отделения офтальмологии), Е. Матильда Зиглер Foundation (МЭЗ и АСВ) и Национального Института глаза / NIH (МЭЗ , гранты R01EY015748 и R01EY017964).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| mMessage mMachine SP6 Kit | Applied Biosystems/Ambion | AM1340 | ||
| Borosilicate Capillary Tubes (1.0mm OD x 0.5mm ID) | FHC, Inc | 27-30-1 | ||
| Sutter Micropipette Puller | Sutter Instruments, Inc. | P-97 | ||
| Gentamicin sulfate [50 mg/ml] | Fisher | BW17-528Z | ||
| Sylgard/elastomer Kit 1.1lb | Fisher | NC9644388 | ||
| 60 x 15 mm polystyrene petri dish | USA Scientific | 8609-0160 | ||
| human chorionic gonadotropin | Intervet | 22219 | ||
| Pico-Injector Microinjection Systems | Harvard Apparatus | 650003 | ||
| Torrey Pines Scientific ECHOtherm Incubator | Fisher | 11-680-21 | ||
| Transfer pipette | Krackeler | 6290-20635A | ||
| Dumostar #5 Forceps | Fisher | 11295-10 |
References
- Smith, W. C., Harland, R. M. Expression cloning of noggin, a new dorsalizing factor localized to the Spemann organizer in Xenopus embryos. Cell. 70, 829-840 (1992).
- Lamb, T. M. Neural induction by the secreted polypeptide noggin. Science. 262, 713-718 (1993).
- Green, J. Molecular Methods in Developmental Biology: Xenopus & Zebrafish. Methods in Developmental Biology. , (1999).
- Viczian, A. S., Solessio, E. C., Lyou, Y., Zuber, M. E. Generation of functional eyes from pluripotent cells. PLoS Biol. 7, e1000174-e1000174 (2009).
- Shaner, N. C., Steinbach, P. A., Tsien, R. Y. A guide to choosing fluorescent proteins. Nat Methods. 2, 905-909 (2005).
- Brown, A. L., Johnson, B. E., Goodman, M. B. Making patch-pipettes and sharp electrodes with a programmable puller. J Vis Exp. , (2008).
- Lan, L. Noggin Elicits Retinal Fate in Xenopus Animal Cap Embryonic Stem Cells. Stem Cells. , (2009).
