Summary
В этом исследовании разработан эффективный и воспроизводимый протокол Tuina для лечения замороженного плеча, установленный на модели крысы. Такой подход поможет изучить метод лечения замороженных плеч Туйна-терапией.
Abstract
Синдром замороженного плечевого сустава (ФС) является распространенным заболеванием, для которого не определена оптимальная терапия. Туйна-терапия, техника традиционной китайской медицины (ТКМ), используемая для лечения пациентов с ФС в китайских больницах, продемонстрировала отличные результаты, но ее механизмы до конца не изучены. Основываясь на предыдущем исследовании, эта работа была направлена на разработку протокола Туина для модели крысы с ФС. Мы случайным образом разделили 20 крыс SD на контрольную (C; n = 5), FS модель (M; n = 5), FS модель лечения Tuina (MT; n = 5) и FS модель перорального лечения (MO; n = 5). В этом исследовании использовали метод гипсовой иммобилизации для создания модели крыс FS. Оценивали влияние туина и перорального дексаметазона на плечелопаточный диапазон движений (ROM) и оценивали гистологические данные. Наше исследование показало, что Туина и пероральный дексаметазон способны улучшить активный ROM плечевого сустава и сохранить структуру капсулы, при этом терапия Туина оказалась более эффективной, чем пероральный дексаметазон. В заключение следует отметить, что протокол Туины, установленный в данном исследовании, был высокоэффективным при ФС.
Introduction
Замороженный плечевой сустав (ФС), также известный как адгезивный капсулит плеча, является самоизлечивающимся заболеванием, характеризующимся болью в плече и дефицитом подвижности. Обычно он поражает людей в возрасте от 30 до 70 лет, средний возраст которых составляет 50 лет, и имеет распространенность около 5%среди населения Китая. Сообщается, что у женщин частота ФС в 1,6 раза выше, чем умужчин2. Распространенность ФС выше у людей с сахарным диабетом, нарушениями углеводного и липидного обмена или другими сопутствующими заболеваниями и колеблется от 10% до 36%2,3. Современные клинические методы лечения ФС включают физиотерапию, стероидные препараты и хирургическое лечение4.
Было показано, что туина, терапия традиционной китайской медицины (ТКМ), эффективно облегчает боль в плече у пациентов с ФС, улучшая качество их жизни 5,6. Тем не менее, основные механизмы этого лечения недостаточно изучены. Таким образом, использование животных моделей для изучения эффектов и механизмов Tuina в лечении ФС имеет решающее значение.
Плечевой сустав крысы имеет сложную структуру, аналогичную строению плеча человека, и часто используется в механистических исследованиях FS7. Модель крыс FS характеризуется снижением плечевого сустава и фиброза капсулы8. Кроме того, эта модель позволяет наблюдать за капсулой плечевого сустава и проводить патологоанатомические исследования при восстановлении травмы9. Кроме того, пероральные кортикостероиды часто используются в качестве контрольной группы в исследованиях лечения ФС10. Данное исследование направлено на разработку протокола Tuina для модели крыс FS и демонстрирует возможность проведения экспериментов на животных в исследованиях Tuina путем сравнения эффективности терапии Tuina и перорального дексаметазона.
Protocol
Это исследование было одобрено Комитетом по этике Аффилированной больницы Шаньдунского университета традиционной китайской медицины (номер: AWE-2022-023).
1. Подопытные животные
- Двадцать крыс-самцов Спрэг-Доули (SD) (7 недель, 250-280 г) содержались в стандартных условиях (комнатная температура [RT] 20-24 °C, влажность 40%-60% и цикл свет/темнота 12 ч/12 ч).
2. Метод группировки
- Сгруппируйте крыс с СД в контрольную группу (С), контрольную группу модели ФС (М), группу лечения Туина модели ФС (МТ) и группу перорального лечения ФС модели ФС (МО), каждая из которых состоит из 5 крыс. Содержать по 5 крыс в клетке (одна группа).
- После 7 дней акклиматизации иммобилизуйте одно плечо крыс в группах М, МТ и МО с помощью иммобилизации гипсовой повязкой в течение 3 недель, чтобы имитировать ФС, как описано в следующем разделе.
- Проводите терапию Tuina крысам в группе МТ в течение 2 недель, как описано в разделе 4 (рис. 1).
- Рассчитайте необходимую дозу дексаметазона на каждый килограмм крыс (0,0675 мг/сут), исходя из дозировки взрослого человека (0,75 мг/сут) и соотношения площади поверхности тела крысы и человека (0,018).
- Ежедневно вводят внутрижелудочный раствор дексаметазона крысам в группе МО в дозе 0,067 мг/кг/сут в 7:00 утра в течение 2 недель.
ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте этот метод группировки для подтверждения эффекта протокола Tuina в этом исследовании. Применяют метод группировки в соответствии с экспериментальными целями в различных исследованиях.
3. Разработка модели ТЭО
- Обезболивайте крыс трибромэтанолом (250 мг/кг, внутрибрюшинная инъекция)11.
ПРИМЕЧАНИЕ: В соответствии с требованиями комитета по этике учреждения исходный раствор, состоящий из трибомоэтанола (10 г) и трет-амилового спирта (10 мл), хранили при температуре 4 °C. Перед применением его разбавляли до 2% дистиллированной водой. - Наложить пропитанные гипсом повязки на правое плечо и грудную клетку крыс, удерживая правую переднюю конечность под углом 90° внутреннего вращения плечевого сустава в течение 3 недель (рис. 2)12.
ПРИМЕЧАНИЕ: Следите за крысами, чтобы убедиться, что они могут выполнять нормальную физиологическую деятельность, такую как ходьба, еда и питье. Повторно зафиксируйте гипсовую повязку, если крысы не могут выполнять нормальную физиологическую деятельность. - Подтвердите успешное создание модели ФС, наблюдая за развитием таких симптомов, как скованность в правом плечевом суставе, сокращение правой верхней конечности, мышечная атрофия и хромота у крыс13.
4. Метод Туйна
ПРИМЕЧАНИЕ: На протяжении всей процедуры исследователь должен носить средства индивидуальной защиты. Все манипуляции должен выполнять только один профессиональный врач Туйна (рисунок 3, рисунок 4 и рисунок 5).
- Тренируйтесь по системе определения параметров техники Intelligent-massage, включающей механорецептор и компьютер (рис. 3А).
- Выполняйте манипуляции с механорецепторными и силовыми параметрами в трех направлениях, отображаемых через программное обеспечение (рис. 3Б).
- Большим пальцем выполняют ротационно-разминающий метод вращательным движением с силой 0,5 кг и частотой 100-120 раз/мин (рисунок 3В).
- Кончиком большого пальца выполните метод точечного нажатия с силой 0,5 кг (рис. 3D).
- Выполните Туину на крысах, поддерживая механический дисплей, упомянутый в шагах 4.1.2 и 4.1.3, в течение 1 минуты.
- Держите крысу до тех пор, пока она не успокоится (~2 мин). Затем выполните манипуляцию. Поместите крысу в лежачее положение на боку, но положение может меняться в зависимости от различных методов манипуляции.
- Указательным и средним пальцами правой руки зажмите правую переднюю конечность крысы, согните и разогнете ее несколько раз, чтобы определить положение плечевого, локтевого и плечевого суставов крысы.
- Разминают правое плечо, переднюю конечность и спину крысы вращением по часовой стрелке мякотью большого пальца с силой 0,5 кг и частотой 100-120 раз/мин в течение 3 мин (рис. 4А-В).
- Манипулируйте мышцами передних конечностей в положении лежа на боку.
- Манипулируйте мышцами плеча и спины в положении лежа.
- Нажмите на акупунктурные точки LI15 (Цзяньюй), СИ11 (Тяньцзун), HT01 (Цзицюань) и LI11 (Цюйци) вертикально кончиком большого пальца 30 раз на акупунктурную точку силой 0,5 кг (Рисунок 4D-G).
- Используйте атлас акупунктурных точек крыс, чтобы определить местоположение каждой акупунктурной точки (рис. 5)14,15.
- Пресс LI15, расположенный во впадине передне-нижнего от акромиального конца, в положении лежа.
- Нажмите на SI11, расположенный во впадине к подостной ямке в средней точке лопаточного позвоночника, в положении лежа.
- Нажмите HT01, расположенный в центре подмышечной впадины, в положении лежа на спине.
- Нажмите на LI11, расположенный во впадине медиально к лучевому разгибателю запястья на латеральном конце кубитальной складки в боковом положении лежа.
- Возьмитесь за плечевой сустав большим и средним пальцами левой руки и растяните переднюю конечность в положениях приведения, отведения, переднего разгибания и заднего разгибания в течение 10 с (рис. 4H-K).
ПРИМЕЧАНИЕ: Этот метод растяжения должен проводиться без сопротивления у крыс. - Приостановите процедуру Туины, если крыса начинает волноваться. Погладьте крысу в течение 10 с, чтобы она успокоилась, а затем приступайте к испытанию.
- Выполняйте процедуру ежедневно в течение 2 недель.
5. Измерение плечевого сустава
ПРИМЕЧАНИЕ: Важно завершить процесс измерения как можно быстрее, чтобы предотвратить дегенерацию ткани капсулы сустава.
- Удалите лопатку и проксимальные две трети плечевой кости en bloc после принесения крысе в жертву чрезмерной дозы трибромэтанола (3-кратная начальная доза, путем внутрибрюшинной инъекции), обнажив нижний край лопатки.
- Введите инъекционную иглу (1,2 см x 0,45 мм) вдоль плечевой кости в головку плечевой кости.
- Ввести две инъекционные иглы вертикально в верхний и нижний углы лопатки на пенопласт, обернутый стерильным хирургическим листом.
- Прикрепите тонкую нить к инъекционной игле на плечевом стержне и потяните ее за другой конец с усилием 5 g, чтобы она была параллельна плечевому стержню. Измерьте угол между нижним краем лопатки и плечевым валом (рисунок 6).
ПРИМЕЧАНИЕ: Чтобы обеспечить надежные результаты, поручите измерениям проводить отдельному исследователю. - Сообщайте данные в виде среднего ±стандартного отклонения (SD) с помощью программного обеспечения для статистического анализа.
ПРИМЕЧАНИЕ: Здесь использовалось программное обеспечение SPSS (SPSS, версия 25.0). - Проанализируйте различия между группами с помощью одностороннего дисперсионного анализа (ANOVA).
- Получение гистограммы с помощью соответствующего программного обеспечения.
ПРИМЕЧАНИЕ: Здесь был использован GraphPad Prism 8. - Оценка патологии капсулы с помощью H&E и окрашивания по Массону после измерения.
6. Подготовка раздела
- После оценки плечевого сустава ПЗУ фиксируют целые образцы в 4% ПФА в течение 3 дней с последующей декальцинацией в растворе ЭДТА (рН 7,2) в течение еще 2 месяцев.
- После обезвоживания нарезать встроенные тканевые блоки, содержащие образцы, на ломтики16 мкм по 5 мкм.
- Высушите ломтик при температуре 65 °C в течение 60 минут.
- Очистите ломтик от парафина.
- Замочите срез в ксилоле I, ксилоле II и ксилоле III на 7 мин, затем понизьте количество этанола (безводный этанол, 5 мин; 95% этанол, 2 мин; 80% этанол, 2 мин и 70% этанол, 2 мин), и, наконец, в сверхчистой воде на 2 мин.
7. Окрашивание H&E
- Срезы окрашивают гематоксилином в течение 5 мин, промывают 1% соляной кислотой этиловым спиртом в течение 3 с, промывают проточной водой в течение 5 мин.
- Промойте участок эозином в течение 3 минут и промойте водой из-под крана.
- Срез замочить в этаноловом ряду (95% этанола I, 3 с; 95% этанола II, 3 с; безводного этанола I, 3 с, безводного этанола II, 1 мин), а затем погрузить в ксилоловый ряд (ксилол I, 1 мин; ксилол II, 1 мин).
- Нанесите каплю нейтрального герметика на каждый образец. Запечатайте каждый образец покровным стеклом.
- Соберите изображения с помощью инвертированного флуоресцентного микроскопа (масштабная линейка = 100 мкм).
8. Окрашивание по Массону
- С помощью иммуногистохимической ручки нарисуйте круг вокруг срезов, а затем инкубируйте срезы в растворе Буэна в течение 2 ч при 37 °C до протравы. Впоследствии промойте срезы водой до исчезновения желтого цвета.
- Обработайте образцы лазуритовым синим красителем в течение 3 минут, а затем промойте их дистиллированной водой.
- После окрашивания срезов гематоксилином (Майер) в течение 2 мин обрабатывают срезы в течение 3 с в кислом растворе дифференцировки этанола. Затем промойте срезы в проточной воде в течение 10 минут.
- Прокрасьте срезы раствором пурпурного красителя понсо в течение 10 минут, а затем промойте их водой.
- Погрузите срезы в раствор фосфомолибдиновой кислоты на 10 мин.
- Добавьте на участки раствор для окрашивания анилинового синего в течение 5 мин, а затем промывайте их слабым кислотным рабочим раствором в течение 2 мин.
- Обезвоживайте и делайте срезы прозрачными, как описано в шаге 7.3.
- Нанесите каплю нейтрального герметизирующего агента на каждый участок и накройте его покровным стеклом. Оставьте срезы в вытяжном шкафу для высыхания.
- Соберите изображения, как описано в шаге 7.5.
Representative Results
Физическая активность крыс наблюдалась для оценки успешности или неудачи модели ФС. Предыдущее исследование показало, что гипсовая иммобилизация значительно снижала пройденное расстояние и скорость ходьбы по сравнению с нормальнымикрысами. Другое исследование показало, что ФС не влияет на пройденное расстояние, а хромота является наиболее распространенным симптомом13. Это исследование показало скованность в правом плечевом суставе, сокращение правой верхней конечности, мышечную атрофию и хромоту у крыс после моделирования. Эти поражения в группах МТ и МО полностью исчезли через 2 недели вмешательства. Но в группе М существенных изменений не произошло.
Основным критерием оценки эффективности Tuina при ФС является измерение плечевого сустава ROM18. Мы отметили, что средние значения плечелопаточного ПЗУ составляли 149,3° ± 5,9° в группе С, 111,1° ± 3,9° в группе М, 128,5° ± 2,8° в группе МТ и 119,56° ± 2,9° в группе МО. Как показано на рисунке 7, плечелопаточное ПЗУ крыс в группе М было достоверно ниже, чем в группе С (Р < 0,0001). При этом ПЗУ в группе МТ и группе МО был достоверно выше, чем в группе М (Р < 0,05, Р < 0,0001). Однако ПЗУ в группе МО было достоверно ниже, чем в группе МТ (P < 0,0001). Это открытие говорит о том, что Туйна может значительно улучшить функцию плечевого сустава у крыс с ФС.
Кроме того, окрашивание H&E и окрашивание по Массону могут дополнительно продемонстрировать эффекты Tuina в сохранении структуры и уменьшении фиброза в капсуле. Для облегчения наблюдения для гистологических находок использовали капсулу плечевого сустава. Капсула плечевого сустава состоит из синовиального и фиброзногослоев 19. При окрашивании H&E выявлена пролиферация синовиоцитов, уплощение синовиальных складок, стазис эритроцитов и сосудистая пролиферация в группе М, что является типичными признаками ФС (рис. 8А, Б). Эти признаки в некоторой степени уменьшились после терапии препаратом Туина и пероральным дексаметазоном (рис. 8C, D). По сравнению с группой МТ, группа МО также показала большое количество синовиальных клеток. Окрашивание по Массону показало расположение пучков волокон в каждой группе (желтые стрелки). Капсула состоит из рыхлой сети ретикулярных волокон с пучками волокон, расположенными в аккуратном направлении (рис. 8E). В группе М пучки волокон располагались беспорядочно, что указывает на фиброз капсулы (рис. 8F). Капсулы крыс в группе МТ показали, что пучки волокон аккуратно и четко расслоены, но остаются слегка неупорядоченными в группе МО (рис. 8G, H).
Рисунок 1: Протокол создания модели ФС и вмешательства Туины. Крысы получали адаптивное питание в течение 7 дней, установление модели ФС в течение 21 дня, а терапию Туина проводили ежедневно в течение 14 дней. На 36-й день все крысы были принесены в жертву. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 2: Гипсовая иммобилизация для создания модели ФС на крысе. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 3: Количественный контроль манипуляции . (A) Интеллектуальная система определения параметров техники массажа. (B) Три силы могут быть измерены: параллельная сила вдоль направления X, продольная сила вдоль направления Y и вертикальная сила вдоль направления Z. (В) Прочность ротационно-месильного метода. Красная кривая представляет стабилизированную вертикальную силу (0,5 кг). Оранжевая кривая представляет собой регулярную параллельную силу. Белая кривая представляет собой регулярную продольную силу. (D) Сила метода точечного прессования. Красная кривая представляет вертикальную силу (0,5 кг). Оранжевые и белые кривые представляют непараллельные и продольные силы. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 4: Манипуляция, используемая в терапии Туйна. (А-С) Разомните мышцы правых плеч, передних конечностей и спины. (Д-Г) Точечный пресс LI15, SI11, HT01 и LI11. (Х-К) Растягивайте переднюю конечность в положениях приведения, отведения, переднего разгибания и заднего разгибания. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 5: Анатомическое положение LI15, SI11, HT01 и LI11 у крыс. ● Латеральная поверхность, ○ Медиальная поверхность. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 6: Измерение плечевого сустава. Тонкая нить прикрепляется к инъекционной игле, введенной в плечевой стержень, и тянется за другой конец с усилием 5 g, чтобы сделать его параллельным плечевому стержню. Угол между нижним краем лопатки и плечевой костью, измеряется как плечевая кость. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 7: Плечелопаточный ROM в трех группах крыс. Значения являются средними ± S.D., n = 5. На значимые различия указывает односторонний ANOVA (a P < 0,001 и bP < 0,0001). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 8: Гистологические данные капсулы плечевого сустава. (А,Д) Контрольная группа содержит нормальную капсульную структуру (окрашивание H&E и Masson). (Б,Ж) Модельная группа FS иллюстрирует следующие изменения в структуре капсулы: уплощенные синовиальные складки, фиброз капсулы и нарушенные пучки волокон (окрашивание H&E и Masson). (С,Г). Модель FS в сочетании с группой Tuina иллюстрирует, что структура капсулы близка к нормальной, а фиброз не очевиден (окрашивание H&E и Masson). (Г,Н) Модель ФС в сочетании с пероральным дексаметазоном показывает, что структура капсулы близка к нормальной, а фиброз очевиден (окрашивание H&E и Masson). Масштабная линейка = 100 мкм. HH: головка плечевой кости; черная стрелка: синовиальные складки; красная стрелка: застой эритроцитов и пролиферация сосудов; Желтая стрелка: пучки волокон. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.
Discussion
Первым важным шагом является выбор модели. Из-за сложности реализации первичной модели ФС для установлениямоделей ФС крыс часто используют гипсовую иммобилизацию и хирургическую внутреннюю фиксацию. Наиболее выраженное ограничение подвижности плечевого сустава и фиброз капсулы наблюдались в модели ФС, установленной гипсовой иммобилизацией в течение 3 недель12,20. В этом исследовании показатели успешности модели ФС были отличными, со 100% успехом.
Вторым критическим шагом являются манипуляции, используемые в этом протоколе. В данном исследовании использовались три манипуляции (разминание, надавливание и растяжение). Манипуляция разминания мягких тканей применялась к плечу, лопатке и предплечью, чтобы расслабить мышцы. Манипуляции с надавливанием выполнялись путем надавливания на акупунктурные точки, такие как LI15, SI11, HT01 и LI11, которые чаще всего используются в клинической практике при ФС 5,21. LI15, SI11 и HT01 расположены в положениях вокруг капсулы плечевого сустава и могут быть эффективны для улучшения функции ROM и плечевого сустава22. LI11 часто используется при двигательных нарушениях верхних конечностей и располагается в том же меридиане, что и LI15. Этот метод сопоставления акупунктурных точек помогает повысить эффективность LI1523. После полного расслабления были использованы техники растяжки для восстановления функциональной активности.
Возможная проблема в этом протоколе заключается в том, что крысы проявляют интенсивную резистентность во время Tuina, что может быть вызвано страхом, а не превышением толерантности крыс. В этот момент манипуляции следует прекратить до тех пор, пока крысы не успокоятся (поглаживание в течение 10 с успокаивает крыс). Кроме того, степень растяжения должна быть скорректирована в соответствии с симптомами крыс. Изначально ограничение плечевого сустава было очевидным, а амплитуда растяжения была небольшой. Наряду с вмешательством функция плечевого сустава у крыс постепенно восстанавливалась, а амплитуда растяжения прогрессивно увеличивалась. Стандартом является то, что крысы могут принять метод растяжения без сопротивления. Наконец, крысы обладают определенной степенью агрессии, а туйна требует длительного контакта с крысами, поэтому важно носить средства индивидуальной защиты.
Количественный контроль манипуляций является наиболее сложным в экспериментах Туины. В то время как тренажер массажной манипуляции может быть использован для контроля силы и частоты одной манипуляции, этот метод ограничен, когда задействовано несколько манипуляций и участков лечения24,25. В клинической практике Туйна, как правило, выполняется непосредственно практикующими врачами, и в этом исследовании было трудно вмешаться с помощью медицинского оборудования. Для контроля стимуляции можно использовать интеллектуальную систему определения параметров техники массажа, чтобы стандартизировать тренировку Туйны. После тренировки исследователь может в какой-то степени применить одинаковую силу к каждой крысе. Основным ограничением этого протокола является то, что манипуляции нельзя полностью контролировать.
Терапия ТКМ Туйна имеет богатую историю использования по всему Китаю, при этом различные врачи в больницах используют различные комбинации манипуляций и мест лечения. Поэтому важно создать воспроизводимые и эффективные протоколы как для экспериментов на животных, так и для клинических исследований. В этом исследовании использованные манипуляции и акупунктурные точки были основаны на предыдущем исследовании нашей команды, объединяющем наш клинический опыт с характеристиками модели21 животного ФС. Данное исследование продемонстрировало эффективность разработанного протокола Tuina в улучшении функции плечевого сустава и уменьшении капсульного фиброза у крыс с ФС. Эти результаты обеспечивают основу для дальнейших исследований механизмов, лежащих в основе лечения Туйной. Кроме того, протокол может быть полезен для исследователей, заинтересованных в изучении эффективности альтернативных медицинских методов лечения ФС.
Предыдущее исследование показало, что механизм вмешательства Tuina в фиброз может быть связан с подавлением регуляции TGF-β и CTGF при одновременном регулировании баланса MMP-1/TIMP-1, тем самым облегчая выработку внеклеточного матрикса (ECM)26. Влияние Туйны на фиброз плечевой капсулы может быть достигнуто за счет регуляции различных механизмов. Тем не менее, необходимы дальнейшие исследования, чтобы полностью понять механизмы, участвующие в этом улучшении.
Disclosures
Авторам нечего раскрывать.
Acknowledgments
Эта работа была поддержана Планом развития науки и технологий на 2020 год в городе Цзинань (грант No 202019059), Научно-техническим проектом традиционной китайской медицины провинции Шаньдун (номер гранта 2021Q080) и Проектом наследования Школы традиционной китайской медицины Цилу (номер гранта [2022]93).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 4% paraformaldehyde | Solarbio | P1110 | |
| Embedding machine | Changzhou Paisijie Medical Equipment Co., Ltd | BM450A | |
| Ethylene Diamine Tetraacetic Acid (EDTA) | Solarbio | E1171 | |
| Hematoxylin eosin (HE) staining kit | Sparkjade | EE0012 | |
| Intelligent-massage technique parameter determination system | Shanghai Dukang Intrument Equipment Co. Ltd | ZTC- |
|
| Microtome | Leica | 531CM-Y43 | |
Modified Masson Trichrome Staining Solution |
Shanghai yuanye Bio-Technology Co., Ltd | R20381-8 | Bouin 50 mL; lapis lazuli blue dye 50 mL; Hematoxylin (Mayer) 50 mL; acidic ethanol differentiation solution 50 mL; ponceau magenta dye solution 50 mL; phosphomolybdic acid solution 50 mL; aniline blue staining solution 50 mL; weak acid 50 mL |
| Tribromoethanol | Macklin | T903147-5 |
References
- Li, W., LU, N. Z., Xu, H. L., Wang, H. F., Huang, J. Case control study of risk factors for frozen shoulder in China. International Journal of Rheumatic Diseases. 18 (5), 508-513 (2015).
- Degreef, I., Steeno, P., De Smet, L. A survey of clinical manifestations and risk factors in women with Dupuytren's disease. Acta Orthopaedica Belgica. 74 (4), 456-460 (2008).
- Tighe, C. B., Oakley, W. S. Jr. The prevalence of a diabetic condition and adhesive capsulitis of the shoulder. Southern Medical Journal. 101 (6), 591-595 (2008).
- Cho, C. H., Bae, K. C., Kim, D. H. Treatment strategy for frozen shoulder. Clinics in Orthopedic Surgery. 11 (3), 249-257 (2019).
- Liu, M., et al. Effects of massage and acupuncture on the range of motion and daily living ability of patients with frozen shoulder complicated with cervical spondylosis. American Journal of Translational Research. 13 (4), 2804-2812 (2021).
- Ai, J., Dong, Y. K., Tian, Q. D., Wang, C. L., Fang, M. Tuina for periarthritis of shoulder: A systematic review protocol. Medicine. 99 (11), e19332 (2020).
- Norlin, R., Hoe-Hansen, C., Oquist, G., Hildebrand, C. Shoulder region of the rat: anatomy and fiber composition of some suprascapular nerve branches. The Anatomical Record. 239 (3), 332-342 (1994).
- Okajima, S. M., et al. Rat model of adhesive capsulitis of the shoulder. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (139), 58335 (2018).
- Zhao, H. K., et al. Tetrandrine inhibits the occurrence and development of frozen shoulder by inhibiting inflammation, angiogenesis, and fibrosis. Biomedicine & Pharmacotherapy. 140, 111700 (2021).
- nar, B. M., Battal, V. E., Bal, N., Güler, ÜÖ, Beyaz, S. Comparison of efficacy of oral versus intra-articular corticosteroid application in the treatment of frozen shoulder: An experimental study in rats. Acta Orthopaedica et Traumatologica Turcica. 56 (1), 64-70 (2022).
- Dias, Q. M., Rossaneis, A. C., Fais, R. S., Prado, W. A. An improved experimental model for peripheral neuropathy in rats. Brazilian Journal of Medical and Biological Research. 46 (3), 253-256 (2013).
- Kim, D. H., et al. Characterization of a frozen shoulder model using immobilization in rats. Journal of Orthopaedic Surgery and Research. 11 (1), 160 (2016).
- Feusi, O., et al. Platelet-rich plasma as a potential prophylactic measure against frozen shoulder in an in vivo shoulder contracture model. Archives of Orthopaedic and Trauma Surgery. 142 (3), 363-372 (2022).
- Yin, C. S., et al. A proposed transpositional acupoint system in a mouse and rat model. Research in Veterinary Science. 84 (2), 159-165 (2008).
- Guo, X. R., et al. Study on the regulatory mechanism of electroacupuncture based on thyroid pathway for mammary gland hyperplasia rats. Zhongguo Zhen Jiu. 38 (8), 857-863 (2018).
- Feldman, A. T., Wolfe, D. Tissue processing and hematoxylin and eosin staining. Methods in Molecular Biology. 1180, 31-43 (2014).
- Taguchi, H., et al. A rat model of frozen shoulder demonstrating the effect of transcatheter arterial embolization on angiography, histopathology, and physical activity. Journal of Vascular and Interventional Radiology: JVIR. 32 (3), 376-383 (2021).
- Oki, S., et al. Generation and characterization of a novel shoulder contracture mouse model. Journal of Orthopaedic Research. 33 (11), 1732-1738 (2015).
- Kubo, H., et al. Histologic examination of the shoulder capsule shows new layer of elastic fibres between synovial and fibrous membrane. Journal of Orthopaedics. 22, 251-255 (2020).
- Cho, C. H., Lho, Y. M., Hwang, I., Kim, D. H. Role of matrix metalloproteinases 2 and 9 in the development of frozen shoulder: human data and experimental analysis in a rat contracture model. Journal of Shoulder and Elbow Surgery. 28 (7), 1265-1272 (2019).
- Wang, J. M., et al. Efficacy and safety of Tuina and intermediate frequency electrotherapy for frozen shoulder: MRI-based observation evidence. American Journal of Translation Research. 15 (3), 1766-1778 (2023).
- Ben-Arie, E., et al. The effectiveness of acupuncture in the treatment of frozen shoulder: A systematic review and meta-analysis. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2020, 9790470 (2020).
- Zou, F., et al. The impact of electroacupuncture at hegu, shousanli, and quchi based on the theory "Treating flaccid paralysis by Yangming alone" on stroke patients' EEG: A pilot study. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2020, 8839491 (2020).
- Lv, T. T., et al. Using RNA-Seq to explore the repair mechanism of the three methods and three-acupoint technique on DRGs in sciatic nerve injured rats. Pain research & Management. 2020, 7531409 (2020).
- Niu, F., et al. Spinal tuina improves cognitive impairment in cerebral palsy rats through inhibiting pyroptosis induced by NLRP3 and Caspase-1. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2021, 1028909 (2021).
- Na, Z., et al. The combination of electroacupuncture and massage therapy alleviates myofibroblast transdifferentiation and extracellular matrix production in blunt trauma-induced skeletal muscle fibrosis. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2021, 5543468 (2021).
