Summary
यह अध्ययन एक चूहे के मॉडल में स्थापित जमे हुए कंधे के इलाज के लिए एक कुशल और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य ट्यूना प्रोटोकॉल विकसित करता है। यह दृष्टिकोण जमे हुए कंधों के लिए ट्यूना थेरेपी उपचार विधि का अध्ययन करने में मदद करेगा।
Abstract
जमे हुए कंधे (एफएस) एक सामान्य स्थिति है जिसमें कोई परिभाषित इष्टतम चिकित्सा नहीं है। चीनी अस्पतालों में एफएस रोगियों के इलाज के लिए उपयोग की जाने वाली एक पारंपरिक चीनी चिकित्सा (टीसीएम) तकनीक तुइना थेरेपी ने उत्कृष्ट परिणामों का प्रदर्शन किया है, लेकिन इसके तंत्र को पूरी तरह से समझा नहीं गया है। पिछले अध्ययन के आधार पर, इस काम का उद्देश्य एफएस चूहे के मॉडल के लिए एक ट्यूना प्रोटोकॉल विकसित करना था। हमने यादृच्छिक रूप से 20 एसडी चूहों को नियंत्रण (सी; एन = 5), एफएस मॉडल (एम; एन = 5), एफएस मॉडल ट्यूना उपचार (एमटी; एन = 5), और एफएस मॉडल मौखिक उपचार (एमओ; एन = 5) समूहों में विभाजित किया। इस अध्ययन ने एफएस चूहा मॉडल स्थापित करने के लिए कास्ट स्थिरीकरण विधि का उपयोग किया। गति की ग्लेनोह्यूमरल रेंज (ROM) पर ट्यूना और मौखिक डेक्सामेथासोन के प्रभाव का मूल्यांकन किया गया था, और हिस्टोलॉजिकल निष्कर्षों का मूल्यांकन किया गया था। हमारे अध्ययन से पता चला है कि ट्यूना और मौखिक डेक्सामेथासोन कंधे के सक्रिय रोम में सुधार करने और कैप्सूल की संरचना को संरक्षित करने में सक्षम थे, ट्यूना थेरेपी मौखिक डेक्सामेथासोन की तुलना में अधिक प्रभावी साबित हुई। अंत में, इस अध्ययन में स्थापित तुइना प्रोटोकॉल एफएस के लिए अत्यधिक प्रभावी था।
Introduction
जमे हुए कंधे (एफएस), जिसे कंधे के चिपकने वाला कैप्सुलिटिस भी कहा जाता है, एक आत्म-सीमित बीमारी है जो कंधे के दर्द और गतिशीलता की कमी की विशेषता है। यह आम तौर पर 50 वर्ष की औसत आयु के साथ 30 से 70 वर्ष की आयु के बीच के लोगों को प्रभावित करता है, और चीनी आबादी1 में लगभग 5% का प्रसार है। पुरुषों की तुलना में महिलाओं में एफएस की 1.6 गुना अधिक घटनाएं होने की सूचना मिलीहै। एफएस का प्रसार मधुमेह, ग्लूकोज और लिपिड चयापचय विकारों या अन्य संबंधित बीमारियों वाले लोगों में अधिक है, जो 10% और 36% 2,3 के बीच है। एफएस के लिए वर्तमान नैदानिक उपचार में फिजियोथेरेपी, स्टेरॉयड दवाएं और सर्जिकल उपचारशामिल हैं।
ट्यूना, एक पारंपरिक चीनी चिकित्सा (टीसीएम) चिकित्सा, एफएस रोगियों में कंधे के दर्द को प्रभावी ढंग से दूर करने के लिए दिखाया गया है, जिससे उनके जीवन की गुणवत्तामें सुधार हुआ है। हालांकि, इस उपचार के अंतर्निहित तंत्र को अच्छी तरह से समझा नहीं गया है। इस प्रकार, एफएस के इलाज में ट्यूना के प्रभाव और तंत्र का अध्ययन करने के लिए पशु मॉडल का उपयोग करना महत्वपूर्ण है।
चूहे के कंधे के जोड़ में मानव कंधे के समान एक जटिल संरचना होती है और अक्सर एफएस7 के यांत्रिक अध्ययन में उपयोग किया जाता है। एफएस चूहा मॉडल को ग्लेनोह्यूमरल रोम और कैप्सूल फाइब्रोसिस8 में गिरावट की विशेषता है। इसके अलावा, यह मॉडल कंधे के कैप्सूल के अवलोकन के लिए अनुमति देता हैऔर चोट की मरम्मत करते समय पैथोलॉजिकल अनुसंधान को सक्षम बनाता है। इसके अलावा, मौखिक कॉर्टिकोस्टेरॉइड ्स का उपयोग अक्सर एफएस उपचार अनुसंधान10 में नियंत्रण समूह के रूप में किया जाता है। इस अध्ययन का उद्देश्य एफएस चूहे मॉडल के लिए एक ट्यूना प्रोटोकॉल विकसित करना है और ट्यूना थेरेपी और मौखिक डेक्सामेथासोन की प्रभावकारिता की तुलना करके ट्यूना अनुसंधान में पशु प्रयोगों के संचालन की व्यवहार्यता को प्रदर्शित करता है।
Protocol
इस अध्ययन को शेडोंग यूनिवर्सिटी ऑफ ट्रेडिशनल चाइनीज मेडिसिन (संख्या: AWE-2022-023) के संबद्ध अस्पताल की आचार समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था।
1. प्रायोगिक जानवर
- बीस नर स्प्राग-डॉवले (एसडी) चूहों (7 सप्ताह पुराने, 250-280 ग्राम) को मानक परिस्थितियों (कमरे का तापमान [आरटी] 20-24 डिग्री सेल्सियस, आर्द्रता 40% -60%, और 12 घंटे / 12 घंटे प्रकाश / अंधेरे चक्र) में रखा गया था।
2. समूहीकरण विधि
- एसडी चूहों को नियंत्रण समूह (सी), एफएस मॉडल नियंत्रण समूह (एम), एफएस मॉडल ट्यूना उपचार समूह (एमटी), और एफएस मॉडल मौखिक उपचार समूह (एमओ) में समूहीकृत करें, जिनमें से प्रत्येक में 5 चूहे शामिल हैं। प्रति पिंजरे (एक ही समूह) में 5 चूहे रखें।
- 7 दिनों के अनुकूलन के बाद, अगले खंड में वर्णित एफएस की नकल करने के लिए 3 सप्ताह के लिए प्लास्टर कास्ट स्थिरीकरण का उपयोग करके एम, एमटी और एमओ समूहों में चूहों के एक कंधे को गतिहीन करें।
- 2 सप्ताह के लिए एमटी समूह में चूहों को ट्यूना थेरेपी का प्रशासन करें, जैसा कि धारा 4 (चित्रा 1) में वर्णित है।
- वयस्क खुराक (0.75 मिलीग्राम / दिन) और मानव शरीर की सतह क्षेत्र (0.018) के लिए चूहे के अनुपात के आधार पर चूहों के प्रत्येक किलोग्राम (0.0675 मिलीग्राम / दिन) के लिए डेक्सामेथासोन की आवश्यक खुराक की गणना करें।
- 2 सप्ताह के लिए सुबह 7:00 बजे एमओ समूह में चूहों को दैनिक इंट्रागैस्ट्रिक डेक्सामेथासोन समाधान 0.067 मिलीग्राम / किग्रा / दिन पर प्रशासित करें।
नोट: इस अध्ययन में Tuina प्रोटोकॉल के प्रभाव की पुष्टि करने के लिए इस समूहीकरण विधि का उपयोग करें। विभिन्न अध्ययनों में प्रयोगात्मक उद्देश्यों के अनुसार समूहीकरण विधि का प्रदर्शन करें।
3. एफएस मॉडल का विकास
- ट्राइब्रोमोएथेनॉल (250 मिलीग्राम / किग्रा, इंट्रापरिटोनियल इंजेक्शन द्वारा) का उपयोग करके चूहों को एनेस्थेटाइज करें।
नोट: संस्थान की नैतिकता समिति की आवश्यकताओं के अनुसार, ट्राइबोमोएथेनॉल (10 ग्राम) और टर्ट-एमिल अल्कोहल (10 एमएल) से बना एक स्टॉक समाधान 4 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया गया था। उपयोग करने से पहले, इसे आसुत जल के साथ 2% तक पतला किया गया था। - चूहों के दाहिने कंधे और छाती पर प्लास्टर से लथपथ पट्टियां लागू करें, दाहिने अग्रभाग को 3 सप्ताह के लिए कंधे के जोड़ के आंतरिक रोटेशन के 90 डिग्री पर रखें (चित्र 2)12)।
नोट: यह सुनिश्चित करने के लिए चूहों की निगरानी करें कि वे सामान्य शारीरिक गतिविधियों जैसे चलना, खाना और पीना कर सकते हैं। यदि चूहे सामान्य शारीरिक गतिविधियां नहीं कर सकते हैं तो प्लास्टर पट्टी को फिर से ठीक करें। - दाहिने कंधे के जोड़ में कठोरता, दाहिने ऊपरी अंग के संकुचन, मांसपेशियों के शोष और चूहों में लंगड़ाने जैसे लक्षणों के विकास को देखकर एफएस मॉडल की सफलस्थापना की पुष्टि करें।
4. तुइना विधि
नोट: प्रक्रिया के दौरान, अन्वेषक को व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण पहनना चाहिए। केवल एक पेशेवर ट्यूना डॉक्टर को सभी जोड़तोड़ करना होगा (चित्रा 3, चित्रा 4, और चित्रा 5)।
- इंटेलिजेंट-मालिश तकनीक पैरामीटर निर्धारण प्रणाली द्वारा प्रशिक्षित किया जाता है, जिसमें एक मेकेनोसेप्टर और एक कंप्यूटर (चित्रा 3 ए) शामिल है।
- सॉफ्टवेयर के माध्यम से प्रदर्शित तीन दिशाओं में मेकेनोसेप्टर और बल मापदंडों पर जोड़तोड़ करें (चित्रा 3 बी)।
- 0.5 किलोग्राम की ताकत और 100-120 बार/मिनट की आवृत्ति पर रोटेटरी आंदोलन में रोटेरी-गूंधने की विधि को करने के लिए अंगूठे की उंगली का उपयोग करें (चित्रा 3 सी)।
- 0.5 किलोग्राम (चित्रा 3 डी) की ताकत पर बिंदु-दबाने की विधि करने के लिए अंगूठे की उंगलियों का उपयोग करें।
- चरण 4.1.2 और 4.1.3 में उल्लिखित यांत्रिक प्रदर्शन को 1 मिनट के लिए बनाए रखकर चूहों पर ट्यूना करें।
- चूहे को तब तक पकड़ो जब तक कि वह शांत न हो जाए (~ 2 मिनट)। फिर, हेरफेर करें। चूहे को पार्श्व रिकंबेंट स्थिति में रखें, लेकिन विभिन्न हेरफेर विधियों के आधार पर स्थिति बदल सकती है।
- चूहे और फ्लेक्स के दाहिने अग्रभाग को दबाने के लिए दाईं तर्जनी और मध्य उंगली का उपयोग करें और चूहे के कंधे के जोड़, कोहनी के जोड़ और ह्यूमरस की स्थिति निर्धारित करने के लिए इसे कई बार बढ़ाएं।
- चूहे के दाहिने कंधे, अग्रभाग और पीठ को अंगूठे के गूदे के साथ 0.5 किलोग्राम की ताकत और 3 मिनट के लिए 100-120 बार/मिनट की आवृत्ति से घड़ी के अनुसार घुमाकर गूंधें (चित्र 4ए-सी)।
- पार्श्व रिकंबेंट स्थिति में फोरलिम्ब मांसपेशियों में हेरफेर करें।
- प्रवण स्थिति में कंधे और पीठ की मांसपेशियों में हेरफेर करें।
- एक्यूपॉइंट एलआई 15 (जियानयू), एसआई 11 (तियानज़ोंग), एचटी 01 (जिक्वान, ) और एलआई 11 (क्यूची) को अंगूठे की उंगलियों से 0.5 किलोग्राम (चित्रा 4 डी-जी) की ताकत पर प्रति एक्यूपॉइंट 30 बार दबाएं।
- प्रत्येक एक्यूपॉइंट के स्थान को परिभाषित करने के लिए चूहे-एक्यूपॉइंट एटलस का उपयोग करें (चित्रा 5)14,15।
- प्रवण स्थिति में अवसाद पूर्वकाल-एक्रोमियल छोर से हीन में स्थित एलआई 15 दबाएं।
- एसआई 11 दबाएं, जो अवसाद में स्थित है और स्कैपुलर रीढ़ के मध्य बिंदु पर इन्फ्रास्पिनेटस फोसा को प्रवण स्थिति में है।
- एक्सिला केंद्र में स्थित एचटी 01 को लापरवाह स्थिति में दबाएं।
- पार्श्व रिकंबेंट स्थिति में क्यूबिटल क्रीज के पार्श्व छोर पर एक्सटेंसर कार्पी रेडियल्स के लिए अवसाद में स्थित एलआई 11 दबाएं।
- बाएं अंगूठे और मध्य उंगली के साथ कंधे के जोड़ को पकड़ें, और 10 सेकंड के लिए जोड़, अपहरण, पूर्ववर्ती विस्तार और पीछे के विस्तार की स्थिति में अग्रभाग को फैलाएं (चित्रा 4 एच-के)।
नोट: इस स्ट्रेचिंग विधि को चूहों में प्रतिरोध के बिना किया जाना चाहिए। - यदि चूहा उत्तेजित हो जाता है तो ट्यूना प्रक्रिया को रोक दें। चूहे को शांत करने के लिए उसे 10 सेकंड के लिए स्ट्रोक करें, और फिर परीक्षण के साथ आगे बढ़ें।
- 2 सप्ताह के लिए दैनिक प्रक्रिया करें।
5. ग्लेनोह्यूमरल रोम का माप
नोट: संयुक्त कैप्सूल ऊतक के अध: पतन को रोकने के लिए जितनी जल्दी हो सके माप प्रक्रिया को पूरा करना महत्वपूर्ण है।
- ट्राइब्रोमोएथेनॉल (इंट्रापरिटोनियल इंजेक्शन द्वारा 3 x प्रारंभिक खुराक) की अत्यधिक खुराक के साथ चूहे की बलि देने के बाद स्कैपुला और समीपस्थ दो-तिहाई ह्यूमरस को हटा दें, जिससे स्कैपुला के निचले किनारे को उजागर किया जा सके।
- ह्यूमरल सिर में ह्यूमरल शाफ्ट के साथ एक इंजेक्शन सुई (1.2 सेमी x 0.45 मिमी) डालें।
- एक बाँझ सर्जिकल शीट के साथ लिपटे प्लास्टिक फोम पर स्कैपुला के ऊपरी और निचले कोनों में दो इंजेक्शन सुइयों को लंबवत रूप से डालें।
- ह्यूमरल शाफ्ट पर इंजेक्शन सुई में एक पतला धागा संलग्न करें और इसे ह्यूमरल शाफ्ट के समानांतर बनाने के लिए 5 ग्राम बल के साथ दूसरे छोर पर खींचें। स्कैपुला और ह्यूमरल शाफ्ट के निचले किनारे के बीच के कोण को मापें (चित्रा 6)।
नोट: विश्वसनीय परिणाम सुनिश्चित करने के लिए, एक अलग अन्वेषक माप का संचालन करें। - सांख्यिकीय विश्लेषण सॉफ्टवेयर अनुप्रयोग का उपयोग करके ±मानक विचलन (एसडी) के रूप में डेटा रिपोर्ट करें।
नोट: एसपीएसएस सॉफ्टवेयर (एसपीएसएस, संस्करण 25.0) यहां इस्तेमाल किया गया था। - विचरण (एनोवा) के एक-तरफ़ा विश्लेषण का उपयोग करके समूहों के बीच अंतर का विश्लेषण करें।
- उपयुक्त सॉफ़्टवेयर का उपयोग कर बार ग्राफ़िक्स प्राप्त करें.
नोट: ग्राफपैड प्रिज्म 8 का उपयोग यहां किया गया था। - माप के बाद एच एंड ई और मैसन स्टेनिंग का उपयोग करके कैप्सूल पैथोलॉजी का आकलन करें।
6. अनुभाग की तैयारी
- ग्लेनोह्यूमरल रोम का मूल्यांकन करने के बाद, 3 दिनों के लिए 4% पीएफए में पूरे नमूने ठीक करें, इसके बाद अतिरिक्त 2 महीने के लिए ईडीटीए (पीएच 7.2) समाधान में डीकैल्सीफिकेशन करें।
- निर्जलीकरण के बाद, नमूने वाले एम्बेडेड ऊतक ब्लॉकों को 5 μm स्लाइस16 में स्लाइस करें।
- 60 मिनट के लिए 65 डिग्री सेल्सियस पर स्लाइस को सुखाएं।
- स्लाइस को धो लें।
- स्लाइस को जाइलीन I, जाइलीन II, और ज़ाइलीन III में 7 मिनट के लिए भिगोदें, इसके बाद एक अवरोही इथेनॉल श्रृंखला (निर्जल इथेनॉल, 5 मिनट; 95% इथेनॉल, 2 मिनट; 80% इथेनॉल, 2 मिनट, और 70% इथेनॉल, 2 मिनट), और अंत में 2 मिनट के लिए अल्ट्राप्योर पानी में।
7. एच एंड ई धुंधला होना
- 5 मिनट के लिए हेमटोक्सीलिन का उपयोग करके अनुभागों को दाग दें, 3 सेकंड के लिए 1% हाइड्रोक्लोरिक एसिड इथेनॉल से कुल्ला करें, और 5 मिनट के लिए बहते पानी से धो लें।
- 3 मिनट के लिए ईओसिन के साथ अनुभाग को दाग दें और नल के पानी से धो लें।
- अनुभाग को इथेनॉल श्रृंखला (95% इथेनॉल I, 3 s; 95% इथेनॉल II, 3 s; निर्जल इथेनॉल I, 3 s, और निर्जल इथेनॉल II, 1 मिनट) में भिगोएं और फिर एक जाइलीन श्रृंखला (जाइलीन I, 1 मिनट; जाइलीन II, 1 मिनट) में डुबोएं।
- प्रत्येक नमूने पर तटस्थ गम सीलेंट की एक बूंद रखें। प्रत्येक नमूने को कवर ग्लास से सील करें।
- एक उल्टे प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप (स्केल बार = 100 μm) का उपयोग करके छवियों को एकत्र करें।
8. मैसन धुंधला
- एक इम्यूनोहिस्टोकेमिकल पेन का उपयोग करके, वर्गों के चारों ओर एक सर्कल खींचें और फिर बोइन के घोल में वर्गों को 37 डिग्री सेल्सियस पर 2 घंटे के लिए इनक्यूबेट करें। इसके बाद, अनुभागों को पानी से धो लें जब तक कि पीला रंग गायब न हो जाए।
- 3 मिनट के लिए लापीस लाजुली ब्लू डाई के साथ नमूनों का इलाज करें और फिर उन्हें आसुत जल से धो लें।
- 2 मिनट के लिए हेमटोक्सीलिन (मेयर) के साथ वर्गों को धुंधला करने के बाद, अम्लीय इथेनॉल भेदभाव समाधान में 3 सेकंड के लिए अनुभागों का इलाज करें। फिर, 10 मिनट के लिए बहते पानी में अनुभागों को धो लें।
- 10 मिनट के लिए पोन्सेउ मैजेंटा डाई के घोल के साथ अनुभागों को दाग दें और बाद में उन्हें पानी से धो लें।
- 10 मिनट के लिए फॉस्फोमोलिब्डिक एसिड समाधान में अनुभागों को डुबोएं।
- 5 मिनट के लिए अनुभागों में एनिलिन ब्लू स्टेनिंग घोल जोड़ें, और फिर उन्हें 2 मिनट के लिए कमजोर एसिड वर्किंग घोल से धो लें।
- चरण 7.3 में वर्णित अनुभागों को निर्जलित और पारदर्शी बनाएं।
- प्रत्येक खंड पर तटस्थ गम सीलिंग एजेंट की एक बूंद रखें और इसे कवर ग्लास के साथ कवर करें। अनुभागों को सूखने के लिए फ्यूम हुड में छोड़ दें।
- चरण 7.5 में वर्णित छवियों को एकत्र करें।
Representative Results
एफएस मॉडल की सफलता या विफलता का मूल्यांकन करने के लिए चूहों की शारीरिक गतिविधि देखी गई। एक पिछले अध्ययन से पता चला है कि कास्ट स्थिरीकरण ने सामान्य चूहों की तुलना में यात्रा की दूरी औरचलने की गति को काफी कम कर दिया है। एक अन्य शोध ने सुझाव दिया कि एफएस ने यात्रा की दूरी को प्रभावित नहीं किया, और लंगड़ाना सबसे आम प्रस्तुत लक्षण13 था। इस अध्ययन में मॉडलिंग के बाद चूहों में दाहिने कंधे के जोड़ में अकड़न, दाहिने ऊपरी अंग का संकुचन, मांसपेशियों में शोष और लंगड़ापन दिखाया गया। एमटी और एमओ समूहों में इन घावों को 2 सप्ताह के हस्तक्षेप से पूरी तरह से हल किया गया था। लेकिन एम समूह में कोई महत्वपूर्ण बदलाव नहीं हुआ।
एफएस में ट्यूना की प्रभावशीलता का मूल्यांकन करने के लिए प्राथमिक मानदंड ग्लेनोह्यूमरल रोम18 का माप है। हमने देखा कि ग्लेनोह्यूमरल रोम का औसत मान सी समूह में 149.3 ° ± 5.9 ° था, M समूह में 111.1 ° ± 3.9 ° था, MT समूह में 128.5 ° ± 2.8 ° और एमओ समूह में 119.56 ° ± 2.9 ° था। जैसा कि चित्र 7 में दर्शाया गया है, एम समूह में चूहों का ग्लेनोह्यूमरल रोम सी समूह (पी < 0.0001) की तुलना में काफी कम था। इसके अलावा, एमटी समूह और एमओ समूह में रोम एम समूह (पी < 0.05, पी < 0.0001) की तुलना में काफी अधिक था। हालांकि, एमओ समूह में ROM MT समूह (P < 0.0001) की तुलना में काफी कम था। इस खोज से पता चलता है कि तुइना एफएस चूहों में कंधे के संयुक्त कार्य में काफी सुधार कर सकता है।
इसके अतिरिक्त, एच एंड ई धुंधला और मैसन धुंधला होना संरचना को संरक्षित करने और कैप्सूल में फाइब्रोसिस को कम करने में ट्यूना के प्रभावों को प्रदर्शित कर सकता है। अवलोकन की सुविधा के लिए, ग्लेनोह्यूमरल जोड़ के कैप्सूल का उपयोग हिस्टोलॉजिकल निष्कर्षों के लिए किया गया था। कंधे के संयुक्त कैप्सूल में श्लेष और रेशेदार परतें19 शामिल हैं। एच एंड ई धुंधला होने से एम समूह में सिनोवियोसाइट प्रसार, चपटा श्लेष सिलवटों, एरिथ्रोसाइट स्टैसिस और संवहनी प्रसार का पता चला, जो एफएस की विशिष्ट विशेषताएं हैं (चित्रा 8 ए, बी)। ट्यूना और मौखिक डेक्सामेथासोन थेरेपी (चित्रा 8 सी, डी) के बाद ये विशेषताएं कुछ हद तक कम हो गईं। एमटी समूह की तुलना में, एमओ समूह ने भी बहुत अधिक श्लेष कोशिकाओं को दिखाया। मैसन स्टेनिंग ने प्रत्येक समूह (पीले तीर) में फाइबर बंडलों की व्यवस्था दिखाई। कैप्सूल में एक साफ दिशा में व्यवस्थित फाइबर बंडलों के साथ जालीदार फाइबर का एक ढीला नेटवर्क शामिल है (चित्रा 8 ई)। एम समूह में, फाइबर बंडलों को अव्यवस्थित रूप से व्यवस्थित किया गया था, जो कैप्सूल फाइब्रोसिस (चित्रा 8 एफ) का संकेत देता है। एमटी समूह में चूहों के कैप्सूल से पता चला है कि फाइबर बंडल बड़े करीने से और स्पष्ट रूप से स्तरीकृत हैं लेकिन एमओ समूह (चित्रा 8 जी, एच) में थोड़ा अव्यवस्थित रहते हैं।
चित्रा 1: एफएस मॉडल और ट्यूना हस्तक्षेप स्थापित करने के लिए प्रोटोकॉल। चूहों को 7 दिनों के लिए अनुकूली भोजन पर रखा गया था, एफएस मॉडल स्थापना 21 दिनों के लिए, और ट्यूना थेरेपी 14 दिनों के लिए दैनिक रूप से की गई थी। 36 वें दिन, सभी चूहों की बलि दी गई। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 2: एफएस के चूहे मॉडल की स्थापना के लिए कास्ट स्थिरीकरण। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्र 3: हेरफेर का मात्रात्मक नियंत्रण । (ए) बुद्धिमान मालिश तकनीक पैरामीटर निर्धारण प्रणाली। (बी) तीन बलों को एक्स दिशा के साथ समानांतर बल, वाई दिशा के साथ अनुदैर्ध्य बल और जेड दिशा के साथ ऊर्ध्वाधर बल के रूप में मापा जा सकता है। (ग) रोटेरी-गूंधने की विधि की ताकत। लाल वक्र स्थिर ऊर्ध्वाधर बल (0.5 किलोग्राम) का प्रतिनिधित्व करता है। नारंगी वक्र नियमित समानांतर बल का प्रतिनिधित्व करता है। सफेद वक्र नियमित अनुदैर्ध्य बल का प्रतिनिधित्व करता है। (डी) पॉइंट-प्रेसिंग विधि की ताकत। लाल वक्र ऊर्ध्वाधर बल (0.5 किलोग्राम) का प्रतिनिधित्व करता है। नारंगी और सफेद वक्र गैर-समानांतर और अनुदैर्ध्य बलों का प्रतिनिधित्व करते हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 4: ट्यूना थेरेपी में उपयोग किया जाने वाला हेरफेर। (A-C) दाहिने कंधे, अग्रभाग और पीठ की मांसपेशियों को गूंध लें। (D-G) पॉइंट-प्रेस LI15, SI11, HT01, और LI11। (H-K) अग्रभाग को जोड़, अपहरण, पूर्वकाल विस्तार और पीछे के विस्तार की स्थिति में फैलाएं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 5: चूहों में एलआई 15, एसआई 11, एचटी 01 और एलआई 11 की शारीरिक स्थिति। ● पार्श्व सतह, ⇒ औसत दर्जे की सतह। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 6: ग्लेनोह्यूमरल रोम का माप। एक पतला धागा एक इंजेक्शन सुई से जुड़ा होता है जिसे ह्यूमरल शाफ्ट में डाला जाता है और इसे ह्यूमरल शाफ्ट के समानांतर बनाने के लिए 5 ग्राम बल के साथ दूसरे छोर पर खींचा जाता है। स्कैपुला और ह्यूमरल शाफ्ट के निचले किनारे के बीच के कोण को ग्लेनोह्यूमरल रोम के रूप में मापा जाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्र 7: चूहों के तीन समूहों में ग्लेनोह्यूमरल रॉम। मान एसडी, एन = 5 ± साधन हैं। महत्वपूर्ण अंतर एक-तरफा एनोवा (ए पी < 0.001 और बीपी < 0.0001) द्वारा इंगित किए जाते हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 8: कंधे कैप्सूल के हिस्टोलॉजिकल निष्कर्ष । (ए, ई) नियंत्रण समूह में एक सामान्य कैप्सूल संरचना (एच एंड ई और मैसन धुंधला) होती है। (B, F) एफएस मॉडल समूह कैप्सूल की संरचना में परिवर्तन को निम्नानुसार दर्शाता है: चपटा श्लेष सिलवटों, कैप्सूल फाइब्रोसिस, और परेशान फाइबर बंडल (एच एंड ई और मैसन धुंधला)। (सी, जी)। ट्यूना समूह के साथ संयुक्त एफएस मॉडल दिखाता है कि कैप्सूल की संरचना सामान्य के करीब है, और फाइब्रोसिस स्पष्ट नहीं है (एच एंड ई और मैसन धुंधला)। (D, H) मौखिक डेक्सामेथासोन के साथ संयुक्त एफएस मॉडल से पता चलता है कि कैप्सूल की संरचना सामान्य के करीब है, और फाइब्रोसिस स्पष्ट है (एच एंड ई और मैसन धुंधला)। स्केल बार = 100 μm. HH: ह्यूमरस का सिर; काला तीर: श्लेष सिलवटों; लाल तीर: एरिथ्रोसाइट स्टैसिस और संवहनी प्रसार; पीला तीर: फाइबर बंडल। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
Discussion
पहला महत्वपूर्ण कदम मॉडल चयन है। प्राथमिक एफएस मॉडल को लागू करने में कठिनाई के कारण, कास्ट स्थिरीकरण और सर्जिकल आंतरिक निर्धारण का उपयोग अक्सर एफएस चूहे मॉडल 9,12 को स्थापित करने के लिए किया जाता है। कैप्सूल के कंधे की गतिशीलता और फाइब्रोसिस का सबसे गंभीर प्रतिबंध 3 सप्ताह12,20 के लिए कास्ट स्थिरीकरण द्वारा स्थापित एफएस मॉडल में देखा गया था। इस अध्ययन में, एफएस मॉडल की सफलता दर 100% सफलता के साथ उत्कृष्ट थी।
दूसरा महत्वपूर्ण कदम इस प्रोटोकॉल में उपयोग की जाने वाली जोड़तोड़ है। इस अध्ययन में तीन जोड़तोड़ (गूंधना, दबाना और खींचना) का उपयोग किया गया था। मांसपेशियों को आराम देने के लिए नरम ऊतक गूंधने वाले हेरफेर को कंधे, स्कैपुला और ऊपरी बांह पर लागू किया गया था। एलआई 15, एसआई 11, एचटी 01 और एलआई 11 जैसे एक्यूपॉइंट पर दबाव लागू करके हेरफेर को दबाने का प्रदर्शन किया गया था, जो एफएस 5,21 के लिए नैदानिक अभ्यास में सबसे अधिक उपयोग किए जाते हैं। एलआई 15, एसआई 11, और एचटी 01 कंधे कैप्सूल के आसपास की स्थिति में स्थित हैं और रोम और कंधे के कार्य22 में सुधार करने में प्रभावी हो सकते हैं। एलआई 11 का उपयोग अक्सर ऊपरी छोर मोटर हानि के लिए किया जाता है और यह एलआई 15 के समान मेरिडियन में स्थित होता है। यह एक्यूपॉइंट मिलान विधि एलआई 1523 की प्रभावकारिता में सुधार करने में मदद करती है। पूर्ण विश्राम के बाद, कार्यात्मक गतिविधियों को बहाल करने के लिए स्ट्रेचिंग तकनीकों का उपयोग किया गया था।
इस प्रोटोकॉल में संभावित समस्या यह है कि चूहे तुइना के दौरान तीव्र प्रतिरोध प्रदर्शित करते हैं, जो चूहों की सहिष्णुता से अधिक होने के बजाय डर के कारण हो सकता है। इस बिंदु पर, जोड़तोड़ को तब तक रोक दिया जाना चाहिए जब तक कि चूहे शांत न हो जाएं (10 सेकंड के लिए स्ट्रोक करने से चूहे शांत हो जाते हैं)। इसके अलावा, चूहों के लक्षणों के अनुसार स्ट्रेचिंग की सीमा को समायोजित किया जाना चाहिए। प्रारंभ में, कंधे के जोड़ की सीमा स्पष्ट थी, और स्ट्रेचिंग आयाम छोटा था। हस्तक्षेप के साथ, चूहों के कंधे के संयुक्त कार्य धीरे-धीरे ठीक हो गए और खिंचाव का आयाम उत्तरोत्तर बढ़ गया। मानक यह है कि चूहे प्रतिरोध के बिना स्ट्रेचिंग विधि को स्वीकार कर सकते हैं। अंत में, चूहों में आक्रामकता की एक निश्चित डिग्री होती है, और ट्यूना को चूहों के साथ लंबे समय तक संपर्क की आवश्यकता होती है, इसलिए व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण पहनना महत्वपूर्ण है।
तुइना प्रयोगों में हेरफेर का मात्रात्मक नियंत्रण सबसे कठिन है। जबकि एक मालिश हेरफेर सिम्युलेटर का उपयोग एकल हेरफेर की ताकत और आवृत्ति को नियंत्रित करने के लिए किया जा सकता है, यह विधि सीमित है जब कई जोड़तोड़ और उपचार साइटें शामिल होतीहैं24,25। नैदानिक अभ्यास में, टुइना आमतौर पर चिकित्सकों द्वारा सीधे किया जाता है, और इस अध्ययन में, चिकित्सा उपकरणों के साथ हस्तक्षेप करना मुश्किल था। उत्तेजना को नियंत्रित करने के लिए, बुद्धिमान मालिश तकनीक पैरामीटर निर्धारण प्रणाली का उपयोग ट्यूना के प्रशिक्षण को मानकीकृत करने के लिए किया जा सकता है। प्रशिक्षण के बाद, अन्वेषक एक हद तक प्रत्येक चूहे पर एक ही बल लागू कर सकता है। इस प्रोटोकॉल की प्रमुख सीमा यह है कि जोड़तोड़ को पूरी तरह से नियंत्रित नहीं किया जा सकता है।
टीसीएम ट्यूना थेरेपी का चीन भर में उपयोग का एक समृद्ध इतिहास है, अस्पतालों में विभिन्न डॉक्टर विभिन्न हेरफेर और उपचार साइट संयोजनों का उपयोग करते हैं। इसलिए, पशु प्रयोगों और नैदानिक अध्ययन दोनों के लिए प्रतिकृति और प्रभावी प्रोटोकॉल स्थापित करना महत्वपूर्ण है। इस अध्ययन में, उपयोग किए गए जोड़तोड़ और एक्यूपॉइंट हमारी टीम द्वारा पिछले अध्ययन पर आधारित थे, जो एफएस पशु मॉडल21 की विशेषताओं के साथ हमारे नैदानिक अनुभव को जोड़ते थे। इस अध्ययन ने कंधे के संयुक्त कार्य में सुधार और एफएस चूहों में कैप्सूल फाइब्रोसिस को कम करने में विकसित ट्यूना प्रोटोकॉल की प्रभावशीलता का प्रदर्शन किया। ये निष्कर्ष ट्यूना उपचार के अंतर्निहित तंत्र में आगे की जांच के लिए एक आधार प्रदान करते हैं। इसके अलावा, प्रोटोकॉल एफएस के लिए वैकल्पिक चिकित्सा उपचार की प्रभावकारिता की खोज में रुचि रखने वाले शोधकर्ताओं के लिए उपयोगी हो सकता है।
एक पिछले अध्ययन में पाया गया कि फाइब्रोसिस पर तुइना हस्तक्षेप का तंत्र एमएमपी -1 / टीआईएमपी -1 के संतुलन को विनियमित करते हुए टीजीएफ -β और सीटीजीएफ के डाउन-विनियमन से संबंधित हो सकता है, जिससे बाह्य मैट्रिक्स (ईसीएम) 26 के उत्पादन को कम किया जा सकता है। कंधे के कैप्सूल के फाइब्रोसिस पर ट्यूना का प्रभाव विभिन्न तंत्रों के विनियमन के माध्यम से प्राप्त किया जा सकता है। हालांकि, इस सुधार में शामिल तंत्र को पूरी तरह से समझने के लिए आगे के शोध की आवश्यकता है।
Disclosures
लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है।
Acknowledgments
इस काम को जिनान शहर में 2020 विज्ञान और प्रौद्योगिकी विकास योजना (अनुदान संख्या 202019059), शेडोंग प्रांत की पारंपरिक चीनी चिकित्सा विज्ञान और प्रौद्योगिकी परियोजना (अनुदान संख्या 2021 क्यू 080), और किलू स्कूल ऑफ ट्रेडिशनल चाइनीज मेडिसिन इनहेरिट प्रोजेक्ट (अनुदान संख्या [2022]93) द्वारा समर्थित किया गया था।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 4% paraformaldehyde | Solarbio | P1110 | |
| Embedding machine | Changzhou Paisijie Medical Equipment Co., Ltd | BM450A | |
| Ethylene Diamine Tetraacetic Acid (EDTA) | Solarbio | E1171 | |
| Hematoxylin eosin (HE) staining kit | Sparkjade | EE0012 | |
| Intelligent-massage technique parameter determination system | Shanghai Dukang Intrument Equipment Co. Ltd | ZTC- |
|
| Microtome | Leica | 531CM-Y43 | |
Modified Masson Trichrome Staining Solution |
Shanghai yuanye Bio-Technology Co., Ltd | R20381-8 | Bouin 50 mL; lapis lazuli blue dye 50 mL; Hematoxylin (Mayer) 50 mL; acidic ethanol differentiation solution 50 mL; ponceau magenta dye solution 50 mL; phosphomolybdic acid solution 50 mL; aniline blue staining solution 50 mL; weak acid 50 mL |
| Tribromoethanol | Macklin | T903147-5 |
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