Summary
यह लेख ट्यूना थेरेपी का उपयोग करके चूहों में पृष्ठीय जड़ नाड़ीग्रन्थि के पुराने संपीड़न के इलाज के लिए एक हेरफेर प्रस्तुत करता है, साथ ही दर्द व्यवहार और हिस्टोपैथोलॉजिकल परिणामों के आधार पर इसकी प्रभावशीलता का मूल्यांकन करने के लिए एक विधि के साथ।
Abstract
न्यूरोपैथिक दर्द एक प्रचलित स्थिति है जो 6.9% -10% आबादी को प्रभावित करती है और विभिन्न ईटियोलॉजी के कारण तंत्रिका क्षति के परिणामस्वरूप होती है, जैसे कि काठ की डिस्क हर्नियेशन, स्पाइनल कैनाल स्टेनोसिस, और इंटरवर्टेब्रल फोरमेन स्टेनोसिस। हालांकि ट्यूना, एक पारंपरिक चीनी मैनुअल थेरेपी, ने न्यूरोपैथिक दर्द के उपचार के लिए नैदानिक अभ्यास में एनाल्जेसिक प्रभाव दिखाया है, लेकिन इसके अंतर्निहित न्यूरोबायोलॉजिकल तंत्र स्पष्ट नहीं हैं। तुइना के मूल सिद्धांतों को स्पष्ट करने के लिए पशु मॉडल आवश्यक हैं। इस अध्ययन में, हम पृष्ठीय जड़ नाड़ीग्रन्थि (डीआरजी) के संपीड़न के साथ चूहों के लिए एक मानकीकृत ट्यूना प्रोटोकॉल का प्रस्ताव करते हैं, जिसमें इंटरवर्टेब्रल फोरमेन में स्टेनलेस स्टील रॉड डालकर डीआरजी संपीड़न को प्रेरित करना, नियंत्रित वातावरण में स्थान, तीव्रता और आवृत्ति के विशिष्ट मापदंडों के साथ ट्यूना हेरफेर करना और ट्यूना उपचार के व्यवहार और हिस्टोपैथोलॉजिकल परिणामों का आकलन करना शामिल है। यह लेख अध्ययन के संभावित नैदानिक निहितार्थ और सीमाओं पर भी चर्चा करता है और तुइना पर भविष्य के शोध के लिए दिशाओं का सुझाव देता है।
Introduction
नैदानिक सेटिंग्स में, विभिन्न कारणों से तंत्रिका जड़ संपीड़न के कारण न्यूरोलॉजिकल पैथोलॉजिकल दर्द का निरीक्षण करना आम है। इस न्यूरोपैथिक दर्द का सबसे विशिष्ट रूप काठ डिस्क हर्नियेशन (एलडीएच) है, जो अक्सर लगातार, आवर्तक और इलाज करने में मुश्किल होता है। वैश्विक आबादी का लगभग 9% एलडीएच से प्रभावित है, जिससे महत्वपूर्ण सामाजिक और आर्थिक बोझ पड़ताहै। मानव उत्पादनऔर जीवन शैली में बदलाव के कारण, युवा रोगियों की ओर एक प्रवृत्ति के साथ, इस प्रकार के न्यूरोपैथिक दर्द की घटनाएं सालाना बढ़ रही हैं। गैर-स्टेरायडल दर्द निवारक दवाओं के उपयोग के बावजूद, रोगियों के लक्षणों को पूरी तरह से कम नहीं किया जा सकता है। नतीजतन, एलडीएच के कारण होने वाले दर्द के इलाज के लिए ट्यूना जैसे वैकल्पिक उपचारों ने बढ़ते ध्यान आकर्षित किया है।
ट्यूना थेरेपी, एलडीएच के लिए रूढ़िवादी उपचार का एक रूप, पीठ के निचले हिस्सेमें दर्द को रोकने और इलाज के लिए दुनिया भर में विभिन्न नैदानिक अभ्यास दिशानिर्देशों में व्यापक रूप से अनुशंसित है। अनुसंधान से पता चला है कि ट्यूना एलडीएच रोगियों में सीरम आईएल -6 और ट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर-अल्फा (टीएनएफ -α) के स्तर जैसे भड़काऊ कारकों को काफी कम कर सकता है, जबकि रोगियों के दर्द और काठ समारोह हानिमें सुधार कर सकता है। हालांकि, ट्यूना थेरेपी के दर्द निवारक प्रभावों के पीछे विशिष्ट तंत्र स्पष्ट नहीं है।
पशु मॉडल एलडीएच6 के कारण न्यूरोपैथिक दर्द का अध्ययन करने के लिए एक मूल्यवान उपकरण हैं। वे ट्यूना थेरेपी की प्रभावशीलता का मूल्यांकन करने और एलडीएच के पैथोलॉजिकल फिजियोलॉजी के नमूने प्रदान करने के लिए व्यवहार माप की अनुमति देते हैं। उदाहरण के लिए, पृष्ठीय जड़ गैंग्लियन कोशिकाओं में परिवर्तन को सत्यापित करने के लिए जांघ में पृष्ठीय रूट गैन्ग्लिया से नमूने लिए जा सकते हैं। पृष्ठीय रूट गैंग्लियन (सीसीडी) मॉडल के पुराने संपीड़न का उपयोग आमतौर पर एलडीएच के पैथोलॉजिकल फिजियोलॉजी का मूल्यांकन करने के लिए किया जाता है, क्योंकि यह पृष्ठीय जड़ गैंग्लियन कोशिकाओं की आकृति विज्ञान को नुकसान पहुंचाता है जो डिस्क हर्नियेशन7 के कारण तंत्रिका संपीड़न के नैदानिक मामलों में देखे गए रोग संबंधी परिवर्तनों के अनुरूप हैं।
कई विद्वानों ने एक्यूप्रेशर एनाल्जेसिया 8,9,10 पर कई पशु प्रयोग किए हैं। हालांकि, पशु मॉडल पर एक्यूप्रेशर ऑपरेशन को लागू करते समय, वे अक्सर मानव एक्यूप्रेशर की नकल करते हैं। एक्यूप्रेशर का चिकित्सीय प्रभाव आकार, आवृत्ति और लागू बलकी दिशा 11,12,13 जैसे कारकों से प्रभावित होता है। यदि प्रयोग में एक एकीकृत एक्यूप्रेशर मानक का अभाव है, जैसे कि बल, आवृत्ति और ऑपरेशन की अवधि, तो इससे प्रयोगात्मक परिणामों में कुछ विचलन हो सकता है। यह लेख सीसीडी चूहों की विशेषताओं के आधार पर एक्यूप्रेशर उपचार योजनाओं का एक सेट पेश करता है, और पशु मॉडल में मानकीकृत एक्यूप्रेशर संचालन के विकास को बढ़ावा देता है।
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Protocol
यह काम फुदान विश्वविद्यालय में न्यूरोबायोलॉजी संस्थान के दर्द लैब में किया गया था। प्रयोगों को सभी शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं और पशु हैंडलिंग के लिए इंटरनेशनल एसोसिएशन फॉर द स्टडी ऑफ पेन (एलएएसपी) द्वारा स्थापित प्रयोगशाला जानवरों की सुरक्षा के लिए दिशानिर्देशों का सख्ती से पालन किया गया था। क्लीन-ग्रेड स्प्राग-डॉवले (एसडी) चूहों, जिसमें 40-50 दिनों के बीच 32 पुरुष शामिल थे, जिनका औसत वजन 220 ± 1.38 ग्राम था, वर्तमान अध्ययन के लिए उपयोग किया गया था। इन चूहों को शंघाई एकेडमी ऑफ लाइफ साइंसेज, चाइनीज एकेडमी ऑफ साइंसेज के प्रायोगिक पशु केंद्र से प्राप्त किया गया था। जानवरों की ठीक से देखभाल की गई और स्वतंत्र वेंटिलेशन, विनियमित तापमान (22 ± 1 डिग्री सेल्सियस), और आर्द्रता (40% -50%) के साथ एक समर्पित कमरे में रखा गया। चूहों को अपने पिंजरों में पर्याप्त भोजन और पानी तक पहुंच थी। प्रयोगशाला पशु कक्ष ने चूहों के सर्कैडियन लय की नियमितता को बनाए रखने के लिए 12 घंटे के प्रकाश-अंधेरे चक्र का पालन किया, और नामित कर्मियों ने नियमित रूप से पैडिंग को बदल दिया। एक्स-रे शंघाई यूनिवर्सिटी ऑफ ट्रेडिशनल चाइनीज मेडिसिन से संबद्ध एकीकृत पारंपरिक चीनी और पश्चिमी चिकित्सा के युयांग अस्पताल के रेडियोलॉजी विभाग में किया गया था।
1. अध्ययन प्रतिभागियों और समूहीकरण
- 32 चूहों को चार समूहों में असाइन करें: भोले (नियंत्रण), शाम (शाम ऑपरेशन), सीसीडी (पुरानी पृष्ठीय जड़ नाड़ीग्रन्थि संपीड़न), और सीसीडी + ट्यूना (8 चूहे / समूह)। चूहों को पशु सुविधाओं में भोजन और पानी तक मुफ्त पहुंच थी।
नोट: भोले चूहों का कोई हस्तक्षेप नहीं था, जबकि शाम समूह को सीसीडी समूह के चूहों के समान शल्य चिकित्सा प्रक्रिया से गुजरना पड़ा, लेकिन एल 4 और एल 5 इंटरवर्टेब्रल फोरमेन में "एल" के आकार के स्टेनलेस स्टील रॉड को छोड़े बिना। सीसीडी समूह में चूहों को पूर्ण पुरानी पृष्ठीय जड़ नाड़ीग्रन्थि संपीड़न मॉडल सर्जरी से गुजरना पड़ा। सीसीडी + ट्यूना समूह के चूहों को सीसीडी सर्जरी के बाद चौथे दिन शुरू होने वाली ट्यूना थेरेपी मिली।
2. पशु मॉडल की स्थापना
- चूहों को एनेस्थेटाइज करने के लिए आइसोफ्लोरेन का उपयोग करें। एक बार जब चूहे चेतना खो देते हैं (कोई टेल फ्लिक रिफ्लेक्स या लेग फ्लेक्सन रिफ्लेक्स नहीं), रेजर का उपयोग करके सर्जिकल क्षेत्र में बालों को शेव करें।
नोट: एनाल्जेसिक दवाओं को सर्जरी से 15 मिनट पहले लागू किया गया था और चूहों को ट्रामाडोल 20 मिलीग्राम / किग्रा के साथ चमड़े के नीचे इंजेक्शन दिया गया था। - चूहे को फोम बोर्ड पर सुरक्षित करें ( सामग्री की तालिका देखें) और उसके अंगों और छेदकों को सुरक्षित करने के लिए रबर बैंड का उपयोग करें। तैयार क्षेत्र को कम से कम 3 चक्रों के लिए अल्कोहल और आयोडीन अल्टरनेटेशन की बाँझ तैयारी के साथ पोंछें।
- "एल" आकार की जांच डालें ( सामग्री की तालिका देखें)।
- त्वचा के माध्यम से 2-3 सेमी चीरा लगाने के लिए कैंची का उपयोग करें, सतही प्रावरणी, और परत दर परत गहरी प्रावरणी। सबसे पहले, पूर्ववर्ती बेहतर इलियाक रीढ़ का पता लगाएं, जो पांचवें काठ की रीढ़ से मेल खाती है। फिर, क्रमिक रूप से तीसरी और चौथी स्पिनस प्रक्रियाओं का पता लगाएं।
- घुमावदार प्रक्रिया को कठोर बल के साथ दबाएं और कैंची को स्पिनस प्रक्रिया के दाईं ओर के करीब होने की अनुमति देने के लिए इसे उठाएं और स्पिनस प्रक्रिया के दाईं ओर से जुड़ी मांसपेशियों को काट दें।
- फिर, कशेरुक प्लेट की बाहरी सतह से जुड़ी मांसपेशियों को स्पष्ट रूप से विच्छेदित करें जब तक कि दाईं ओर प्रतिरोध न हो। प्रोट्रूशियंस जाइगापोफिशियल जोड़ है। इसी तरह, जाइगापोफिशियल जोड़ पर मांसपेशियों और प्रावरणी को स्पष्ट रूप से विच्छेदित करें।
नोट: चूहे के सिर की दिशा को इंगित करने वाली अनुप्रस्थ प्रक्रिया को पहले ज़िगापोफिशियल जोड़ के निचले बाहरी मोर्चे में छुआ जाएगा। अनुप्रस्थ प्रक्रिया के नीचे इंटरवर्टेब्रल फोरमेन है, जो तंत्रिका जड़ों और आसपास के नरम ऊतकों से भरा होता है और आमतौर पर ढूंढना आसान नहीं होता है। - सबसे पहले, इंटरवर्टेब्रल फोरमेन की स्थिति निर्धारित करने के लिए "एल" के आकार की जांच का उपयोग करें, और फिर इसे इंटरवर्टेब्रल फोरमेन में डालने के लिए "एल" के आकार के स्टेनलेस स्टील रॉड (जिसे 0.4 मिमी के व्यास और 4 मिमी की लंबाई के साथ बनाने की आवश्यकता है) का उपयोग करें।
- यदि पृष्ठीय जड़ नाड़ीग्रन्थि को सफलतापूर्वक संपीड़ित किया जाता है, तो चूहा एक पूंछ फ्लिक और पैर फ्लेक्सन रिफ्लेक्स प्रदर्शित करेगा। स्टेनलेस स्टील रॉड को चौथे और पांचवें काठ के इंटरवर्टेब्रल फोरमेन में डालें। फिर, सीवन (3-0, सामग्री की तालिका देखें) मांसपेशी, प्रावरणी और त्वचा को परत दर परत।
- चूहे को एक थर्मोस्टेटिक बॉक्स में रखें जब तक कि वह जाग न जाए। जागने के बाद, देखें कि चूहे के दाहिने पिछले अंग का कार्य सामान्य है या नहीं। यदि खींचना है, तो इसका मतलब है कि ऑपरेशन ने मोटर नसों को घायल कर दिया है, और चूहे को छोड़ दिया जाना चाहिए। यदि दाहिने पिछले अंग का कार्य सामान्य है, तो चूहे का उपयोग किया जा सकता है और खिलाने के लिए पिंजरे में रखा जा सकता है।
3. ट्यूना थेरेपी
- एक आरामदायक वातावरण स्थापित करें: ट्यूना थेरेपी शुरू करने से पहले, चूहे को 30 मिनट के लिए निरोधक में डुबोएं ताकि इसे अनुकूलित किया जा सके (चित्रा 1)। यह उपकरण चूहे की जांघ को पूरी तरह से उजागर कर सकता है और इसे गतिहीन कर सकता है, जिससे ट्यूना युद्धाभ्यास की सुविधा मिलती है ( सामग्री की तालिका देखें)।
नोट: उपचार कक्ष में तापमान 22-26 डिग्री सेल्सियस के बीच बनाए रखा जाना चाहिए, और आर्द्रता 40% -50% के बीच होनी चाहिए। - टुइना का मानकीकरण: सुनिश्चित करें कि चिकित्सक वायरलेस उंगली आस्तीन पहनते हैं जो ट्यूना के दबाव और आवृत्ति की निगरानी कर सकते हैं और वास्तविक समय प्रतिक्रिया डेटा प्रदान कर सकते हैं। सबसे पहले, उंगली आस्तीन के प्रतिक्रिया डेटा के साथ ट्यूना का अभ्यास करें, बल को 5 एन और आवृत्ति को 2 हर्ट्ज तक समायोजित करें। फिर, चूहों पर एक ही पैंतरेबाज़ी करें, पूरी प्रक्रिया में एक सुसंगत बल और आवृत्ति बनाए रखें (चित्रा 2)।
नोट: हमारे पिछले काम के आधार पर, गणना की गई इष्टतम दबाव बल 5 एन है (विवरण के लिए चर्चा अनुभाग देखें)। - एक्यूपॉइंट की पहचान करें: लगभग बीएल 5714 के स्थान पर, गैस्ट्रोकेनेमस मांसपेशी के दो सिरों के जंक्शन पर, चूहे के ट्यूना क्षेत्र के रूप में दाएं हिंद अंग की गैस्ट्रोकेनेमस मांसपेशी का चयन करें।
- ट्यूना का प्रदर्शन करें: सुनिश्चित करें कि चिकित्सक चूहे की जांघ के पीछे के पहलू का सामना करता है और चूहे के दाहिने ऊपरी अंग के साथ चूहे के दाहिने पिछले अंग को पकड़ता है। अंगूठे को बीएल 57 एक्यूपॉइंट पर लंबवत रखें, और सुनिश्चित करें कि अग्रभाग और उंगलियां 5 एन दबाव लागू करते हुए लयबद्ध छोटी दूरी की रोटरी गति करने के लिए बल लगाती हैं (चित्रा 3)।
- उपचार के दौरान, सुनिश्चित करें कि हेरफेर प्रतिक्रिया का बल और आवृत्ति पूर्व निर्धारित मूल्यों के अनुरूप है। सर्जरी के बाद चौथे दिन से हस्तक्षेप शुरू करें, जिसमें ट्यूना ने 18 दिनों तक लगातार 15 मिनट के लिए दिन में एक बार प्रदर्शन किया।
4. दर्द के लिए व्यवहार परीक्षण
नोट: मॉडलिंग से पहले, मॉडलिंग के बाद, हस्तक्षेप दिवस 1, हस्तक्षेप दिवस 3, हस्तक्षेप दिन 7, हस्तक्षेप दिन 14, हस्तक्षेप दिवस 17, और हस्तक्षेप दिवस 21 पर व्यवहार परीक्षण आयोजित किए गए थे।
- नीचे दिए गए चरणों का पालन करते हुए मैकेनिकल उत्तेजना प्रतिक्रिया सीमा (पंजा वापसी सीमा, पीडब्ल्यूटी) करें (चित्रा 4)।
- चूहों के पैरों में यांत्रिक उत्तेजना की प्रतिक्रिया सीमा का परीक्षण करने के लिए वॉन फ्रे विधि का उपयोग करें। चूहों को 20 सेमी × 10 सेमी × 20 सेमी मापने वाले पारदर्शी टेम्पर्ड ग्लास डिब्बे में रखें, जिसे 40 सेमी की ऊंचाई पर 10 मिमी × 10 मिमी एपर्चर वाले धातु के तार ग्रिड स्टैंड पर रखा गया था। कमरे का तापमान 23 ± 2 डिग्री सेल्सियस पर रखें, और आसपास का वातावरण शांत रखें।
- इलेक्ट्रॉनिक वॉन फ्रे फाइबर के साथ यांत्रिक वापसी सीमा को मापें ( सामग्री की तालिका देखें)। चूहे के पैर के केंद्र को तब तक उत्तेजित करें जब तक कि वह उल्लेखनीय रूप से आगे न बढ़े, जैसे कि पैर उठाना या उससे बचना। मशीन स्वचालित रूप से अधिकतम दबाव मान (एन) रिकॉर्ड करती है।
- उसी चूहे को फिर से उत्तेजित करने से पहले 15 सेकंड या उससे अधिक समय तक प्रतीक्षा करें। चूहे के पंजे में स्पर्श संवेदीकरण को रोकने के लिए प्रत्येक उत्तेजना को 5 सेकंड से कम रखें। परीक्षण को पांच बार दोहराएं जब तक कि तीन लगातार माप 10 एन से कम न हों।
- थर्मल उत्तेजना के जवाब में पंजा वापसी विलंबता (पीडब्ल्यूएल) करें (चित्रा 5)।
- हारग्रीव्स विधि15,16 का उपयोग करके पीडब्ल्यूएल का आकलन करें। चूहों को पारदर्शी टेम्पर्ड ग्लास से बने एक छोटे कक्ष में रखें, जो 20 सेमी x 10 सेमी x 20 सेमी माप ता है, जिसमें एक वेंट छेद के साथ एक पारदर्शी ग्लास ढक्कन होता है। हीटिंग प्लेट का उपयोग करके ग्लास ढक्कन के केंद्रीय क्षेत्र को 45 डिग्री सेल्सियस तक गर्म करें जब तक कि यह स्थिर तापमान तक न पहुंच जाए।
- व्यवहार परीक्षण चरण के दौरान, परीक्षण के परिणामों पर पर्यावरणीय कारकों के प्रभाव को कम करने के लिए प्रत्येक दिन कम से कम 2 घंटे के लिए चूहों को व्यवहार प्रयोगशाला में ले जाएं।
- औपचारिक परीक्षण से पहले, चूहों को 30 मिनट के लिए व्यवहार प्रयोगशाला में रखें ताकि वे पर्यावरण के अनुकूल हो सकें और हस्तक्षेप को कम कर सकें।
- हीटिंग प्लेट को 45 डिग्री सेल्सियस तक गर्म करें, और हीटिंग प्लेट पर चूहे के पिछले अंगों को रखें।
- पंजा वापसी विलंबता (पीडब्ल्यूएल) को थर्मल उत्तेजना के जवाब में हीटिंग की शुरुआत से पंजे की वापसी रिफ्लेक्स की उपस्थिति तक के समय के रूप में परिभाषित किया गया था। प्रत्येक परीक्षण में, एक ही पिछले अंग को लगातार तीन बार परीक्षण करें, और उस पिछले अंग की प्रतिक्रिया विलंबता प्राप्त करने के लिए औसत मूल्य। परीक्षण के बाद, चूहों को खिलाने के लिए उनके पिंजरों में वापस कर दें।
5. छिड़काव
- तैयारी: पहले से 0.9% खारा घोल और 4% पैराफॉर्मलडिहाइड समाधान तैयार करें। नमकीन घोल को ओवन सेट में 37 डिग्री सेल्सियस के निरंतर तापमान पर रखें, और बाद में उपयोग के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर रेफ्रिजरेटर में पैराफॉर्मलडिहाइड समाधान स्टोर करें।
- संज्ञाहरण करें और पहुंच स्थापित करें।
- गहरे संज्ञाहरण को प्रेरित करने के लिए चूहे के पेट की गुहा में 25% यूरेथेन (0.6 एमएल / 100 ग्राम, सामग्री की तालिका देखें) इंजेक्ट करके शुरू करें। तब तक प्रतीक्षा करें जब तक कि कोई पैर की अंगुली, कॉर्नियल या टर्निंग रिफ्लेक्स न देखा जाए। चूहे को फोम बोर्ड पर ठीक करें।
- कैंची से छाती की हड्डी को काटें और त्वचा और प्रावरणी को परत दर परत खोलें। डायाफ्राम को काटें और दिल को पूरी तरह से उजागर करने के लिए दोनों तरफ की पसलियों को काट दें। पेरिकार्डियम को सावधानीपूर्वक अलग करें। फेफड़ों को दिल से अलग करें।
- दिल को अपनी ओर खींचकर महाधमनी को खींचने और उजागर करने के लिए बल का उपयोग करें। सुई, बाएं वेंट्रिकल और महाधमनी को एक सीधी रेखा में और एक ही क्षैतिज तल पर संरेखित करें। फिर बाएं वेंट्रिकल से सुई को महाधमनी में डालें जब तक कि सुई महाधमनी के अंदर दिखाई न दे।
- महाधमनी के अंदर महाधमनी और सुई को दबाने के लिए बल का उपयोग करें, और फिर कैंची से बाएं आलिंद को काट दें। इस समय, बाएं आलिंद से बड़ी मात्रा में रक्त बाहर निकल जाएगा। खारा घोल के लिए वाल्व खोलें और कुल 150-200 एमएल के लिए 37 डिग्री सेल्सियस खारा घोल को शुद्ध करने के लिए खारा इंजेक्शन से कनेक्ट करें।
- खारा छिड़काव पूरा होने के बाद, 4% पैराफॉर्मलडिहाइड समाधान पर स्विच करें और 4 डिग्री सेल्सियस पर कुल 400 एमएल के लिए 4% पैराफॉर्मलडिहाइड समाधान के साथ छिड़काव करें। पैराफॉर्मलडिहाइड छिड़काव शुरू करते समय, चूहे के सामने के दांतों को एक जोड़ी बल से पकड़ें और उन्हें आगे खींचें, जबकि पूंछ को एक हाथ से पकड़ें और इसे पीछे की ओर खींचें, जो रीढ़ को पूरी तरह से विस्तारित करने और डीआरजी नमूने की सुविधा के लिए इंटरवर्टेब्रल फोरमेन को बढ़ाने के लिए फायदेमंद है।
- छिड़काव के दौरान, चूहे का जिगर, मेसेन्ट्री और अधिक ओमेंटम धीरे-धीरे पीला हो जाता है जब तक कि यकृत कठोर न हो जाए। फिर, प्रवाह दर को धीमा करें और इसे प्रति सेकंड लगभग 2 बूंदों तक समायोजित करें जब तक कि सभी पैराफॉर्मलडिहाइड संक्रमित न हो जाएं।
6. पृष्ठीय जड़ नाड़ीग्रन्थि संग्रह
नोट: छिड़काव के बाद, जल्दी से चूहे की रीढ़ के काठ के खंड को काट दें। इस पोजिशनिंग विधि का उपयोग करके एल 5 और एल 4 इंटरवर्टेब्रल फोरमेन का पता लगाएं, दोनों तरफ इलियाक शिखा के उच्चतम बिंदुओं को एल 5 लम्बर स्पिनस प्रक्रिया से जोड़कर, और इंटरवर्टेब्रल फोरमेन से पृष्ठीय जड़ नाड़ीग्रन्थि को हटा दें। विशिष्ट संग्रह विधि निम्नानुसार है:
- स्पाइनल कैनाल (थोरेसिक स्पाइनल कैनाल) के प्रवेश द्वार से, कैंची को रीढ़ की हड्डी की नहर में डालें और दोनों तरफ के लैमिना को तब तक काट दें जब तक कि सभी लैमिनेट को पूरी तरह से हटा न दिया जाए, जिससे पूरी रीढ़ की हड्डी की नहर उजागर हो जाए।
नोट: लैमिनेट काटते समय रीढ़ की हड्डी और रीढ़ की हड्डी के बाहर तंत्रिका जड़ों को नुकसान न पहुंचाने के लिए सावधान रहें। - रीढ़ की हड्डी और पीछे के अनुदैर्ध्य लिगामेंट को ध्यान से हटा दें। इंटरवर्टेब्रल फोरमेन के आंतरिक छेद से जुड़े ड्यूरा मैटर को अलग करें।
- पृष्ठीय जड़ नाड़ीग्रन्थि को दबाने और खींचने के लिए नेत्र बल का उपयोग करें, जो मोती के आकार का होता है और थोड़ा पीला होता है।
नोट: तंत्रिका ऊतक की नाजुकता और खराब क्रूरता के कारण, पृष्ठीय जड़ नाड़ीग्रन्थि को बाहर निकालते समय ताकत और खींचने की दिशा को समझना और पाशविक बल का उपयोग नहीं करना आवश्यक है। - पृष्ठीय जड़ नाड़ीग्रन्थि को बाहर निकालते समय, पृष्ठीय जड़ नाड़ीग्रन्थि के चिकनी खींचने की सुविधा के लिए पहले से ड्यूरा मैटर और अरचनॉइड सहित आसपास के नरम ऊतकों को साफ करना सुनिश्चित करें।
- पृष्ठीय जड़ नाड़ीग्रन्थि को शोषक कागज पर रखें, एक ब्लेड के साथ अक्षतंतु को काट दें, और पृष्ठीय जड़ नाड़ीग्रन्थि की सतह पर रक्त वाहिकाओं को साफ करें।
- ट्रिमिंग के बाद, पृष्ठीय जड़ नाड़ीग्रन्थि का वजन करें और इसे 4% की एकाग्रता और पर्याप्त समय के लिए 4 डिग्री सेल्सियस के तापमान के साथ 4% पैराफॉर्मलडिहाइड घोल में डुबोएं, आमतौर पर लगभग 2-4 घंटे, फिर पृष्ठीय जड़ नाड़ीग्रन्थि को 10%, 20%, और 30% पीबी सुक्रोज समाधान (4 डिग्री सेल्सियस) में स्थानांतरित करें।
7. क्रायोसेक्शनिंग
- पृष्ठीय जड़ नाड़ीग्रन्थि को 0.01 एम पीबीएस समाधान में रखकर शुरू करें। उन्हें 10 मिनट के लिए हिलाएं और फिर सुक्रोज के घोल को धो लें। पृष्ठीय रूट गैन्ग्लिया के दोनों खंडों के अक्षतंतु तंतुओं को सावधानीपूर्वक ट्रिम करें। क्रायोसेक्शनिंग मशीन के फ्रीजिंग हेड को साफ करें और इसमें इष्टतम कटिंग तापमान (ओसीटी) यौगिक जोड़ें ( सामग्री की तालिका देखें)।
- तरल नाइट्रोजन युक्त धातु के खोल की सतह पर ठंड के सिर को रखें, ऊतक के जमे होने तक प्रतीक्षा करें, इसे हटा दें, और इसे सपाट ट्रिम करें। उसके बाद, फ्रीजिंग हेड को स्लाइसर के आधार पर रखें। पृष्ठीय जड़ गैन्ग्लिया स्लाइस की मोटाई 15 मिमी होनी चाहिए। कटा हुआ पतला वर्गों को लकड़ी के बॉक्स में व्यवस्थित करें और उन्हें प्रकाश से दूर -20 डिग्री सेल्सियस रेफ्रिजरेटर में स्टोर करें।
8. हेमटोक्सीलिन और ईओसिन धुंधला होना
- अनुभाग 2 मिनट को जाइलीन में रखें, और उन्हें अल्कोहल की एक श्रृंखला में निर्जलित करें, जिसमें 100%, 95%, 80%, और 70%, प्रत्येक 2 मिनट के लिए शामिल हैं। फिर आसुत जल में अनुभाग 2 मिनट, हेमटोक्सिलिन में 1 मिनट रखें, नल के पानी के कुल्ला के 5 मिनट करें, और 30 सेकंड के लिए 1% खारा अल्कोहल घोल में भेदभाव करें, इसके बाद संतृप्त लिथियम कार्बोनेट में 30 एस।
- इसके बाद, आसुत जल और नल के पानी में प्रत्येक स्लाइस को 2 मिनट, ईओसिन घोल में 5 मिनट (0.5%), आसुत जल में 1 मिनट का त्वरित कुल्ला, 95% और 100% अल्कोहल में 2 मिनट के दो राउंड, सोडियम बाइकार्बोनेट के साथ 100% जाइलीन में 30 सेकंड, जाइलीन में 3 मिनट के तीन राउंड रखें, और अंत में, तटस्थ बालसम के साथ सील ( सामग्री की तालिका देखें)।
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Representative Results
ट्यूना थेरेपी सीसीडी मॉडलिंग के कारण चूहों की यांत्रिक और थर्मल उत्तेजना थ्रेसहोल्ड को कम करने में मदद कर सकती है।
ट्यूना थेरेपी के 17 दिनों के बाद, ट्यूना थेरेपी प्राप्त करने वाले सीसीडी चूहों और अनुपचारित सीसीडी समूह (पी = 0.021, <0.05) (चित्रा 6 और तालिका 1) के बीच पीडब्ल्यूटी थ्रेसहोल्ड में एक महत्वपूर्ण अंतर देखा गया।
ट्यूना थेरेपी प्राप्त करने वाले सीसीडी समूह के चूहों ने उपचार की शुरुआत से दर्द की सीमा में सुधार दिखाया, और मॉडलिंग के बाद 14 वें दिन से सीसीडी समूह और ट्यूना थेरेपी प्राप्त करने वाले समूह के बीच थर्मल दर्द सीमा में एक महत्वपूर्ण अंतर पाया गया (पी = 0.0047, 0.0056, 0.0049, < 0.01) (चित्रा 7 और तालिका 2)।
ट्यूना थेरेपी के आवेदन ने सीसीडी मॉडल के कारण सेल नेक्रोसिस में सुधार नहीं किया।
पृष्ठीय रूट गैन्ग्लिया के एचई धुंधलापन के आधार पर, चूहों के सीसीडी समूह, जिन्हें "एल" आकार के स्टेनलेस स्टील रॉड के साथ शारीरिक संपीड़न के अधीन किया गया था, ने कोशिका झिल्ली क्षति और एपोप्टोसिस (चित्रा 8) का सामना किया था। इसके विपरीत, चूहों के नियंत्रण समूह में बड़े करीने से परिभाषित किनारे, बरकरार न्यूरॉन आकृति और पूर्ण कोशिका निकाय थे (चित्रा 9)। सीसीडी + ट्यूना समूह में, चूहों के पृष्ठीय रूट गैन्ग्लिया में कुछ न्यूरॉन आकृति अपूर्ण थीं (चित्र 10)।
चित्र 1: चूहों के लिए संयम। यह टोंगजी विश्वविद्यालय द्वारा निर्मित एक घर का बना उपकरण है, जो चूहों को प्रभावी ढंग से गतिहीन कर सकता है और उनके पिछले अंगों को पूरी तरह से उजागर कर सकता है। चांदी का पेंच चूहे की पूंछ को पकड़ने वाले बैफल को नियंत्रित करता है और चूहे को रोकता है। काला पेंच डिवाइस को चूहे की लंबाई में समायोजित करता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 2: वायरलेस स्पर्श बल माप उंगली आस्तीन पहनना। एक उपकरण जो उंगली के दबाव के बल और आवृत्ति को मापता है और प्रदर्शित करता है, टुइना हेरफेर के दौरान तीव्रता और आवृत्ति पर वास्तविक समय प्रतिक्रिया प्रदान करता है। (क) दबाव संवेदक और पारेषण उपकरण। (बी) उंगली दबाव माप। (ग) तुइना हेरफेर के दौरान मापा गया बल। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्र 3: चूहे ट्यूना के लिए शरीर की स्थिति और एक्यूपॉइंट स्थान। चूहा निरोधक बीएल 57 की स्थिति को पूरी तरह से उजागर कर सकता है। अंग, अंगूठे के साथ, चूहे के निचले अंगों को पकड़ते हैं ताकि इसे ठीक किया जा सके ताकि चूहा उपचार के दौरान चुपचाप सहयोग कर सके। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्र 4. पंजा वापसी सीमा परीक्षण। यह चूहों में दर्द व्यवहार को मापने के लिए एक परीक्षण है। इसमें यांत्रिक रूप से उनके पैरों को उत्तेजित करना और उनके पंजे की वापसी विलंबता को मापना शामिल है। (ए) उपकरण दिखाता है, और (बी) दिखाता है कि प्रयोग के दौरान माउस पर इसे कैसे हेरफेर किया गया था। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 5: पंजा वापसी विलंबता परीक्षण। यह सेटअप स्पॉटलाइट द्वारा उत्पन्न गर्मी के प्रति उनकी संवेदनशीलता से चूहों के दर्द की सीमा को मापता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 6: पंजा वापसी सीमा परीक्षण के परिणाम। माप को माध्य प्लस या माइनस मानक त्रुटि (
) का उपयोग करके दर्शाया जाता है। चूहों के प्रत्येक समूह के लिए विभिन्न चरणों में यांत्रिक उत्तेजना-प्रेरित हिंदलिम्ब वापसी रिफ्लेक्स थ्रेशोल्ड परीक्षण के परिणाम। 17 वें दिन से सीसीडी + ट्यूना और सीसीडी मॉडल समूहों के बीच महत्वपूर्ण अंतर (पी < 0.05) देखा गया। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 7: पंजा वापसी विलंबता परीक्षण के परिणाम। माप को माध्य प्लस या माइनस मानक त्रुटि () का उपयोग करके दर्शाया जाता है। प्रत्येक समूह में चूहों के विभिन्न चरणों में गर्मी उत्तेजना-प्रेरित पैर वापसी रिफ्लेक्स के थ्रेशोल्ड परीक्षण के परिणाम। सीसीडी + ट्यूना समूह और सीसीडी मॉडल समूह के बीच सातवें दिन (पी < 0.05) से शुरू होने वाले महत्वपूर्ण अंतर देखे गए। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 8: सीसीडी समूह (अनुदैर्ध्य खंड) में पृष्ठीय जड़ नाड़ीग्रन्थि न्यूरॉन्स का सूक्ष्म अवलोकन। यह छवि पृष्ठीय जड़ नाड़ीग्रन्थि के एचई-दाग वाले नमूने को स्कैन करके प्राप्त की गई थी। आंकड़े में लाल दीर्घवृत्त इंगित करता है कि कुछ न्यूरॉन्स परिगलन से गुजर रहे हैं। यह इंगित करता है कि सीसीडी मॉडल ने पृष्ठीय जड़ नाड़ीग्रन्थि में न्यूरॉन्स को नुकसान पहुंचाया है। स्केल बार = 50 μm. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्र 9. भोले समूह (अनुदैर्ध्य खंड और क्रॉस सेक्शन) में पृष्ठीय जड़ नाड़ीग्रन्थि न्यूरॉन्स का सूक्ष्म अवलोकन। जैसा कि उपरोक्त चित्र में दिखाया गया है, (ए) एक अनुदैर्ध्य खंड है, और (बी) एक अनुप्रस्थ खंड है। उस क्षेत्र में कोई सीसीडी समूह रिक्ति घटना नहीं है जहां चूहों के पृष्ठीय रूट गैन्ग्लिया का रिक्त समूह इकट्ठा होता है। न्यूरॉन्स निरंतर और कॉम्पैक्ट होते हैं, और सेल शरीर भर जाते हैं। उपग्रह ग्लियाल कोशिकाएं न्यूरॉन्स के बीच स्थित होती हैं। स्केल बार: (ए),50 μm; (b), 100 μm. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 10: सीसीडी + ट्यूना समूह (क्रॉस-सेक्शन) में पृष्ठीय जड़ नाड़ीग्रन्थि न्यूरॉन्स का सूक्ष्म अवलोकन। न्यूरॉन्स निरंतर हैं, और एक कोशिका विघटन घटना है। यह इंगित करता है कि अल्पावधि में, मालिश चिकित्सा सीसीडी मॉडल के कारण सेल नेक्रोसिस (लाल दीर्घवृत्त) में सुधार करने में असमर्थ थी। स्केल बार = 100 μm. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्र 11: ट्यूना दबाव परीक्षण। न्यूनतम हिस्सिंग-एस्केप रिफ्लेक्स संपीड़न मूल्यों वाले चूहे आकार में भिन्न होते हैं, जो 5 एन से 25 एन तक होते हैं। एब्सिसा दबाव की डिग्री का प्रतिनिधित्व करता है, जबकि निर्देशांक चूहों की संख्या का प्रतिनिधित्व करता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 12: सीसीडी चूहों की एक्स-रे छवियां। चूहे मॉडल के एक्स-रे इमेजिंग का उपयोग करके सीसीडी निर्माण का सत्यापन। (ए) ऊर्ध्वाधर विमान में लिए गए एक्स-रे को दर्शाता है, और (बी) विमान में लिए गए एक्स-रे को दर्शाता है। दो अलग-अलग क्रॉस-अनुभागीय एक्स-रे "एल" के आकार के स्टेनलेस स्टील रॉड की स्थिति का स्पष्ट दृश्य प्रदान करते हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
| N | मॉडलिंग से पहले | D1 | D3 | D7 | D14 | D17 | D21 | |
| अनुभवहीन | 8 | 18.1±1.4 | 16.8+1.5 | 16.8±1.5 | 18.6±1.7 | 16.8±1.5 | 15.6±1.8 | 16.8±1.5 |
| धोखा | 8 | 18.0±1.7 | 18.6±1.7 | 16.0±1.3 | 17.6±1.7 | 16.8±1.5 | 18.9±1.7 | 16.8±1.5 |
| सीसीडी | 8 | 17.7±1.1 | 10.7±2.8# | 10.0±1.5 | 4.4±2.2 | 3.8±1.7 | 4.1±2.4 | 3.8±2.5 |
| सीसीडी + तुइना | 8 | 18.9±1.7 | 9.8±2.3# | 8.3±1.4 | 4.8±1.2 | 5.8±2.0 | 7.2±1.8* | 7.5±1.8* |
| #पहले और डी 1 मॉडलिंग से तुलना, पी < 0.05। | ||||||||
| * सीसीडी समूह और सीसीडी + ट्यूना समूह के बीच तुलना, पी<0.05। | ||||||||
तालिका 1: पंजा निकासी सीमा, पीडब्ल्यूटी (, एस)। पहले और डी 1 मॉडलिंग से तुलना, # पी < 0.05। सीसीडी समूह और सीसीडी + तुइना समूह के बीच तुलना, * पी < 0.05।
| N | मॉडलिंग से पहले | D1 | D3 | D7 | D14 | D17 | D21 | |
| अनुभवहीन | 8 | 11.9±1.2 | 12.0±1.6 | 12.2±1.9 | 12.4±1.1 | 12.2±1.9 | 12.0±1.4 | 12.0±1.4 |
| धोखा | 8 | 11.9±1.2 | 11.6±1.5 | 12.2±1.9 | 11.6±1.5 | 12.2±0.9 | 11.6±1.5 | 11.6±1.5 |
| सीसीडी | 8 | 10.8±1.1 | 8.9±0.7# | 7.9±0.8 | 7.7±0.5 | 7.8±1.0 | 7.7±0.8 | 7.7±0.8 |
| सीसीडी + तुइना | 8 | 11.3±1.5 | 9.1±0.6# | 8.0±0.7 | 8.3±0.7* | 8.9±0.6* | 9.1±0.7* | 9.2±0.9* |
| #पहले और डी 1 मॉडलिंग से तुलना, पी < 0.05। | ||||||||
| सीसीडी समूह और सीसीडी + ट्यूना समूह के बीच तुलना, * पी < 0.05। | ||||||||
तालिका 2: पंजा वापसी विलंबता, पीडब्ल्यूएल (, एस)। पहले और डी 1 मॉडलिंग से तुलना, # पी < 0.05। सीसीडी समूह और सीसीडी + ट्यूना समूह के बीच तुलना, * पी < 0.05।
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Discussion
हमारे शोध समूह ने प्रारंभिक चरण में ट्यूना हेरफेर के मापदंडों पर प्रासंगिक अध्ययन किया है। सबसे पहले, तुइना हेरफेर के लिए बल तीव्रता निर्धारित करना महत्वपूर्ण है। नैदानिक ट्यूना में, चिकित्सक अपने अनुभव और रोगियों की व्यक्तिपरक भावनाओं के अनुसार बल तीव्रता को समायोजित करते हैं, संचार के माध्यम से सर्वोत्तम ट्यूना प्रभाव प्राप्त करते हैं। हालांकि, यह पशु प्रयोगों में संभव नहीं है। पशु प्रयोगों में, एक "प्रतिक्रिया सीमा" का उपयोग टुइना हेरफेर की तीव्रता को परिभाषित करने के लिए किया जाता है। ये तय करते हैं कि जानवर की सहज प्रतिक्रिया के आधार पर लागू ट्यूना बल उपयुक्त है या नहीं। रैंडल17 ने चूहे की सूजन मॉडल में दर्द व्यवहार का अध्ययन करने के लिए इस विधि का उपयोग किया। अंतर यह है कि रैंडल स्थानीय सूजन क्षेत्र में संचालित होता है, जबकि यह प्रयोग गैर-चोट क्षेत्र में संचालित होता है। भारी ट्यूना हेरफेर चूहों को चीखने और सजगता से बचने के लिए पैदा करेगा। इस भारी बल की तीव्रता की स्थापना यह निर्धारित करती है कि औपचारिक ट्यूना बल तीव्रता इस भारी बल तीव्रता से कम है। 9.93 और 3.018 (चित्रा 11) के औसत और मानक विचलन के साथ 5-25 एन के बीच 150 चूहों के अधिकतम चीख और एस्केप रिफ्लेक्स प्रेसिंग मूल्यों के वितरण के आधार पर, हमारे पिछले काम ने इष्टतम दबाव बल मूल्य की गणना 5 एन की थी। दूसरा, तुइना विधि की परिचालन आवृत्ति को तुइना के विज्ञान में 120-160 बार / मिनट18 के रूप में वर्णित किया गया है। इसलिए, इस प्रयोग में ट्यूना आवृत्ति 2 हर्ट्ज पर सेट की गई थी।
सीसीडी मॉडल एक सर्जिकल मॉडल है जो दर्दनाक हो सकता है, क्योंकि इसके लिए आर्टिकुलर प्रक्रिया और इंटरवर्टेब्रल फोरमेन के संपर्क में आने की आवश्यकता होती है। इसलिए, चूहों को सर्जरी के बाद ठीक होने के लिए 1-3 दिनों की आवश्यकता होती है। साहित्य और प्रारंभिक प्रयोगात्मक डेटा दोनों के अनुसार, सर्जरी के बाद चौथे दिन चूहों का दर्द व्यवहार स्थिर होता है। यह ट्यूना हस्तक्षेप के एनाल्जेसिक प्रभाव का निरीक्षण करने के लिए एक अनुकूल समय प्रदान करता है। हालांकि, लंबे समय तक ट्यूना चूहों के एनाल्जेसिक प्रभाव के लिए फायदेमंद नहीं हो सकता है और ऊतक क्षति का कारण बन सकता है। इस अध्ययन ने 5, 15 और 30 मिनट के लिए ट्यूना और गूंधने के एनाल्जेसिक प्रभावों की तुलना की, और अंततः हस्तक्षेप की इष्टतम अवधि के रूप में 15 मिनट को चुना।
इस पद्धति की सीमाएं हैं, क्योंकि नैदानिक संचालन के केवल एक हिस्से का उपयोग जोड़तोड़ और शरीर के अंगों का चयन करने के लिए किया गया था। बीएल 57 (चेंगशान) चूहों के ट्राइसेप्स सुरा में स्थित है, और यह एल 4 और एल 519 के पृष्ठीय रूट गैन्ग्लिया द्वारा आंतरिक है। चूंकि ट्राइसेप्स सुरे की मांसपेशियां मोटी और ट्यूना के लिए उपयुक्त होती हैं, इसलिए इस क्षेत्र की मालिश करने से चूहे के काठ के कशेरुक में एल 4 और एल 5 के पृष्ठीय रूट गैन्ग्लिया पर सीधा प्रभाव पड़ सकता है जो प्रयोगात्मक नमूने के लिए उपयोग किया जाता है।
मोल्डिंग प्रक्रिया के दौरान, एक्स-रे सत्यापन करके सीसीडी दर्द मॉडल में एल 4 और एल 5 के इंटरवर्टेब्रल फोरामिना में "एल" आकार के स्टेनलेस स्टील रॉड के सटीक सम्मिलन को सुनिश्चित करने की आवश्यकता होती है। एक्स-रे लेने से पहले, हमने चूहों को एनेस्थेटाइज करने के लिए इंट्रापरिटोनियल 25% अवधि संज्ञाहरण (0.6 एमएल / 100 ग्राम) प्रशासित किया। एक्स-रे ने एल 4 और एल 5 (चित्रा 12) के इंटरवर्टेब्रल फोरमिना में "एल" आकार के स्टेनलेस स्टील रॉड के सफल सम्मिलन की पुष्टि की।
कुल मिलाकर, इस अध्ययन ने ट्यूना उपचार संचालन को देखने और सीसीडी चूहों पर ट्यूना के चिकित्सीय प्रभावों का मूल्यांकन करने पर ध्यान केंद्रित किया। टीम ने यह पता लगाने के लिए एक पशु प्रयोग किया कि ट्यूना मापदंडों को कैसे सेट किया जाए, उपयुक्त भागों का चयन किया जाए, और उपयुक्त उपचार समय निर्धारित किया जाए। यह ट्यूना के एनाल्जेसिक प्रभाव पर भविष्य के शोध के लिए एक मानकीकृत और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य पशु मॉडल हस्तक्षेप प्रदर्शन प्रदान करता है।
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Disclosures
लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है।
Acknowledgments
यह काम शंघाई क्रिटिकल क्लिनिकल स्पेशलिटीज कंस्ट्रक्शन प्रोजेक्ट (अनुदान संख्या: Shslczdzk04001) द्वारा समर्थित था; शंघाई विज्ञान और प्रौद्योगिकी आयोग के नौकायन कार्यक्रम (अनुदान संख्या: 22YF1444300); पारंपरिक चीनी चिकित्सा के शंघाई विश्वविद्यालय के बजट के भीतर परियोजनाएं (अनुदान संख्या: 2021 एलके091)।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| "L" stainless steel rod (4 mm long and 0.4 mm in diameter) | hand-made | / | For CCD models making |
| ALMEMO admeasuring apparatus | ahlborn | 2450-1 | Mechanical Withdrawal Threshold test |
| Constant temperature slicer CM-1900 | Leica | 1491950C1US | For specimen production |
| Disinfectant (iodine) 100 mL/bottle | LIRCON/Shandong Lilkang | / | For disinfection |
| Disposable sterile syringe 5 mL | Shanghai Misha Wa Medical Industry | / | For injection |
| Electron microscope CX-31 | Olympus, Japan | BJ002318 | For specimen observation |
| Finger pressure recordings | Suzhou Changxian Optoelectronic Technology | CX1003w | For Tuina manipulation |
| Foam board (35 cm x 20 cm) | hand-made | / | It is our homemade apparatus for fixing rats |
| MERSILK W2512 | Johnson & Johnson | / | For tissue suture |
| Neutral balsam | Sinopharm Chemical Reagent | 10004160 | For specimen production |
| paraformaldehyde | China National Chemical Reagent | / | For specimen production |
| Pentobarbital sodium | Sigma-Aldrich | P3761 | For anesthesia of rat |
| Plantar Test Apparatus (Hargreaves Method) for Mice and Rats | IITC Life Science | / | Paw Withdrawal Latency |
| Precision electronic scale for experiment JY3002 | Shanghai Precision Scientific Instrument | / | Weighing of rat |
| Rat hair clipper | Philips | HP6341/00 | Shaving of rat fur |
| Restrainer for rats | Tongji University (self-made) | / | It is a homemade apparatus made by Tongji University, which can effectively immobilize the rats and fully expose their hind limbs. |
| Tissue-Tek O.C.T. Compound | SAKURA | 4583 | For specimen production |
| Uratan | China National Chemical Reagent | / | For anesthesia of rat |
| X-ray detector XR-600 | Dongguan Kaso Electronic Technology | / | Examination of CCD models |
| xylene | Shanghai Sinopharm Group | 100092 | For specimen production |
References
- Vos, T., et al. national incidence, prevalence, and years lived with disability for 328 diseases and injuries for 195 countries, 1990-2016: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2016. The Lancet. 390 (10100), 1211-1259 (2017).
- Amin, R. M., Andrade, N. S., Neuman, B. J.
- Stochkendahl, M. J., et al. National Clinical Guidelines for non-surgical treatment of patients with recent onset low back pain or lumbar radiculopathy. European Spine Journal. 27 (1), 60-75 (2018).
- Bostelmann, R., Steiger, H. J. Comment on "An evidence-based clinical guideline for the diagnosis and treatment of lumbar disc herniation with radiculopathy". The Spine Journal. 14 (9), 2273 (2014).
- Tang, J., et al. Effect of bone-setting massage combined with acupuncture and moxibustion on simple lumbar disc herniation and its effect on pain and sensory disorder of lower limbs. Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine. 38 (10), 244-247 (2020).
- Lin, X. -Y., Yang, J., Li, H. -M., Hu, S. -J., Xing, J. -L. Dorsal root ganglion compression as an animal model of sciatica and low back pain. Neuroscience Bulletin. 28 (5), 618-630 (2012).
- Shi, C., et al. Animal models for studying the etiology and treatment of low back pain. Journal of Orthopaedic Research: Official Publication of the Orthopaedic Research Society. 36 (5), 1305-1312 (2018).
- Zhao, X. -y, et al. Effect of Tuina on the expression of TNF-α,IL-6,TGF-β1 and CTGF in the degenerative tissue of rabbits′lumbar intervertebral disc. Journal of Chengdu Medical College. 14 (6), 741-745 (2019).
- Zhang, L., Li, Z. -y, Yu, Z. -y, Yue, X. -y, Fu, R. -y Effect of GABA and GABAAR in analgesic loop of CCI rats by pressing manipulation based on "Taking Tenderness as Acupoints" theory. Journal of Shanghai University of Traditional Chinese Medicine. 28 (3), 50-53 (2014).
- Long, B. -cal, et al. Analgesic effect of massage on rats with neuropathic pain and its mechanism. Guangxi Medical Journal. 44 (17), 2003-2009 (2022).
- Al-Bedah, A., Ali, G., Aboushanab, T., Qureshi, N. Tui Na (or Tuina) massage: A minireview of pertinent literature, 1970-2017. Journal of Complementary and Alternative Medical Research. 3, 1-14 (2017).
- Au, D. W. H., et al. Effects of acupressure on anxiety: a systematic review and meta-analysis. Acupuncture in Medicine: Journal of the British Medical Acupuncture Society. 33 (5), 353-359 (2015).
- Hsiung, W. -T., Chang, Y. -C., Yeh, M. -L., Chang, Y. -H. Acupressure improves the postoperative comfort of gastric cancer patients: A randomised controlled trial. Complementary Therapies in Medicine. 23 (3), 339-346 (2015).
- Wu, S., et al. Neural interconnection between acupoint "Chéngshān (BL57)" and sciatic nerve in the rat. World Journal of Acupuncture - Moxibustion. 31 (2), 129-135 (2021).
- Banik, R. K., Kabadi, R. A. A modified Hargreaves method for assessing threshold temperatures for heat nociception. Journal of neuroscience methods. 219 (1), 41-51 (2013).
- Cheah, M., Fawcett, J. W., Andrews, M. R. Assessment of Thermal pain sensation in rats and mice using the hargreaves test. Bio-protocol. 7 (16), e2506 (2017).
- Randall, L. O., Selitto, J. J. A method for measurement of analgesic activity on inflamed tissue. Archives Internationales De Pharmacodynamie Et De Therapie. 111 (4), 409-419 (1957).
- Yan, J. -t Science of Tuina. , Traditional Chinese Medicine Publishing House. (2003).
- Himes, B. T., Tessler, A. Death of some dorsal root ganglion neurons and plasticity of others following sciatic nerve section in adult and neonatal rats. The Journal of Comparative Neurology. 284 (2), 215-230 (1989).
