Doku belirlenmesi Hayvan Cap Nakli (ACT) Testi Xenopus laevis</em
Summary
Hayvan kapaklar eksprese gen ürün (ler), gelişmekte olan kanadını nakledilen<em> Xenopus laevis</em> Embriyoların doku tespit olup olmadığının belirlenmesi için.
Abstract
Çoğu protein, embriyonik gelişim ikili bir rol oynarlar. Belirli bir doku düzenleyen hücre kaderinin belirlenmesinde de daha geniş bir bölge embriyonun gelişimi etkileyebilir. Bu analiz etmek zor, belli bir doku rolünü tanımlayan hale getirir. Örneğin,<em> Noggin</em> Aşırı ekspresyonu<em> Xenopus laevis</em> Embriyolar göz dahil olmak üzere, tüm ön bölgenin genişleme neden<sup> 1,2</sup>. Bu sonucu, Noggin sinir dokusunun bir genişleme neden göz belirlenmesi ya da doğrudan bir rol oynar, Noggin dolaylı göz oluşumunu etkiler bilinmemektedir. Bu karmaşık bir fenotipe sahip hücre kaderinin belirlenmesinde göz özel rolünü analiz etmek zor eğitim yapar. Biz bu sorunun üstesinden bir test geliştirdiler. Pluripotent doğanın yararlanan<em> Xenopus laevis</em> Hayvan kap<sup> 3</sup>, Bizim gibi, gen ürünü (ler) yeteneğini test etmek için bir test geliştirdiler<em> Noggin</em> Ya da göz alan transkripsiyon faktörleri (EFTFs), embriyo yüzüne bu doku nakli, belirli bir doku veya hücre tipleri içine kapakları dönüştürmek için<sup> 4</sup>. Noggin protein tedavisi ya da transkripsiyon faktörlerinin bir toplama ya da hayvan kapakları retinal hücre kaderini belirleyecek olsa da, bu prosedür de diğer dokularda belirterek ilgili gen ürün (ler) tanımlamak için kullanılır.
Protocol
Discussion
Bu video, hayvan kap nakli tahlil oluşturmak için yeniden düzenlenmiştir Xenopus biyologlar tarafından kullanılan klasik teknikleri, bizim sürümü göstermiştir. Oda sıcaklığında, Xenopus embriyolar evre 9 ve 15 ile çok hızlı bir şekilde gelişir. 14 yaşında yerleştirerek ° C, embriyo gelişimi yavaşladı ve çok daha fazla bir deneyde nakli yapılabilir. Yaşlı aşamaları (42/43) embriyolar büyümek için gerekli ise, o zaman biz büyük tetarlar enjekte floresan protein sinya…
Acknowledgements
Bu çalışma, Körlük (Kariyer Geliştirme MEZ ve ASV Ödüller ve sınırsız ödenekle Göz Hastalıkları Bölümü), E. Matilda Zeigler Vakfı (MEZ ve ASV) ve Ulusal Göz Enstitüsü / NIH (MEZ Önlemek Araştırma hibeleri tarafından desteklenen , hibe R01EY015748 ve R01EY017964).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| mMessage mMachine SP6 Kit | Applied Biosystems/Ambion | AM1340 | ||
| Borosilicate Capillary Tubes (1.0mm OD x 0.5mm ID) | FHC, Inc | 27-30-1 | ||
| Sutter Micropipette Puller | Sutter Instruments, Inc. | P-97 | ||
| Gentamicin sulfate [50 mg/ml] | Fisher | BW17-528Z | ||
| Sylgard/elastomer Kit 1.1lb | Fisher | NC9644388 | ||
| 60 x 15 mm polystyrene petri dish | USA Scientific | 8609-0160 | ||
| human chorionic gonadotropin | Intervet | 22219 | ||
| Pico-Injector Microinjection Systems | Harvard Apparatus | 650003 | ||
| Torrey Pines Scientific ECHOtherm Incubator | Fisher | 11-680-21 | ||
| Transfer pipette | Krackeler | 6290-20635A | ||
| Dumostar #5 Forceps | Fisher | 11295-10 |
References
- Smith, W. C., Harland, R. M. Expression cloning of noggin, a new dorsalizing factor localized to the Spemann organizer in Xenopus embryos. Cell. 70, 829-840 (1992).
- Lamb, T. M. Neural induction by the secreted polypeptide noggin. Science. 262, 713-718 (1993).
- Green, J. Molecular Methods in Developmental Biology: Xenopus & Zebrafish. Methods in Developmental Biology. , (1999).
- Viczian, A. S., Solessio, E. C., Lyou, Y., Zuber, M. E. Generation of functional eyes from pluripotent cells. PLoS Biol. 7, e1000174-e1000174 (2009).
- Shaner, N. C., Steinbach, P. A., Tsien, R. Y. A guide to choosing fluorescent proteins. Nat Methods. 2, 905-909 (2005).
- Brown, A. L., Johnson, B. E., Goodman, M. B. Making patch-pipettes and sharp electrodes with a programmable puller. J Vis Exp. , (2008).
- Lan, L. Noggin Elicits Retinal Fate in Xenopus Animal Cap Embryonic Stem Cells. Stem Cells. , (2009).
