Summary
Denne undersøgelse udvikler en effektiv og reproducerbar Tuina-protokol til behandling af frossen skulder etableret i en rottemodel. Denne tilgang vil hjælpe med at studere Tuina-terapibehandlingsmetoden for frosne skuldre.
Abstract
Frossen skulder (FS) er en almindelig tilstand uden defineret optimal terapi. Tuina-terapi, en traditionel kinesisk medicin (TCM) teknik, der anvendes til behandling af FS-patienter på kinesiske hospitaler, har vist fremragende resultater, men dens mekanismer forstås ikke fuldt ud. Med udgangspunkt i en tidligere undersøgelse havde dette arbejde til formål at udvikle en Tuina-protokol til en FS-rottemodel. Vi opdelte tilfældigt 20 SD-rotter i kontrolgrupper (C; n = 5), FS-model (M; n = 5), FS-model Tuina-behandling (MT; n = 5) og FS-model oral behandling (MO; n = 5). Denne undersøgelse brugte støbt immobiliseringsmetoden til at etablere FS-rottemodellen. Effekten af Tuina og oral dexamethason på glenohumeral bevægelsesområdet (ROM) blev evalueret, og de histologiske fund blev vurderet. Vores undersøgelse viste, at Tuina og oral dexamethason var i stand til at forbedre skulderaktiv ROM og bevare kapslens struktur, hvor Tuina-terapi viste sig at være mere effektiv end oral dexamethason. Afslutningsvis var Tuina-protokollen, der blev oprettet i denne undersøgelse, yderst effektiv for FS.
Introduction
Frossen skulder (FS), også kendt som klæbende kapselitis i skulderen, er en selvbegrænsende sygdom præget af skuldersmerter og mobilitetsunderskud. Det påvirker typisk mennesker mellem 30 og 70 år med en gennemsnitsalder på 50 år og har en forekomst på omkring 5% i den kinesiske befolkning1. Kvinder rapporteres at have en 1,6 gange højere forekomst af FS sammenlignet med mænd2. Forekomsten af FS er højere hos mennesker med diabetes, glukose- og lipidmetabolismeforstyrrelser eller andre relaterede sygdomme, der spænder mellem 10% og 36%2,3. Nuværende kliniske behandlinger for FS omfatter fysioterapi, steroid medicin og kirurgiske behandlinger4.
Tuina, en traditionel kinesisk medicin (TCM) terapi, har vist sig effektivt at lindre skuldersmerter hos FS-patienter og forbedre deres livskvalitet 5,6. Imidlertid er de underliggende mekanismer i denne behandling ikke godt forstået. Det er således afgørende at bruge dyremodeller til at studere virkningerne og mekanismerne af Tuina til behandling af FS.
Rottens skulderled har en kompleks struktur, der ligner den menneskelige skulder og bruges ofte i mekanistiske undersøgelser af FS7. FS-rottemodellen er kendetegnet ved et fald i glenohumeral ROM og kapselfibrose8. Desuden giver denne model mulighed for observation af skulderkapslen og muliggør patologisk forskning, mens skaden repareres9. Desuden anvendes orale kortikosteroider ofte som kontrolgruppe i FS-behandlingsforskning10. Denne undersøgelse sigter mod at udvikle en Tuina-protokol til FS-rottemodellen og demonstrerer muligheden for at udføre dyreforsøg i Tuina-forskning ved at sammenligne effekten af Tuina-terapi og oral dexamethason.
Protocol
Denne undersøgelse blev godkendt af den etiske komité på det tilknyttede hospital ved Shandong University of Traditional Chinese Medicine (nummer: AWE-2022-023).
1. Forsøgsdyr
- Tyve hanrotter af Sprague-Dawley (SD) (7 uger gamle, 250-280 g) blev opstaldet under standardforhold (stuetemperatur [RT] 20-24 °C, fugtighed 40%-60 % og en 12 t/12 timers lys/mørk cyklus).
2. Metode til gruppering
- Gruppér SD-rotterne i kontrolgruppe (C), FS-modelkontrolgruppe (M), FS-model Tuina-behandlingsgruppe (MT) og FS-model oral behandlingsgruppe (MO), der hver består af 5 rotter. Hold 5 rotter pr. Bur (samme gruppe).
- Efter 7 dages akklimatisering immobiliseres den ene skulder af rotterne i M-, MT- og MO-grupperne ved hjælp af gipsstøbt immobilisering i 3 uger for at efterligne FS som beskrevet i næste afsnit.
- Tuina-behandling gives til rotterne i MT-gruppen i 2 uger, som beskrevet i afsnit 4 (figur 1).
- Beregn den nødvendige dosis dexamethason for hvert kilo rotter (0,0675 mg/dag) baseret på doseringen til voksne (0,75 mg/dag) og forholdet mellem rotte og menneskers legemsoverfladeareal (0,018).
- Administrer dagligt intragastrisk dexamethasonopløsning til rotter i MO-gruppen ved 0,067 mg/kg/dag kl. 7:00 i 2 uger.
BEMÆRK: Brug denne grupperingsmetode til at bekræfte effekten af Tuina-protokollen i denne undersøgelse. Udfør grupperingsmetoden i henhold til eksperimentelle formål i forskellige undersøgelser.
3. Udvikling af FS-modellen
- Bedøv rotter med tribromethanol (250 mg/kg ved intraperitoneal injektion)11.
BEMÆRK: I overensstemmelse med kravene fra institutionens etiske komité blev en stamopløsning bestående af tribomoethanol (10 g) og tert-amylalkohol (10 ml) opbevaret ved 4 °C. Før brug blev den fortyndet til 2% med destilleret vand. - Påfør gipsgennemblødte bandager på rotternes højre skulder og bryst, og hold højre forben ved 90° indre rotation af skulderleddet i 3 uger (figur 2)12.
BEMÆRK: Overvåg rotter for at sikre, at de kan udføre normale fysiologiske aktiviteter såsom at gå, spise og drikke. Fastgør gipsforbindelsen igen, hvis rotterne ikke kan udføre normale fysiologiske aktiviteter. - Bekræft den vellykkede etablering af FS-modellen ved at observere udviklingen af symptomer som stivhed i højre skulderled, sammentrækning af højre overekstremitet, muskelatrofi og haltning hos rotter13.
4. Tuina-metoden
BEMÆRK: Under hele proceduren skal efterforskeren bære personlige værnemidler. Kun en enkelt professionel Tuina-læge skal udføre alle manipulationer (figur 3, figur 4 og figur 5).
- Træn ved hjælp af parameterbestemmelsessystemet Intelligent-massage-teknik, som omfatter en mekanoreceptor og en computer (figur 3A).
- Udfør manipulationer på mekanoreceptoren og kraftparametre i tre retninger, der vises via software (figur 3B).
- Brug tommelfingeren til at udføre rotationsæltningsmetoden i en roterende bevægelse med en styrke på 0,5 kg og en frekvens på 100-120 gange / min (figur 3C).
- Brug tommelfingerspidsen til at udføre punkttrykningsmetoden med en styrke på 0,5 kg (figur 3D).
- Udfør Tuina på rotterne ved at opretholde det mekaniske display, der er nævnt i trin 4.1.2 og 4.1.3, i 1 min.
- Hold rotten, indtil den falder til ro (~2 min). Udfør derefter manipulationen. Placer rotten i lateral liggende stilling, men positionen kan ændre sig baseret på forskellige manipulationsmetoder.
- Brug højre pegefinger og langfinger til at klemme rottens højre forben og bøj den og stræk den flere gange for at bestemme positionerne for rottens skulderled, albueled og humerus.
- Rottens højre skulder, forben og ryg æltes med uret med tommelfingerpulpen i en styrke på 0,5 kg og en frekvens på 100-120 gange/min i 3 minutter (figur 4A-C).
- Manipuler forbenets muskler i lateral liggende stilling.
- Manipuler skulder- og rygmusklerne i den udsatte position.
- Tryk akupunkt LI15 (Jianyu), SI11 (Tianzong), HT01 (Jiquan,) og LI11 (Quchi) lodret med tommelfingerspidsen 30 gange pr. akupunkt med en styrke på 0,5 kg (figur 4D-G).
- Brug rotte-akupunktatlasset til at definere placeringen af hvert akupunkt (figur 5)14,15.
- Tryk på LI15, der er placeret i depressionen anterior-ringere end den akromiale ende, i den udsatte position.
- Tryk SI11, der er placeret i fordybningen til infraspinatus fossa i midten af skulderbladet, i den udsatte position.
- Tryk på HT01, placeret i axillacentret, i liggende stilling.
- Tryk på LI11 placeret i fordybningen medial til extensor carpi radialis i den laterale ende af cubital folden i lateral liggende stilling.
- Hold skulderleddet med venstre tommelfinger og langfinger, og stræk forbenet i adduktion, bortførelse, forreste forlængelse og bageste forlængelsespositioner i 10 s (figur 4H-K).
BEMÆRK: Denne strækningsmetode skal udføres uden resistens hos rotter. - Sæt Tuina-proceduren på pause, hvis rotten bliver ophidset. Slag rotten i 10 s for at berolige den, og fortsæt derefter med forsøget.
- Udfør proceduren dagligt i 2 uger.
5. Måling af glenohumeral ROM
BEMÆRK: Det er vigtigt at afslutte måleprocessen så hurtigt som muligt for at forhindre degeneration af ledkapselvævet.
- Fjern scapulaen og proksimal to tredjedele af humerus en bloc efter at have ofret rotten med en overdreven dosis tribromethanol (3x indledende dosis ved intraperitoneal injektion), der udsætter den nederste kant af skulderbladet.
- Indsæt en injektionsnål (1,2 cm x 0,45 mm) langs humeralakslen i humeralhovedet.
- Indsæt to injektionsnåle lodret i de øverste og nederste hjørner af skulderbladet på plastskum indpakket med et sterilt kirurgisk ark.
- Fastgør en tynd tråd til kanylen på humerakslen og træk den i den anden ende med en kraft på 5 g for at gøre den parallel med humerakslen. Mål vinklen mellem skulderbladets nederste kant og humerakslen (figur 6).
BEMÆRK: For at sikre pålidelige resultater skal du få en separat efterforsker til at udføre målingerne. - Rapportér data som middel ±standardafvigelse (SD) ved hjælp af et statistisk analyseprogram.
BEMÆRK: SPSS-software (SPSS, version 25.0) blev brugt her. - Analyser forskellene mellem grupper ved hjælp af envejsanalyse af varians (ANOVA).
- Hent streggrafik ved hjælp af passende software.
BEMÆRK: GraphPad Prism 8 blev brugt her. - Vurder kapselpatologi ved hjælp af H&E og Masson-farvning efter måling.
6. Forberedelse af afsnit
- Efter evaluering af glenohumeral ROM fikseres hele prøver i 4% PFA i 3 dage efterfulgt af afkalkning i EDTA (pH 7,2) opløsning i yderligere 2 måneder.
- Efter dehydrering skæres indlejrede vævsblokke, der indeholder prøverne, i skiver på 5 μm16.
- Tør skiven ved 65 °C i 60 min.
- Afvoks skiven.
- Læg skiven i blød i xylen I, xylen II og xylen III i 7 minutter, efterfulgt af en faldende ethanolserie (vandfri ethanol, 5 min; 95% ethanol, 2 min; 80% ethanol, 2 min og 70% ethanol, 2 min) og til sidst i ultrarent vand i 2 min.
7. H&E-farvning
- Plet sektionerne med hæmatoxylin i 5 minutter, skyl med 1% saltsyreethanol i 3 s, og vask med rindende vand i 5 min.
- Plet sektionen med eosin i 3 min og vask med ledningsvand.
- Sug sektionen i blød i en ethanolserie (95% ethanol I, 3 s; 95% ethanol II, 3 s; vandfri ethanol I, 3 s og vandfri ethanol II, 1 min) og nedsænk derefter i en xylenserie (xylen I, 1 min; xylen II, 1 min).
- Anbring en dråbe neutralt tyggegummiforseglingsmiddel på hver prøve. Hver prøve forsegles med et dækglas.
- Saml billeder ved hjælp af et omvendt fluorescensmikroskop (skalabjælke = 100 μm).
8. Masson-farvning
- Brug en immunhistokemisk pen til at tegne en cirkel rundt om sektionerne og inkuber derefter sektionerne i Bouins opløsning i 2 timer ved 37 °C til mordant. Vask derefter sektionerne med vand, indtil den gule farve forsvinder.
- Behandl prøverne med lapis lazuli blåt farvestof i 3 minutter og vask dem derefter med destilleret vand.
- Efter farvning af sektionerne med hæmatoxylin (Mayer) i 2 minutter behandles sektionerne i 3 s i den sure ethanoldifferentieringsopløsning. Vask derefter sektionerne i rindende vand i 10 min.
- Plet sektionerne med ponceau magenta farvestofopløsning i 10 minutter og vask dem derefter med vand.
- Nedsænk sektionerne i phosphomolybdicsyreopløsningen i 10 min.
- Tilsæt anilinblå farvningsopløsning til sektionerne i 5 min, og vask dem derefter med en svag syrearbejdsopløsning i 2 min.
- Dehydrer og gør sektionerne gennemsigtige som beskrevet i trin 7.3.
- Placer en dråbe neutralt tyggegummiforseglingsmiddel på hver sektion og dæk det med et dækglas. Lad sektionerne tørre i en stinkhætte.
- Indsaml billeder som beskrevet i trin 7.5.
Representative Results
Den fysiske aktivitet hos rotter blev observeret for at evaluere FS-modellens succes eller fiasko. En tidligere undersøgelse viste, at støbt immobilisering signifikant reducerede den tilbagelagte afstand og ganghastighed sammenlignet med normale rotter17. En anden undersøgelse foreslog, at FS ikke påvirkede den tilbagelagte afstand, og haltning var det mest almindelige symptom13. Denne undersøgelse viste stivhed i højre skulderled, sammentrækning af højre overekstremitet, muskelatrofi og haltende hos rotter efter modellering. Disse læsioner i MT- og MO-grupperne blev løst fuldstændigt efter 2 ugers intervention. Men der var ingen signifikant ændring i M-gruppen.
Det primære kriterium for evaluering af effektiviteten af Tuina i FS er måling af glenohumeral ROM18. Vi observerede, at gennemsnitsværdierne for glenohumeral ROM var 149,3° ± 5,9° i C-gruppen, 111,1° ± 3,9° i M-gruppen, 128,5° ± 2,8° i MT-gruppen og 119,56° ± 2,9° i MO-gruppen. Som vist i figur 7 var glenohumeral ROM hos rotter i M-gruppen signifikant lavere end i C-gruppen (P < 0,0001). Desuden var ROM'en i MT-gruppen og MO-gruppen signifikant højere end i M-gruppen (P < 0,05, P < 0,0001). ROM'en i MO-gruppen var imidlertid signifikant lavere end i MT-gruppen (P < 0,0001). Dette fund tyder på, at Tuina kan forbedre skulderleddets funktion betydeligt hos FS-rotter.
Derudover kan H&E-farvning og Masson-farvning yderligere demonstrere virkningerne af Tuina til at bevare strukturen og reducere fibrose i kapsel. For at lette observationen blev kapslen i glenohumeralleddet anvendt til histologiske fund. Skulderledskapslen består af synoviale og fibrøse lag19. H &E-farvning afslørede synoviocytproliferation, flade synoviale folder, erythrocytstasis og vaskulær proliferation i M-gruppen, som er typiske træk ved FS (figur 8A, B). Disse træk faldt til en vis grad efter Tuina og oral dexamethasonbehandling (figur 8C, D). Sammenlignet med MT-gruppen viste MO-gruppen også meget synovialceller. Massonfarvning viste arrangementet af fiberbundter i hver gruppe (gule pile). Kapslen består af et løst netværk af retikulære fibre med fiberbundter arrangeret i en pæn retning (figur 8E). I M-gruppen blev fiberbundterne arrangeret uordnet, hvilket indikerer kapselfibrose (figur 8F). Kapslerne fra rotter i MT-gruppen viste, at fiberbundterne er pænt og tydeligt stratificeret, men forbliver lidt uordnede i MO-gruppen (figur 8G, H).
Figur 1: Protokol til etablering af FS-modellen og Tuina-intervention. Rotterne var på adaptiv fodring i 7 dage, FS-modeletablering i 21 dage, og Tuina-terapi blev udført dagligt i 14 dage. På dag 36 blev alle rotter ofret. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 2: Støbt immobilisering til etablering af en rottemodel af FS. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 3: Kvantitativ kontrol med manipulation . (A) Intelligent massageteknik parameterbestemmelsessystem. (B) Tre kræfter kan måles som parallel kraft langs X-retningen, langsgående kraft langs Y-retningen og lodret kraft langs Z-retningen. C) Styrken af rotationsæltningsmetoden. Den røde kurve repræsenterer den stabiliserede lodrette kraft (0,5 kg). Den orange kurve repræsenterer den regelmæssige parallelle kraft. Den hvide kurve repræsenterer den regelmæssige langsgående kraft. D) Styrken af punktpresningsmetoden. Den røde kurve repræsenterer den lodrette kraft (0,5 kg). Orange og hvide kurver repræsenterer ikke-parallelle og langsgående kræfter. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 4: Manipulation anvendt i Tuina-terapi. (A-C) Ælt muskler i højre skuldre, forben og ryg. (D-G) Tryk på LI15, SI11, HT01 og LI11. (H-K) Stræk forbenet i adduktion, bortførelse, forreste forlængelse og bageste forlængelsespositioner. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 5: Anatomiske positioner af LI15, SI11, HT01 og LI11 hos rotter. ● Sideflade, ○ Medial overflade. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 6: Måling af glenohumeral ROM. En tynd tråd fastgøres til en injektionsnål, indsættes i humeralakslen og trækkes i den anden ende med en kraft på 5 g for at gøre den parallel med humerakslen. Vinklen mellem den nederste kant af skulderbladet og humerakslen måles som glenohumeral ROM. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 7: Glenohumeral ROM på tværs af tre grupper af rotter. Værdier er midler ± S.D., n = 5. Signifikante forskelle er angivet ved envejs ANOVA (a P < 0,001 og bP < 0,0001). Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 8: Histologiske fund af skulderkapslen. (A,E) Kontrolgruppen indeholder en normal kapselstruktur (H&E og Masson-farvning). (B,F) FS-modelgruppen illustrerer ændringer i kapslens struktur som følger: flade synoviale folder, kapselfibrose og forstyrrede fiberbundter (H&E og Masson-farvning). (C,G). FS-modellen kombineret med Tuina-gruppen illustrerer, at kapslens struktur er tæt på normal, og fibrose er ikke indlysende (H&E og Masson-farvning). (D,H) FS-modellen kombineret med oral dexamethason viser, at kapslens struktur er tæt på normal, og fibrose er indlysende (H&E og Masson-farvning). Skalastang = 100 μm. HH: hovedet af humerus; sort pil: synoviale folder; rød pil: erytrocytstasis og vaskulær proliferation; Gul pil: fiberbundter. Klik her for at se en større version af denne figur.
Discussion
Det første kritiske trin er modelvalg. På grund af vanskelighederne med at implementere den primære FS-model bruges støbt immobilisering og kirurgisk intern fiksering ofte til at etablere FS-rottemodeller 9,12. Den mest alvorlige begrænsning af skuldermobilitet og fibrose af kapslen blev observeret i FS-modellen etableret ved støbt immobilisering i 3 uger12,20. I denne undersøgelse var succesraterne for FS-modellen fremragende med 100% succes.
Det andet kritiske trin er de manipulationer, der anvendes i denne protokol. Tre manipulationer (æltning, presning og strækning) blev anvendt i denne undersøgelse. Bløddelsæltemanipulationen blev påført skulder, skulderblad og overarm for at slappe af musklerne. Pressemanipulation blev udført ved at anvende tryk på akupunkter som LI15, SI11, HT01 og LI11, som oftest anvendes i klinisk praksis til FS 5,21. LI15, SI11 og HT01 er placeret i positioner omkring skulderkapslen og kan være effektive til at forbedre ROM og skulderfunktion22. LI11 bruges ofte til motorisk svækkelse i øvre ekstremiteter og er placeret i samme meridian som LI15. Denne akupunktmatchningsmetode hjælper med at forbedre effektiviteten af LI1523. Efter fuld afslapning blev strækteknikker brugt til at genoprette funktionelle aktiviteter.
Det mulige problem i denne protokol er, at rotter udviser intens modstand under Tuina, hvilket kan være forårsaget af frygt snarere end at overskride rotternes tolerance. På dette tidspunkt skal manipulationerne stoppes, indtil rotterne roer sig ned (strøg i 10 s beroliger rotterne). Derudover bør omfanget af strækning justeres i henhold til rotternes symptomer. Indledningsvis var begrænsningen af skulderleddet indlysende, og strækningsamplituden var lille. Sammen med interventionen blev rotternes skulderledsfunktion gradvist genoprettet, og strækningens amplitude steg gradvist. Standarden er, at rotter kan acceptere strækningsmetoden uden modstand. Endelig har rotter en vis grad af aggression, og Tuina kræver langvarig kontakt med rotter, så det er vigtigt at bære personlige værnemidler.
Den kvantitative kontrol med manipulation er den sværeste i Tuina-eksperimenter. Mens en massagemanipulationssimulator kan bruges til at kontrollere styrken og hyppigheden af en enkelt manipulation, er denne metode begrænset, når flere manipulationer og behandlingssteder er involveret24,25. I klinisk praksis udføres Tuina typisk direkte af praktiserende læger, og i denne undersøgelse var det vanskeligt at gribe ind med medicinsk udstyr. For at kontrollere stimuleringen kan det intelligente massageteknikparameterbestemmelsessystem bruges til at standardisere træningen af Tuina. Efter træning kan efterforskeren anvende den samme kraft på hver rotte i et omfang. Den største begrænsning ved denne protokol er, at manipulationer ikke kan kontrolleres fuldstændigt.
TCM Tuina-terapi har en rig brugshistorie i hele Kina, med forskellige læger på hospitaler, der bruger forskellige manipulations- og behandlingsstedkombinationer. Derfor er det vigtigt at etablere replikerbare og effektive protokoller for både dyreforsøg og kliniske undersøgelser. I denne undersøgelse var de anvendte manipulationer og akupunkter baseret på en tidligere undersøgelse foretaget af vores team, der kombinerede vores kliniske erfaring med egenskaberne ved FS-dyremodel21. Denne undersøgelse viste effektiviteten af den udviklede Tuina-protokol til forbedring af skulderleddets funktion og reduktion af kapselfibrose hos FS-rotter. Disse resultater danner grundlag for yderligere undersøgelser af mekanismerne bag Tuina-behandling. Desuden kan protokollen være nyttig for forskere, der er interesserede i at udforske effektiviteten af alternative medicinske behandlinger for FS.
En tidligere undersøgelse viste, at mekanismen for Tuina-intervention på fibrose kan være relateret til nedregulering af TGF-β og CTGF, mens balancen mellem MMP-1 / TIMP-1 reguleres og derved lindrer produktionen af ekstracellulær matrix (ECM)26. Virkningen af Tuina på fibrose af skulderkapslen kan opnås ved regulering af forskellige mekanismer. Der er imidlertid behov for yderligere forskning for fuldt ud at forstå de mekanismer, der er involveret i denne forbedring.
Disclosures
Forfatterne har intet at afsløre.
Acknowledgments
Dette arbejde blev støttet af 2020 Science and Technology Development Plan i Jinan City (bevillingsnummer 202019059), Traditional Chinese Medicine Science and Technology Project i Shandong-provinsen (bevillingsnummer 2021Q080) og Qilu School of Traditional Chinese Medicine Inherit Project (bevillingsnummer [2022]93).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 4% paraformaldehyde | Solarbio | P1110 | |
| Embedding machine | Changzhou Paisijie Medical Equipment Co., Ltd | BM450A | |
| Ethylene Diamine Tetraacetic Acid (EDTA) | Solarbio | E1171 | |
| Hematoxylin eosin (HE) staining kit | Sparkjade | EE0012 | |
| Intelligent-massage technique parameter determination system | Shanghai Dukang Intrument Equipment Co. Ltd | ZTC- |
|
| Microtome | Leica | 531CM-Y43 | |
Modified Masson Trichrome Staining Solution |
Shanghai yuanye Bio-Technology Co., Ltd | R20381-8 | Bouin 50 mL; lapis lazuli blue dye 50 mL; Hematoxylin (Mayer) 50 mL; acidic ethanol differentiation solution 50 mL; ponceau magenta dye solution 50 mL; phosphomolybdic acid solution 50 mL; aniline blue staining solution 50 mL; weak acid 50 mL |
| Tribromoethanol | Macklin | T903147-5 |
References
- Li, W., LU, N. Z., Xu, H. L., Wang, H. F., Huang, J. Case control study of risk factors for frozen shoulder in China. International Journal of Rheumatic Diseases. 18 (5), 508-513 (2015).
- Degreef, I., Steeno, P., De Smet, L. A survey of clinical manifestations and risk factors in women with Dupuytren's disease. Acta Orthopaedica Belgica. 74 (4), 456-460 (2008).
- Tighe, C. B., Oakley, W. S. Jr. The prevalence of a diabetic condition and adhesive capsulitis of the shoulder. Southern Medical Journal. 101 (6), 591-595 (2008).
- Cho, C. H., Bae, K. C., Kim, D. H. Treatment strategy for frozen shoulder. Clinics in Orthopedic Surgery. 11 (3), 249-257 (2019).
- Liu, M., et al. Effects of massage and acupuncture on the range of motion and daily living ability of patients with frozen shoulder complicated with cervical spondylosis. American Journal of Translational Research. 13 (4), 2804-2812 (2021).
- Ai, J., Dong, Y. K., Tian, Q. D., Wang, C. L., Fang, M. Tuina for periarthritis of shoulder: A systematic review protocol. Medicine. 99 (11), e19332 (2020).
- Norlin, R., Hoe-Hansen, C., Oquist, G., Hildebrand, C. Shoulder region of the rat: anatomy and fiber composition of some suprascapular nerve branches. The Anatomical Record. 239 (3), 332-342 (1994).
- Okajima, S. M., et al. Rat model of adhesive capsulitis of the shoulder. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (139), 58335 (2018).
- Zhao, H. K., et al. Tetrandrine inhibits the occurrence and development of frozen shoulder by inhibiting inflammation, angiogenesis, and fibrosis. Biomedicine & Pharmacotherapy. 140, 111700 (2021).
- nar, B. M., Battal, V. E., Bal, N., Güler, ÜÖ, Beyaz, S. Comparison of efficacy of oral versus intra-articular corticosteroid application in the treatment of frozen shoulder: An experimental study in rats. Acta Orthopaedica et Traumatologica Turcica. 56 (1), 64-70 (2022).
- Dias, Q. M., Rossaneis, A. C., Fais, R. S., Prado, W. A. An improved experimental model for peripheral neuropathy in rats. Brazilian Journal of Medical and Biological Research. 46 (3), 253-256 (2013).
- Kim, D. H., et al. Characterization of a frozen shoulder model using immobilization in rats. Journal of Orthopaedic Surgery and Research. 11 (1), 160 (2016).
- Feusi, O., et al. Platelet-rich plasma as a potential prophylactic measure against frozen shoulder in an in vivo shoulder contracture model. Archives of Orthopaedic and Trauma Surgery. 142 (3), 363-372 (2022).
- Yin, C. S., et al. A proposed transpositional acupoint system in a mouse and rat model. Research in Veterinary Science. 84 (2), 159-165 (2008).
- Guo, X. R., et al. Study on the regulatory mechanism of electroacupuncture based on thyroid pathway for mammary gland hyperplasia rats. Zhongguo Zhen Jiu. 38 (8), 857-863 (2018).
- Feldman, A. T., Wolfe, D. Tissue processing and hematoxylin and eosin staining. Methods in Molecular Biology. 1180, 31-43 (2014).
- Taguchi, H., et al. A rat model of frozen shoulder demonstrating the effect of transcatheter arterial embolization on angiography, histopathology, and physical activity. Journal of Vascular and Interventional Radiology: JVIR. 32 (3), 376-383 (2021).
- Oki, S., et al. Generation and characterization of a novel shoulder contracture mouse model. Journal of Orthopaedic Research. 33 (11), 1732-1738 (2015).
- Kubo, H., et al. Histologic examination of the shoulder capsule shows new layer of elastic fibres between synovial and fibrous membrane. Journal of Orthopaedics. 22, 251-255 (2020).
- Cho, C. H., Lho, Y. M., Hwang, I., Kim, D. H. Role of matrix metalloproteinases 2 and 9 in the development of frozen shoulder: human data and experimental analysis in a rat contracture model. Journal of Shoulder and Elbow Surgery. 28 (7), 1265-1272 (2019).
- Wang, J. M., et al. Efficacy and safety of Tuina and intermediate frequency electrotherapy for frozen shoulder: MRI-based observation evidence. American Journal of Translation Research. 15 (3), 1766-1778 (2023).
- Ben-Arie, E., et al. The effectiveness of acupuncture in the treatment of frozen shoulder: A systematic review and meta-analysis. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2020, 9790470 (2020).
- Zou, F., et al. The impact of electroacupuncture at hegu, shousanli, and quchi based on the theory "Treating flaccid paralysis by Yangming alone" on stroke patients' EEG: A pilot study. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2020, 8839491 (2020).
- Lv, T. T., et al. Using RNA-Seq to explore the repair mechanism of the three methods and three-acupoint technique on DRGs in sciatic nerve injured rats. Pain research & Management. 2020, 7531409 (2020).
- Niu, F., et al. Spinal tuina improves cognitive impairment in cerebral palsy rats through inhibiting pyroptosis induced by NLRP3 and Caspase-1. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2021, 1028909 (2021).
- Na, Z., et al. The combination of electroacupuncture and massage therapy alleviates myofibroblast transdifferentiation and extracellular matrix production in blunt trauma-induced skeletal muscle fibrosis. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2021, 5543468 (2021).
