Summary
Denna studie utvecklar ett effektivt och reproducerbart Tuina-protokoll för behandling av frusen skuldra etablerat i en råttmodell. Detta tillvägagångssätt kommer att hjälpa till att studera Tuina-terapins behandlingsmetod för frusna axlar.
Abstract
Frusen skuldra (FS) är ett vanligt tillstånd som inte har definierats som optimal behandling. Tuina-terapi, en traditionell kinesisk medicinteknik (TCM) som används för att behandla FS-patienter på kinesiska sjukhus, har visat utmärkta resultat, men dess mekanismer är inte helt klarlagda. Med utgångspunkt i en tidigare studie syftade detta arbete till att utveckla ett Tuina-protokoll för en FS-råttmodell. Vi delade slumpmässigt in 20 SD-råttor i kontrollgrupper (C; n = 5), FS-modell (M; n = 5), FS-modell Tuina-behandling (MT; n = 5) och FS-modell oral behandling (MO; n = 5). I denna studie användes den gjutna immobiliseringsmetoden för att fastställa FS-råttmodellen. Effekten av Tuina och oralt dexametason på det glenohumerala rörelseomfånget (ROM) utvärderades och de histologiska fynden utvärderades. Vår studie visade att Tuina och oralt dexametason kunde förbättra axelaktiv ROM och bevara kapselns struktur, där Tuina-behandling visade sig vara effektivare än oral dexametason. Sammanfattningsvis var Tuina-protokollet som etablerades i denna studie mycket effektivt för FS.
Introduction
Frusen skuldra (FS), även känd som adhesiv kapsulit i axeln, är en självbegränsande sjukdom som kännetecknas av axelsmärta och rörlighetsbrister. Den drabbar vanligtvis personer mellan 30 och 70 år, med en medelålder på 50 år, och har en prevalens på cirka 5 % i den kinesiska befolkningen1. Kvinnor rapporteras ha en 1,6 gånger högre förekomst av FS jämfört med män2. Prevalensen av FS är högre hos personer med diabetes, störningar i glukos- och lipidmetabolismen eller andra relaterade sjukdomar, mellan 10 % och 36 %2,3. Nuvarande kliniska behandlingar för FS inkluderar sjukgymnastik, steroidmediciner och kirurgiska behandlingar4.
Tuina, en traditionell kinesisk medicin (TCM) terapi, har visat sig effektivt lindra axelsmärta hos FS-patienter, vilket förbättrar deras livskvalitet 5,6. De underliggande mekanismerna för denna behandling är dock inte väl förstådda. Därför är det viktigt att använda djurmodeller för att studera effekterna och mekanismerna av Tuina vid behandling av FS.
Råttans skuldror har en komplex struktur som liknar den hos den mänskliga axeln och används ofta i mekanistiska studier av FS7. FS-råttmodellen kännetecknas av en minskning av glenohumeral ROM och kapselfibros8. Dessutom möjliggör denna modell observation av axelkapseln och möjliggör patologisk forskning samtidigt som skadan repareras9. Dessutom används orala kortikosteroider ofta som kontrollgrupp i FS-behandlingsforskning10. Denna studie syftar till att utveckla ett Tuina-protokoll för FS-råttmodellen och visar genomförbarheten av att utföra djurförsök i Tuina-forskning genom att jämföra effekten av Tuina-terapi och oral dexametason.
Protocol
Denna studie godkändes av etikkommittén vid Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine (nummer: AWE-2022-023).
1. Försöksdjur
- Tjugo hanråttor av märket Sprague-Dawley (SD) (7 veckor gamla, 250-280 g) hölls under standardförhållanden (rumstemperatur [RT] 20-24 °C, luftfuktighet 40%-60% och en 12 tim/12 timmars ljus/mörker-cykel).
2. Metod för gruppering
- Gruppera SD-råttorna i kontrollgrupp (C), FS-modellkontrollgrupp (M), FS-modell Tuina-behandlingsgrupp (MT) och FS-modell oral behandlingsgrupp (MO), som var och en består av 5 råttor. Håll 5 råttor per bur (samma grupp).
- Efter 7 dagars acklimatisering, immobilisera ena axeln på råttorna i M-, MT- och MO-grupperna med gipsgjuten immobilisering i 3 veckor för att efterlikna FS enligt beskrivningen i nästa avsnitt.
- Administrera Tuina-behandling till råttorna i MT-gruppen i 2 veckor, enligt beskrivningen i avsnitt 4 (figur 1).
- Beräkna erforderlig dos av dexametason för varje kilogram råtta (0,0675 mg/dag) baserat på den vuxna dosen (0,75 mg/dag) och förhållandet mellan råtta och mänsklig kroppsyta (0,018).
- Administrera daglig intragastarisk dexametasonlösning till råttor i MO-gruppen med 0,067 mg/kg/dag kl. 07:00 i 2 veckor.
OBS: Använd denna grupperingsmetod för att bekräfta effekten av Tuina-protokollet i denna studie. Utföra grupperingsmetoden enligt experimentella syften i olika studier.
3. Utveckling av FS-modellen
- Bedöva råttor med tribrometanol (250 mg/kg, genom intraperitoneal injektion)11.
ANMÄRKNING: I enlighet med kraven från institutionens etikkommitté förvarades en stamlösning bestående av tribomoetanol (10 g) och tert-amylalkohol (10 ml) vid 4 °C. Före användning späddes den till 2 % med destillerat vatten. - Applicera gipsindränkta bandage på råttornas högra axel och bröstkorg och håll höger framben vid 90° av axelledens inre rotation i 3 veckor (Figur 2)12.
OBS: Övervaka råttor för att säkerställa att de kan utföra normala fysiologiska aktiviteter som att gå, äta och dricka. Sätt tillbaka gipsbandaget om råttorna inte kan utföra normala fysiologiska aktiviteter. - Bekräfta den framgångsrika etableringen av FS-modellen genom att observera utvecklingen av symtom som stelhet i höger axelled, sammandragning av höger övre extremitet, muskelatrofi och haltande hos råttor13.
4. Tuina-metoden
OBS: Under hela proceduren måste utredaren bära personlig skyddsutrustning. Endast en enda professionell Tuina-läkare får utföra alla manipulationer (Figur 3, Figur 4 och Figur 5).
- Träna med hjälp av parameterbestämningssystemet för intelligent massageteknik, som inkluderar en mekanoreceptor och en dator (figur 3A).
- Utför manipulationer på mekanoreceptorn och kraftparametrarna i tre riktningar som visas via programvara (Figur 3B).
- Använd tumfingret för att utföra den roterande knådningsmetoden i en roterande rörelse med en styrka på 0,5 kg och en frekvens på 100-120 gånger/min (Figur 3C).
- Använd tumfingertoppen för att utföra punkttryckningsmetoden med en styrka på 0.5 kg (Figur 3D).
- Utför Tuina på råttorna genom att underhålla den mekaniska displayen som nämns i steg 4.1.2 och 4.1.3 i 1 min.
- Håll råttan tills den lugnar ner sig (~2 min). Utför sedan manipulationen. Placera råttan i liggande läge i sidled, men positionen kan ändras baserat på olika manipulationsmetoder.
- Använd höger pekfinger och långfinger för att klämma fast råttans högra framben och böj och sträck ut det flera gånger för att bestämma positionerna för råttans axelled, armbågsled och överarmsben.
- Knåda råttans högra axel, framben och rygg genom medurs rotation med tummassan med en styrka på 0,5 kg och en frekvens på 100-120 gånger/min i 3 minuter (Figur 4A-C).
- Manipulera frambensmusklerna i sidoliggande läge.
- Manipulera axel- och ryggmusklerna i bukläge.
- Tryck akupunkt LI15 (Jianyu), SI11 (Tianzong), HT01 (Jiquan) och LI11 (Quchi) vertikalt med tumfingertoppen 30 gånger per akupunkt med en styrka av 0.5 kg (Figur 4D-G).
- Använd rått-akupunktsatlasen för att definiera platsen för varje akupunkt (Figur 5)14,15.
- Tryck på LI15, som ligger i fördjupningen anterior-inferior till den akromiala änden, i bukläge.
- Tryck på SI11, som ligger i fördjupningen till infraspinatus fossa i mitten av skulderbladsryggraden, i bukläge.
- Tryck på HT01, som ligger vid axillens centrum, i ryggläge.
- Tryck på LI11 som ligger i fördjupningen medialt till extensor carpi radialis i den laterala änden av cubitalvecket i det laterala liggande läget.
- Håll axelleden med vänster tumme och långfinger och sträck ut frambenet i adduktions-, abduktions-, främre extensions- och posteriora extensionspositioner i 10 s (Figur 4H-K).
OBS: Denna sträckningsmetod måste utföras utan motstånd hos råttor. - Pausa Tuina-proceduren om råttan blir upprörd. Klappa råttan i 10 sekunder för att lugna ner den och fortsätt sedan med försöket.
- Utför proceduren dagligen i 2 veckor.
5. Mätning av glenohumeral ROM
OBS: Det är viktigt att slutföra mätprocessen så snabbt som möjligt för att förhindra degeneration av ledkapselvävnaden.
- Ta bort skulderbladet och de proximala två tredjedelarna av humerus en bloc efter att ha offrat råttan med en för hög dos tribrometanol (3x initial dos, genom intraperitoneal injektion), vilket exponerar skulderbladets nedre kant.
- Stick in en injektionsnål (1,2 cm x 0,45 mm) längs humerusskaftet i humerushuvudet.
- Stick in två injektionsnålar vertikalt i skulderbladets övre och nedre hörn på skumplast som är insvept i ett sterilt operationslakan.
- Fäst en tunn tråd på injektionsnålen på humerusskaftet och dra den i andra änden med en kraft på 5 g så att den blir parallell med humerusskaftet. Mät vinkeln mellan skulderbladets nedre kant och humerusskaftet (Figur 6).
OBS: För att säkerställa tillförlitliga resultat, låt en separat utredare utföra mätningarna. - Rapportera data som medelvärden ±standardavvikelse (SD) med hjälp av ett program för statistisk analys.
OBS: SPSS-programvara (SPSS, version 25.0) användes här. - Analysera skillnaderna mellan grupper med hjälp av envägsanalys av varians (ANOVA).
- Skaffa stapelgrafik med lämplig programvara.
OBS: GraphPad Prism 8 användes här. - Bedöm kapselpatologi med hjälp av H&E och Masson färgning efter mätning.
6. Förberedelse av avsnitt
- Efter utvärdering av glenohumeral ROM, fixera hela samples i 4% PFA i 3 dagar, följt av avkalkning i EDTA (pH 7.2) lösning i ytterligare 2 månader.
- Efter dehydrering, skär inbäddade vävnadsblock som innehåller proverna i 5 μm skivor16.
- Torka skivan vid 65 °C i 60 min.
- Avvaxa skivan.
- Blötlägg skivan i xylen I, xylen II och xylen III i 7 minuter, följt av en fallande etanolserie (vattenfri etanol, 5 min; 95 % etanol, 2 min; 80 % etanol, 2 min, och 70 % etanol, 2 min), och slutligen i ultrarent vatten i 2 min.
7. H&E-färgning
- Fläcka sektionerna med hematoxylin i 5 min, skölj med 1% saltsyraetanol i 3 s och tvätta med rinnande vatten i 5 min.
- Fläcka sektionen med eosin i 3 minuter och tvätta med kranvatten.
- Blötlägg sektionen i en etanolserie (95 % etanol I, 3 s; 95 % etanol II, 3 s; vattenfri etanol I, 3 s, och vattenfri etanol II, 1 min) och sänk sedan ner i en xylenserie (xylen I, 1 min; xylen II, 1 min).
- Placera en droppe neutralt gummitätningsmedel på varje sample. Försegla varje prov med ett täckglas.
- Samla in bilder med hjälp av ett inverterat fluorescensmikroskop (skalstreck = 100 μm).
8. Masson färgning
- Använd en immunhistokemisk penna, rita en cirkel runt snitten och inkubera sedan snitten i Bouins lösning i 2 timmar vid 37 °C till betningsmedel. Tvätta sedan sektionerna med vatten tills den gula färgen försvinner.
- Behandla proverna med lapis lazuli blue dye i 3 minuter och tvätta dem sedan med destillerat vatten.
- Efter färgning av sektionerna med hematoxylin (Mayer) i 2 min, behandla sektionerna i 3 s i den sura etanoldifferentieringslösningen. Tvätta sedan sektionerna under rinnande vatten i 10 min.
- Färga sektionerna med ponceau magenta färglösning i 10 minuter och tvätta dem sedan med vatten.
- Sänk ner sektionerna i fosfomolybdensyralösningen i 10 minuter.
- Tillsätt anilinblå färgningslösning till sektionerna i 5 minuter och tvätta dem sedan med en svag syralösning i 2 minuter.
- Torka och gör sektionerna genomskinliga enligt beskrivningen i steg 7.3.
- Placera en droppe neutralt gummitätningsmedel på varje sektion och täck den med ett täckglas. Låt sektionerna torka i ett dragskåp.
- Samla in bilder enligt beskrivningen i steg 7.5.
Representative Results
Den fysiska aktiviteten hos råttor observerades för att utvärdera framgången eller misslyckandet med FS-modellen. En tidigare studie visade att gipsimmobilisering signifikant minskade den tillryggalagda sträckan och gånghastigheten jämfört med normala råttor17. En annan forskning tyder på att FS inte påverkade den tillryggalagda sträckan, och haltande var det vanligaste symtomet13. Denna studie visade stelhet i höger axelled, sammandragning av höger övre extremitet, muskelatrofi och haltande hos råttor efter modellering. Dessa lesioner i MT- och MO-grupperna försvann helt efter 2 veckors intervention. Men det skedde ingen betydande förändring i M-gruppen.
Det primära kriteriet för att utvärdera effekten av Tuina i FS är mätning av glenohumeral ROM18. Vi observerade att medelvärdena för glenohumeral ROM var 149,3° ± 5,9° i C-gruppen, 111,1° ± 3,9° i M-gruppen, 128,5° ± 2,8° i MT-gruppen och 119,56° ± 2,9° i MO-gruppen. Som visas i figur 7 var den glenohumerala ROM hos råttor i M-gruppen signifikant lägre än den i C-gruppen (P < 0,0001). Dessutom var den faktiska övervakningen i MT-gruppen och MO-gruppen betydligt högre än i M-gruppen (P < 0,05, P < 0,0001). Den resultatinriktade övervakningen i MO-gruppen var dock betydligt lägre än i MT-gruppen (P < 0,0001). Detta fynd tyder på att Tuina kan förbättra axelledsfunktionen hos FS-råttor avsevärt.
Dessutom kan H&E-färgning och Masson-färgning ytterligare demonstrera effekterna av Tuina för att bevara strukturen och minska fibrosen i kapseln. För att underlätta observationen användes kapseln i glenohumeralleden för histologiska fynd. Axelledskapseln består av led- och fibrösa lager19. H&E-färgning avslöjade synoviocytproliferation, tillplattade synovialveck, erytrocytstas och vaskulär proliferation i M-gruppen, vilket är typiska kännetecken för FS (Figur 8A,B). Dessa tecken minskade i viss utsträckning efter behandling med Tuina och peroral dexametason (Figur 8C,D). Jämfört med MT-gruppen uppvisade MO-gruppen också mycket ledceller. Massonfärgning visade arrangemanget av fiberknippen i varje grupp (gula pilar). Kapseln består av ett löst nätverk av retikulära fibrer med fiberknippen arrangerade i en snygg riktning (Figur 8E). I M-gruppen var fiberknippena ordnade oordnat, vilket tyder på kapselfibros (Figur 8F). Kapslarna hos råttor i MT-gruppen visade att fiberknippena är snyggt och tydligt skiktade men förblir något oordnade i MO-gruppen (Figur 8G,H).
Figur 1: Protokoll för upprättande av FS-modellen och Tuina-intervention. Råttorna fick adaptiv utfodring i 7 dagar, FS-modelletablering i 21 dagar och Tuina-terapi utfördes dagligen i 14 dagar. På dag 36 avlivades alla råttor. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 2: Gjuten immobilisering för att etablera en råttmodell av FS. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 3: Kvantitativ kontroll av manipulation . (A) Intelligent system för bestämning av parametrar för massageteknik. (B) Tre krafter kan mätas som parallell kraft längs X-riktningen, longitudinell kraft längs Y-riktningen och vertikal kraft längs Z-riktningen. C) Styrkan hos den roterande knådningsmetoden. Den röda kurvan representerar den stabiliserade vertikala kraften (0,5 kg). Den orange kurvan representerar den vanliga parallella kraften. Den vita kurvan representerar den regelbundna longitudinella kraften. (D) Styrkan hos punkttryckningsmetoden. Den röda kurvan representerar den vertikala kraften (0,5 kg). Orange och vita kurvor representerar icke-parallella och longitudinella krafter. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 4: Manipulering som används vid Tuina-terapi. (A-C) Knåda musklerna i höger axlar, framben och rygg. (D-G) Peka på LI15, SI11, HT01 och LI11. (H-K) Sträck ut frambenet i adduktions-, abduktions-, främre extensions- och posteriora extensionspositioner. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 5: Anatomiska positioner för LI15, SI11, HT01 och LI11 hos råttor. ● Lateral yta, ○ Medial yta. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 6: Mätning av glenohumeral ROM. En tunn tråd fästs på en injektionsnål som förs in i humerusskaftet och dras i andra änden med en kraft på 5 g för att göra den parallell med humerusskaftet. Vinkeln mellan skulderbladets nedre kant och humerusskaftet mäts som glenohumeral ROM. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 7: Glenohumeral ROM över tre grupper av råttor. Värdena är medelvärden ± S.D., n = 5. Signifikanta skillnader indikeras av enkelriktad ANOVA (a P < 0,001 och bP < 0,0001). Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 8: Histologiska fynd av axelkapseln. (A,E) Kontrollgruppen har en normal kapselstruktur (H&E och Masson färgning). (B,F) FS-modellgruppen illustrerar förändringar i kapselns struktur enligt följande: tillplattade synovialveck, kapselfibros och störda fiberknippen (H&E och Masson färgning). (C,G). FS-modellen i kombination med Tuina-gruppen illustrerar att kapselns struktur är nära normal och att fibrosen inte är uppenbar (H&E och Masson färgning). (D,H) FS-modellen i kombination med oralt dexametason visar att kapselns struktur är nära normal och fibrosen är uppenbar (H&E och Masson färgning). Skalstång = 100 μm. HH: överarmsbenets huvud; svart pil: synovialveck; röd pil: erytrocytstasis och vaskulär proliferation; Gul pil: Fiberknippen. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Discussion
Det första kritiska steget är modellvalet. På grund av svårigheten att implementera den primära FS-modellen används ofta gjuten immobilisering och kirurgisk intern fixering för att etablera FS-råttmodeller 9,12. Den allvarligaste begränsningen av axelrörlighet och fibros i kapseln observerades i FS-modellen som etablerades genom gipsimmobilisering under 3 veckor12,20. I denna studie var framgångsfrekvensen för FS-modellen utmärkt, med 100% framgång.
Det andra kritiska steget är de manipulationer som används i detta protokoll. Tre manipulationer (knådning, pressning och sträckning) användes i denna studie. Manipulationen av mjukdelsknådning applicerades på axeln, skulderbladet och överarmen för att slappna av i musklerna. Pressmanipulation utfördes genom att applicera tryck på akupunkter såsom LI15, SI11, HT01 och LI11, som oftast används i klinisk praxis för FS 5,21. LI15, SI11 och HT01 är placerade i positioner runt axelkapseln och kan vara effektiva för att förbättra ROM och axelfunktion22. LI11 används ofta vid motorisk nedsättning av övre extremiteter och ligger i samma meridian som LI15. Denna akupunktmatchningsmetod hjälper till att förbättra effekten av LI1523. Efter fullständig avslappning användes stretchtekniker för att återställa funktionella aktiviteter.
Det möjliga problemet i detta protokoll är att råttor uppvisar intensiv resistens under Tuina, vilket kan orsakas av rädsla snarare än överskridande av råttornas tolerans. Vid denna tidpunkt bör manipulationerna stoppas tills råttorna lugnar ner sig (strykning i 10 s lugnar ner råttorna). Dessutom bör sträckningens omfattning anpassas efter råttornas symtom. Till en början var axelledens begränsning uppenbar och sträcksamplituden var liten. Tillsammans med ingreppet återhämtade sig råttornas axelledsfunktion gradvis och sträckningens amplitud ökade successivt. Standarden är att råttor kan acceptera sträckningsmetoden utan motstånd. Slutligen har råttor en viss grad av aggression, och Tuina kräver långvarig kontakt med råttor, så det är viktigt att bära personlig skyddsutrustning.
Den kvantitativa kontrollen av manipulation är den svåraste i Tuina-experimenten. Medan en massagemanipulationssimulator kan användas för att kontrollera styrkan och frekvensen av en enda manipulation, är denna metod begränsad när flera manipulationer och behandlingsställen är inblandade24,25. I klinisk praxis utförs Tuina vanligtvis direkt av läkare, och i denna studie var det svårt att ingripa med medicinsk utrustning. För att kontrollera stimuleringen kan det intelligenta parameterbestämningssystemet för massageteknik användas för att standardisera träningen av Tuina. Efter träningen kan utredaren använda samma kraft på varje råtta i viss utsträckning. Den största begränsningen med detta protokoll är att manipulationer inte kan kontrolleras helt.
TCM Tuina-terapi har en rik historia av användning över hela Kina, med olika läkare på sjukhus som använder olika kombinationer av manipulation och behandlingsställen. Därför är det viktigt att upprätta replikerbara och effektiva protokoll för både djurförsök och kliniska studier. I denna studie baserades de manipulationer och akupunkter som användes på en tidigare studie av vårt team, som kombinerade vår kliniska erfarenhet med egenskaperna hos FS-djurmodell21. Denna studie visade effektiviteten av det utvecklade Tuina-protokollet för att förbättra axelledsfunktionen och minska kapselfibros hos FS-råttor. Dessa fynd ger en grund för vidare undersökningar av de mekanismer som ligger till grund för Tuina-behandlingen. Dessutom kan protokollet vara användbart för forskare som är intresserade av att utforska effekten av alternativa medicinska behandlingar för FS.
En tidigare studie fann att mekanismen för Tuina-intervention på fibros kan vara relaterad till nedregleringen av TGF-β och CTGF samtidigt som balansen mellan MMP-1/TIMP-1 regleras, vilket minskar produktionen av extracellulär matris (ECM)26. Effekten av Tuina på fibrosen i axelkapseln kan uppnås genom reglering av olika mekanismer. Det krävs dock ytterligare forskning för att fullt ut förstå de mekanismer som är involverade i denna förbättring.
Disclosures
Författarna har inget att avslöja.
Acknowledgments
Detta arbete stöddes av 2020 års vetenskapliga och tekniska utvecklingsplan i staden Jinan (anslagsnummer 202019059), vetenskaps- och teknikprojektet för traditionell kinesisk medicin i Shandongprovinsen (anslagsnummer 2021Q080) och Qilu School of Traditional Chinese Medicine Inherit Project (anslagsnummer [2022]93).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 4% paraformaldehyde | Solarbio | P1110 | |
| Embedding machine | Changzhou Paisijie Medical Equipment Co., Ltd | BM450A | |
| Ethylene Diamine Tetraacetic Acid (EDTA) | Solarbio | E1171 | |
| Hematoxylin eosin (HE) staining kit | Sparkjade | EE0012 | |
| Intelligent-massage technique parameter determination system | Shanghai Dukang Intrument Equipment Co. Ltd | ZTC- |
|
| Microtome | Leica | 531CM-Y43 | |
Modified Masson Trichrome Staining Solution |
Shanghai yuanye Bio-Technology Co., Ltd | R20381-8 | Bouin 50 mL; lapis lazuli blue dye 50 mL; Hematoxylin (Mayer) 50 mL; acidic ethanol differentiation solution 50 mL; ponceau magenta dye solution 50 mL; phosphomolybdic acid solution 50 mL; aniline blue staining solution 50 mL; weak acid 50 mL |
| Tribromoethanol | Macklin | T903147-5 |
References
- Li, W., LU, N. Z., Xu, H. L., Wang, H. F., Huang, J. Case control study of risk factors for frozen shoulder in China. International Journal of Rheumatic Diseases. 18 (5), 508-513 (2015).
- Degreef, I., Steeno, P., De Smet, L. A survey of clinical manifestations and risk factors in women with Dupuytren's disease. Acta Orthopaedica Belgica. 74 (4), 456-460 (2008).
- Tighe, C. B., Oakley, W. S. Jr. The prevalence of a diabetic condition and adhesive capsulitis of the shoulder. Southern Medical Journal. 101 (6), 591-595 (2008).
- Cho, C. H., Bae, K. C., Kim, D. H. Treatment strategy for frozen shoulder. Clinics in Orthopedic Surgery. 11 (3), 249-257 (2019).
- Liu, M., et al. Effects of massage and acupuncture on the range of motion and daily living ability of patients with frozen shoulder complicated with cervical spondylosis. American Journal of Translational Research. 13 (4), 2804-2812 (2021).
- Ai, J., Dong, Y. K., Tian, Q. D., Wang, C. L., Fang, M. Tuina for periarthritis of shoulder: A systematic review protocol. Medicine. 99 (11), e19332 (2020).
- Norlin, R., Hoe-Hansen, C., Oquist, G., Hildebrand, C. Shoulder region of the rat: anatomy and fiber composition of some suprascapular nerve branches. The Anatomical Record. 239 (3), 332-342 (1994).
- Okajima, S. M., et al. Rat model of adhesive capsulitis of the shoulder. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (139), 58335 (2018).
- Zhao, H. K., et al. Tetrandrine inhibits the occurrence and development of frozen shoulder by inhibiting inflammation, angiogenesis, and fibrosis. Biomedicine & Pharmacotherapy. 140, 111700 (2021).
- nar, B. M., Battal, V. E., Bal, N., Güler, ÜÖ, Beyaz, S. Comparison of efficacy of oral versus intra-articular corticosteroid application in the treatment of frozen shoulder: An experimental study in rats. Acta Orthopaedica et Traumatologica Turcica. 56 (1), 64-70 (2022).
- Dias, Q. M., Rossaneis, A. C., Fais, R. S., Prado, W. A. An improved experimental model for peripheral neuropathy in rats. Brazilian Journal of Medical and Biological Research. 46 (3), 253-256 (2013).
- Kim, D. H., et al. Characterization of a frozen shoulder model using immobilization in rats. Journal of Orthopaedic Surgery and Research. 11 (1), 160 (2016).
- Feusi, O., et al. Platelet-rich plasma as a potential prophylactic measure against frozen shoulder in an in vivo shoulder contracture model. Archives of Orthopaedic and Trauma Surgery. 142 (3), 363-372 (2022).
- Yin, C. S., et al. A proposed transpositional acupoint system in a mouse and rat model. Research in Veterinary Science. 84 (2), 159-165 (2008).
- Guo, X. R., et al. Study on the regulatory mechanism of electroacupuncture based on thyroid pathway for mammary gland hyperplasia rats. Zhongguo Zhen Jiu. 38 (8), 857-863 (2018).
- Feldman, A. T., Wolfe, D. Tissue processing and hematoxylin and eosin staining. Methods in Molecular Biology. 1180, 31-43 (2014).
- Taguchi, H., et al. A rat model of frozen shoulder demonstrating the effect of transcatheter arterial embolization on angiography, histopathology, and physical activity. Journal of Vascular and Interventional Radiology: JVIR. 32 (3), 376-383 (2021).
- Oki, S., et al. Generation and characterization of a novel shoulder contracture mouse model. Journal of Orthopaedic Research. 33 (11), 1732-1738 (2015).
- Kubo, H., et al. Histologic examination of the shoulder capsule shows new layer of elastic fibres between synovial and fibrous membrane. Journal of Orthopaedics. 22, 251-255 (2020).
- Cho, C. H., Lho, Y. M., Hwang, I., Kim, D. H. Role of matrix metalloproteinases 2 and 9 in the development of frozen shoulder: human data and experimental analysis in a rat contracture model. Journal of Shoulder and Elbow Surgery. 28 (7), 1265-1272 (2019).
- Wang, J. M., et al. Efficacy and safety of Tuina and intermediate frequency electrotherapy for frozen shoulder: MRI-based observation evidence. American Journal of Translation Research. 15 (3), 1766-1778 (2023).
- Ben-Arie, E., et al. The effectiveness of acupuncture in the treatment of frozen shoulder: A systematic review and meta-analysis. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2020, 9790470 (2020).
- Zou, F., et al. The impact of electroacupuncture at hegu, shousanli, and quchi based on the theory "Treating flaccid paralysis by Yangming alone" on stroke patients' EEG: A pilot study. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2020, 8839491 (2020).
- Lv, T. T., et al. Using RNA-Seq to explore the repair mechanism of the three methods and three-acupoint technique on DRGs in sciatic nerve injured rats. Pain research & Management. 2020, 7531409 (2020).
- Niu, F., et al. Spinal tuina improves cognitive impairment in cerebral palsy rats through inhibiting pyroptosis induced by NLRP3 and Caspase-1. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2021, 1028909 (2021).
- Na, Z., et al. The combination of electroacupuncture and massage therapy alleviates myofibroblast transdifferentiation and extracellular matrix production in blunt trauma-induced skeletal muscle fibrosis. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2021, 5543468 (2021).
