Determinación del tejido Con el trasplante de Cap Animal (ACT) en el ensayo Xenopus laevis</em
Summary
Animales que sobreexpresan genes tapas de producto (s), se trasplanta al costado de desarrollo<em> Xenopus laevis</em> Embriones con el fin de establecer si el tejido está determinada.
Abstract
Muchas proteínas juegan un doble papel en el desarrollo embrionario. Las que regulan la determinación de destino celular en un tejido específico también puede afectar el desarrollo de una región más grande del embrión. Esto hace que la definición de su papel en un determinado tejido difícil de analizar. Por ejemplo,<em> Bocha</em> Sobreexpresión en<em> Xenopus laevis</em> Embriones provoca la expansión de la región anterior completo, incluyendo el ojo<sup> 1,2</sup>. A partir de este resultado, no se sabe si Noggin desempeña un papel directo en la determinación de los ojos o que al causar una expansión del tejido neural, Noggin indirectamente afecta a la formación del ojo. Tener este fenotipo complejo hace que el estudio de sus ojos-papel específico en la determinación del destino de las células difíciles de analizar. Hemos desarrollado un análisis que supera este problema. Tomando ventaja de la naturaleza potente de la<em> Xenopus laevis</em> Animal tapa<sup> 3</sup>, Hemos desarrollado un ensayo para probar la capacidad del producto génico (s), como<em> Bocha</em> O los factores de transcripción de campo visual (EFTFs), para transformar las tapas en los tejidos o tipos celulares mediante el trasplante de este tejido en la parte del embrión<sup> 4</sup>. Si bien hemos encontrado ninguno de los tratamientos de proteína Noggin o un conjunto de factores de transcripción se puede determinar el destino de células de la retina en las tapas de los animales, este procedimiento podría ser utilizado para identificar productos génicos (s) involucrados en la especificación de otros tejidos.
Protocol
Discussion
En este video, hemos demostrado nuestra versión de las técnicas clásicas utilizadas por los biólogos de Xenopus, que reorganizan para crear la tapa de los animales del ensayo de transplante. A temperatura ambiente, los embriones de Xenopus se desarrollan muy rápidamente a través de las etapas 9 y 15. Poniéndolos a 14 ° C, el desarrollo del embrión es más lento y muchos más trasplantes se pueden realizar en un experimento. Si es necesario hacer crecer los embriones a los mayores niveles (>…
Acknowledgements
Este trabajo fue apoyado por becas de Investigación para Prevención de la Ceguera (Premios de Desarrollo Profesional para MEZ y ASV y una beca para el Departamento de Oftalmología), la Fundación E. Matilda Ziegler (MEZ y ASV) y el National Eye Institute / NIH (MEZ , las subvenciones y R01EY015748 R01EY017964).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| mMessage mMachine SP6 Kit | Applied Biosystems/Ambion | AM1340 | ||
| Borosilicate Capillary Tubes (1.0mm OD x 0.5mm ID) | FHC, Inc | 27-30-1 | ||
| Sutter Micropipette Puller | Sutter Instruments, Inc. | P-97 | ||
| Gentamicin sulfate [50 mg/ml] | Fisher | BW17-528Z | ||
| Sylgard/elastomer Kit 1.1lb | Fisher | NC9644388 | ||
| 60 x 15 mm polystyrene petri dish | USA Scientific | 8609-0160 | ||
| human chorionic gonadotropin | Intervet | 22219 | ||
| Pico-Injector Microinjection Systems | Harvard Apparatus | 650003 | ||
| Torrey Pines Scientific ECHOtherm Incubator | Fisher | 11-680-21 | ||
| Transfer pipette | Krackeler | 6290-20635A | ||
| Dumostar #5 Forceps | Fisher | 11295-10 |
References
- Smith, W. C., Harland, R. M. Expression cloning of noggin, a new dorsalizing factor localized to the Spemann organizer in Xenopus embryos. Cell. 70, 829-840 (1992).
- Lamb, T. M. Neural induction by the secreted polypeptide noggin. Science. 262, 713-718 (1993).
- Green, J. Molecular Methods in Developmental Biology: Xenopus & Zebrafish. Methods in Developmental Biology. , (1999).
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