Summary
Aquí, presentamos un método mejorado de fijación de la suspensión utilizando una chaqueta de rata para inmovilizar eficazmente a las ratas durante los experimentos de acupuntura. Además, se dilucida la estructura y aplicación de este aparato de fijación, así como las instrucciones y evaluación para su utilización en la terapia de electroacupuntura.
Abstract
En la investigación experimental básica de acupuntura, las ratas se utilizan comúnmente como animales de laboratorio. Sin embargo, es difícil para ellos mantener una postura fija. Durante los procedimientos de electroacupuntura, la inmovilización adecuada de las ratas es esencial. Actualmente se utilizan varios métodos de fijación de ratas, incluida la fijación con anestesia, la fijación con plataforma alta, la fijación con ataduras y la fijación con un abrigo de rata hecho por uno mismo. Sin embargo, estos métodos tienen sus limitaciones, que pueden afectar la eficiencia y operatividad del experimento hasta cierto punto. Este protocolo introduce un método para suspender y fijar ratas utilizando ropa de rata. En primer lugar, las ratas se visten con chaquetas de rata que coinciden con la forma de su cuerpo, aprovechando su preferencia por la oscuridad y las madrigueras. La operación de punción se puede llevar a cabo después de que las ratas se hayan puesto ropa de rata. Cuando están suspendidas, las ratas están relativamente quietas, ya que sus extremidades no pueden moverse. Este método de fijación no solo ofrece beneficios económicos y fáciles de usar, sino que también garantiza una fijación estable y confiable de las ratas en una posición cómoda y relajada. También minimiza eficazmente el consumo de tiempo, el espacio experimental y los recursos de mano de obra. Además, este método permite la exposición de la mayoría de los puntos de acupuntura utilizados para la acupuntura en ratas. Este artículo se concentra principalmente en la composición del dispositivo, que abarca una chaqueta de rata especialmente diseñada, un bastidor de fijación elevado y sus estructuras de conexión. Además, se presentará un ejemplo ilustrativo para demostrar la aplicación del método de fijación de suspensión basado en ropa de rata en procedimientos de electroacupuntura de ratas.
Introduction
La acupuntura es una terapia tradicional que se caracteriza por la punción en puntos de acupuntura específicos u otras posiciones para prevenir y tratar enfermedades. La electroacupuntura combina agujas filiformes con estimulación eléctrica1, lo que permite un control preciso sobre la cantidad de estimulación mediante el ajuste de los parámetros relevantes, promoviendo la estandarización del tratamiento de acupuntura2. En los últimos años, las investigaciones sobre los mecanismos de la electroacupuntura han continuado ampliándose y profundizándose3,4, lo que ha llevado a un aumento anual de los estudios centrados en los mecanismos de la electroacupuntura5.
En la investigación básica sobre electroacupuntura, las ratas son los animales más utilizados. Durante el tratamiento de electroacupuntura, el receptor debe permanecer quieto para garantizar un procedimiento sin problemas. A diferencia de los ensayos clínicos con sujetos humanos, los animales pequeños utilizados en experimentos con animales no pueden seguir órdenes conscientemente durante procedimientos de electroacupuntura de 15 a 30 minutos de duración. Esto presenta a los investigadores el desafío principal de lograr una fijación estable y confiable. La fijación inadecuada puede conducir a emociones negativas como ansiedad, depresión y miedo en animales6, lo que no solo aumenta el riesgo de lesiones para las ratas y la posibilidad de ser mordido para el personal experimental, sino que también afecta la estabilidad y la persuasión de los resultados de la investigación.
En estudios previos, los investigadores a menudo han utilizado la fijación de anestesia7, la fijación de plataforma alta8, la fijación de unión 6,9 o la fijación de capa de rata10 antes de las operaciones de acupuntura o electroacupuntura. Sin embargo, dados los efectos de la anestesia sobre el cuerpo11 y la función cerebral12, y considerando que la acupuntura se realiza en pacientes conscientes en casos clínicos, la anestesia puede afectar los resultados de la investigación hasta cierto punto. Por lo tanto, en comparación con la fijación con anestesia, la fijación cómoda de ratas en estado despierto es una mejor opción.
Sin embargo, en el estado no anestesiado, varios métodos de fijación también poseen sus respectivas limitaciones, incluyendo la exposición restringida al punto de acupuntura debido a la cobertura del pelaje de rata en ratas 10, la necesidad de al menos dos individuos para realizar la operación13, el tamaño del fijador no ajustable14 o el estado de estrés de las ratas en una posición forzada6. Para abordar estos problemas técnicos, diseñamos una chaqueta de rata y un estante de fijación adecuado para la manipulación de acupuntura en la mayoría de las partes del cuerpo de la rata. Esto puede ayudar a los investigadores a llevar a cabo procedimientos de acupuntura con ratas de manera eficiente.
La justificación de este protocolo es la siguiente: en primer lugar, el casco cerrado de la chaqueta de la rata aprovecha la inclinación natural de las ratas por la oscuridad y la madriguera, restringiendo así su rango de actividades. En segundo lugar, las cuerdas de sujeción cerca de las articulaciones de las extremidades de las ratas proporcionan una restricción de compresión física, imponiendo ciertas limitaciones a sus movimientos. Sin embargo, las ratas aún pueden saltar y moverse horizontalmente incluso mientras usan la chaqueta. Por último, dado que las ratas no pueden tocar el suelo sin un punto de fuerza fijo cuando están suspendidas, añadimos un dispositivo de fijación de la suspensión a la chaqueta de la rata, restringiendo aún más sus movimientos y asegurando la retención de la aguja. La composición del dispositivo de fijación se muestra en la Figura 1.
Figura 1: Diagrama esquemático de la chaqueta de rata y la fijación de la suspensión. (A) La apariencia general de la chaqueta de rata en una vista plana. (B) Vista tridimensional de la chaqueta de rata. (C) Chaqueta de rata especialmente hecha a medida con una incisión cerca de los puntos de acupuntura en la cabeza y la cintura trasera. (D) Ilustración de varias ratas suspendidas simultáneamente en el estante elevado. 1: Vista general de la tela; 2: Salida de las extremidades anteriores; 3: Salida de las extremidades posteriores; 4: Cuerda de amarre; 5: Cavidad formada después de la sutura; 6: Incisión para exponer los puntos de acupuntura de la cabeza; 7: Incisión para exponer los puntos de acupuntura de espalda y cintura. 8: Posición de sutura. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
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Protocol
Todos los procedimientos realizados en las ratas en este estudio se adhirieron a la Norma Nacional para el Bienestar de los Animales de Laboratorio y las Pautas de Revisión Ética (2018) adoptadas oficialmente por la República Popular China y la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio de las Academias Nacionales Press15. Este protocolo se compone de tres pasos principales. En primer lugar, las chaquetas para ratas se confeccionan y ajustan en función de las formas corporales individuales de las ratas con diferentes pesos. A continuación, la manipulación de la acupuntura se lleva a cabo siguiendo los procedimientos estándar. Por último, las ratas están suspendidas en sus chaquetas mientras las agujas permanecen en su lugar para adaptarse a la necesidad de intervenciones simultáneas entre ratas dentro del mismo grupo.
1. Preparación previa a la punción
- Producción de la chaqueta de rata
- Pesa a las ratas y mide la forma de su cuerpo antes de hacer sus chaquetas. Para verificar la idoneidad de este protocolo para ratas de diferentes pesos, seleccione ratas que pesen 220 g, 300 g, 400 g y 520 g para mediciones independientes de sus dimensiones corporales, que abarquen medidas de a a f, como se muestra en la Figura 2.
NOTA: La correlación entre las proporciones corporales de las ratas y sus correspondientes tamaños de chaqueta también se presenta en la Figura 2. Los parámetros pertinentes de longitud corporal para ratas de diferentes pesos se registran en la Tabla 1. - Corta un pedazo rectangular de tela gruesa y oscura para hacer una chaqueta de rata. Usa la tela con un ancho desplegado igual a la circunferencia medida alrededor de la parte más gruesa del abdomen de la rata. La longitud de la tela es igual a la distancia desde la punta de la nariz de la rata hasta la base de su cola (ver Figura 2).
- Dobla la tela por la mitad y corta la esquina superior izquierda en un ángulo de aproximadamente 45°-65° para formar un trapecio derecho (ver Figura 3A).
- Cose bien los dos lados de la izquierda con hilo de algodón. Consulte la Figura 1B y la Figura 3B para obtener orientación.
- Corta dos agujeros pequeños, uno a cada lado de la tela, para que pasen las extremidades superiores e inferiores de la rata (véase la figura 3C). La distancia entre las dos extremidades superiores determina el espacio entre los agujeros superiores de la chaqueta de rata. La distancia entre las dos extremidades inferiores determina el espacio entre los orificios inferiores de la chaqueta de rata.
- Usa la distancia longitudinal entre la axila de la rata y la parte delantera del ilion para que sirva como espacio entre los orificios superior e inferior de la chaqueta de la rata. Usa la circunferencia de la articulación del hombro para determinar la circunferencia del orificio superior de la chaqueta de rata. Usa la circunferencia de la articulación de la cadera para la circunferencia del orificio inferior de la chaqueta de rata.
- Al lado de cada agujero, cose una correa de tela larga que se pueda cruzar y envolver firmemente alrededor del cuerpo desde el extremo de apertura de la chaqueta para fijar la rata.
- Pesa a las ratas y mide la forma de su cuerpo antes de hacer sus chaquetas. Para verificar la idoneidad de este protocolo para ratas de diferentes pesos, seleccione ratas que pesen 220 g, 300 g, 400 g y 520 g para mediciones independientes de sus dimensiones corporales, que abarquen medidas de a a f, como se muestra en la Figura 2.
- Método de uso de la chaqueta de rata
- Usa guantes antes de proceder a vestir a la rata con la chaqueta. Comienza sosteniendo la parte central y trasera de la chaqueta de rata con una mano sobre la mesa. Con la otra mano, sostén la cola de la rata de su jaula de alimentación y colócala suavemente en la chaqueta.
- A medida que la rata avanza, su cabeza alcanzará el casco de la chaqueta. En este punto, usa ambas manos para sacar con cuidado las extremidades superiores izquierda y derecha de los agujeros de la chaqueta.
- Toma la cuerda de atar del extremo de la abertura de la chaqueta, crúzala de izquierda a derecha y envuélvela firmemente alrededor del tronco de la rata. Átalo firmemente en el lado opuesto del tronco para asegurar una fijación adecuada. Después de sujetar las extremidades superiores de la rata, repita el mismo procedimiento para fijar sus extremidades inferiores.
- Toma precauciones para evitar que te muerdan o arañen las garras de la rata cuando saques sus extremidades de los agujeros de la chaqueta. Asegúrese de que la tensión de la cuerda esté bien ajustada, es decir, no demasiado apretada para causar isquemia local de las extremidades e hipoxia en ratas, y no demasiado floja, permitiendo que la rata escape fácilmente (ver Video 1).
- Rejilla de fijación y ganchos de hierro en forma de S
- La rejilla de fijación consta de dos bandejas de hierro pesado (24 cm de largo, 12 cm de ancho y 2 cm de alto) y una columna de hierro (60 cm de largo) que está firmemente soldada en cada bandeja. Fije un palo de hierro sólido (145 cm de longitud) a la misma altura en las dos columnas de hierro utilizando una estructura de conexión por tornillo que se pueda ajustar y mantener a una altura fija (ver Figura 4A).
- Para conectar la rata que lleva la chaqueta al palo de hierro, utilice los ganchos en forma de S (11 cm de diámetro). Envuelve un extremo del gancho alrededor de la correa de la chaqueta mientras el otro extremo está colgado en el palo de hierro. Usa dos ganchos en forma de S para asegurar a la rata en el palo. Consulte la Figura 1D y la Figura 4B para conocer la estructura general.
Figura 2: Diagrama correspondiente de la forma del cuerpo de la rata y el tamaño de la chaqueta de la rata coincidente. En el diagrama, el parámetro a representa la distancia transversal en la parte posterior de la articulación entre las extremidades superiores y el tronco de la rata. Este valor se utiliza como medida de espaciamiento entre los orificios de penetración para las extremidades superiores de la chaqueta de rata. Del mismo modo, el parámetro b representa la distancia transversal en la espalda donde las extremidades inferiores bilaterales de la rata se conectan con el tronco. Esta medida determina el espaciado de los orificios de penetración para las extremidades inferiores de la chaqueta de rata. El parámetro c significa la circunferencia de la parte más gruesa del abdomen de la rata, que se puede utilizar como medida de ancho para la tela de la chaqueta de la rata. El parámetro d representa la distancia desde la axila de la rata hasta la parte delantera de su ilion, determinando la distancia longitudinal entre los orificios superior e inferior de la chaqueta. El parámetro e corresponde a la distancia longitudinal desde la punta de la nariz de la rata hasta la base de su cola, sirviendo como medida de longitud para la tela de la chaqueta de la rata. El parámetro f denota la circunferencia de la articulación que conecta la extremidad superior y el tronco de la rata, sirviendo como la circunferencia del orificio por el que pasan las extremidades superiores. El parámetro g representa la circunferencia de la articulación que conecta las extremidades inferiores y el tronco de la rata, determinando la circunferencia del orificio por el que pasan las extremidades inferiores. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
| Peso corporal (g) | Parámetros de la forma del cuerpo (cm) | ||||||
| un | b | c | d | e | f | g | |
| 220 | 6.0 | 7.0 | 15.0 | 8.0 | 19.0 | 5.0 | 7.0 |
| 300 | 7.0 | 7.5 | 17.0 | 10.0 | 21.0 | 6.0 | 8.0 |
| 400 | 8.0 | 8.5 | 19.0 | 11.5 | 23.0 | 6.5 | 9.0 |
| 520 | 8.0 | 10.0 | 20.0 | 12.5 | 26.0 | 7.0 | 9.5 |
Tabla 1. Los resultados de la medición de los parámetros de forma corporal de ratas con diferentes pesos corporales.
Figura 3: Diagrama que muestra la apariencia física y el uso de la chaqueta de rata. (A) Vista exterior del plano de la chaqueta de rata. La forma de la chaqueta de la rata se asemeja a un trapecio en ángulo recto, con aberturas separadas en los lados izquierdo y derecho para que pasen las extremidades superiores e inferiores de la rata. (B) Vista exterior desplegada de la chaqueta de rata. El cierre del arnés crea una cavidad semicerrada, que sirve como un componente crucial para atraer a las ratas a entrar. (C) Vista lateral de una rata vestida con la chaqueta. Una vez que las extremidades de la rata pasan a través de las aberturas de la ropa, las correas se cruzan sobre la superficie ventral del tronco y se sujetan firmemente en la parte posterior con la tensión adecuada. Esto asegura que la rata esté relativamente inmovilizada. (D) Vista abdominal de una rata vestida con la chaqueta de rata. La superficie ventral de la chaqueta expone la piel abdominal de la rata, lo que permite un acceso conveniente para la acupuntura en los puntos ventrales. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Vídeo 1: Poniéndose la chaqueta de rata. Este video muestra un proceso típico de vestir a la rata con la chaqueta. Haga clic aquí para descargar este video.
Figura 4: Diagrama que muestra la apariencia física y el uso de la rejilla de fijación elevada. (A) Bastidor de fijación elevado. Esta estantería consta principalmente de dos columnas verticales de hierro (60 cm de longitud) soldadas a cada bandeja, junto con un largo palo de hierro horizontal (145 cm de longitud) colocado paralelo al suelo. Los tornillos se utilizan para asegurar el palo horizontal a la misma altura que las columnas verticales. (B) Suspensión de ratas en el bastidor de fijación. Las ratas que llevan las chaquetas para ratas se sujetan de forma segura a la rejilla de fijación mediante dos ganchos en forma de S por rata. (C) Tratamiento simultáneo de electroacupuntura en múltiples ratas. Para evitar cualquier interferencia potencial resultante del movimiento de la cola, fue necesario mantener un espacio adecuado entre las ratas, equivalente a la longitud de la cola de una rata. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
2. Procedimiento de electroacupuntura
- Preparación rutinaria
- Coloque la rejilla de fijación sobre un escritorio horizontal o en el suelo.
- Antes del procedimiento de punción, retire el pelo alrededor de los puntos de acupuntura con una afeitadora eléctrica para garantizar una exposición completa. Cuando el punto de acupuntura a perforar se encuentra en el abdomen de la rata, como Guanyuan (CV4, unos 25 mm por debajo del ombligo), acorte el ancho de la ropa de la rata de manera adecuada para exponer los puntos de acupuntura abdominales.
- Localice el punto de acupuntura desde el espacio en la línea media del abdomen que no está cubierto por la chaqueta de rata (véase la figura 3D) y luego inyecte la aguja.
- Cuando los puntos de acupuntura que se van a perforar están en la cabeza de la rata, como el Baihui (GV20, ubicado en el centro del hueso parietal), haga una pequeña incisión en la posición correspondiente en la cabeza para exponer completamente la piel alrededor de GV20 (Ver Figura 1C).
- Al acupunturar puntos de acupuntura en las extremidades de ratas, como Neiguan (PC6, en la cara interna de la extremidad anterior, entre las suturas radial y cubital a unos 3 mm de distancia de la articulación de la muñeca) en la extremidad superior o Zusanli (ST36, en el lado posterolateral de la articulación de la rodilla, a unos 2 mm por debajo de la cabeza del peroné) en la extremidad inferior, Debido a la exposición obvia de los puntos de acupuntura, use una mano para ayudar a fijar la extremidad, mientras que la otra puede realizar directamente la operación de acupuntura.
- Cuando el punto de acupuntura se encuentra en la espalda o la cintura de una rata, como Shenshu (BL23, debajo de la 2ª vértebra lumbar, a 6 mm de distancia de la línea media de la espalda), corte una abertura de aproximadamente 2 cm de ancho en el centro de la chaqueta de la rata para exponer completamente la piel del sitio correspondiente (ver Figura 1C).
- Viste a la rata con la chaqueta. Después de desinfectar la piel local de los puntos de acupuntura con hisopos con alcohol, comience el procedimiento de acupuntura.
- Técnica de punción: Localice el punto de acupuntura con precisión. Inserte una aguja de acupuntura desechable estéril (0,16 mm x 7 mm) en el punto de acupuntura de la rata a la profundidad adecuada.
- Operación de electroacupuntura
- Enrolle el alambre del electrodo alrededor de la varilla de hierro horizontal. Este paso reduce el riesgo de que la aguja se caiga debido a la fuerza gravitacional que actúa sobre el clip de electroacupuntura. Luego, coloque el extremo del alambre del electrodo de forma segura en el mango de la aguja.
- Encienda la alimentación y seleccione los parámetros de frecuencia, corriente y tiempo adecuados. En este experimento, los parámetros se ajustaron a 2 Hz, 1 mA y 15 min. Una vez ajustados los parámetros, comience el proceso de tratamiento de electroacupuntura (Ver Video 2 y Video 3).
- Electroacupuntura simultánea en ratas: Durante el tratamiento, suspenda a las ratas del mismo grupo juntas en el palo de hierro utilizando los ganchos en forma de S y deje que se sometan a una intervención de electroacupuntura simultáneamente.
- NOTA: El palo de hierro no solo debe ser resistente, sino también lo suficientemente largo como para tratar a un grupo de ratas al mismo tiempo. En este experimento, al tiempo que se garantiza un espaciamiento adecuado y no hay interferencia entre las ratas, se pueden tratar 3-4 ratas simultáneamente (véase la Figura 4C).
- Observación de las respuestas de las ratas durante el tratamiento de electroacupuntura: Evalúe la idoneidad de este método de fijación para la electroacupuntura en ratas en función de los siguientes factores, como el número de personal necesario para completar la operación, el tiempo necesario para reparar una rata, la respuesta de las ratas durante el tratamiento de electroacupuntura, el número de agujas que se cayeron durante el procedimiento y cualquier muerte accidental que pueda ocurrir durante la operación.
- Extracción de las agujas
- Una vez que se complete el tiempo preestablecido, el aparato de electroacupuntura se apagará automáticamente. Retire el pequeño clip que está conectado al mango de la aguja y retire con cuidado la aguja de acupuntura de debajo de la piel de la rata, concluyendo así el proceso de tratamiento de electroacupuntura.
- Afloja las correas, levanta la cubierta de la cabeza de la chaqueta de la rata y colócala encima de la jaula. La rata será entonces libre de liberarse de la chaqueta y entrar en la jaula de forma independiente (ver Video 4).
Vídeo 2. Puntos de acupuntura con punción en la región lumbar. Este video muestra el procedimiento completo y coherente que abarca el atuendo de la rata en la chaqueta, la inserción de agujas de acupuntura en los puntos de acupuntura en la cintura y la posterior conexión de un aparato de electroacupuntura. Haga clic aquí para descargar este video.
Vídeo 3. Puntos de acupuntura con punción en el abdomen y las extremidades inferiores. Este video muestra el procedimiento completo y coherente que abarca el atuendo de la rata en la chaqueta, la inserción de agujas de acupuntura en puntos de acupuntura ubicados en el abdomen y la extremidad inferior, y la posterior conexión de un aparato de electroacupuntura. Haga clic aquí para descargar este video.
Vídeo 4. Quitarse la chaqueta de rata. Este video muestra la práctica habitual de quitarle la chaqueta a la rata. Haga clic aquí para descargar este video.
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Representative Results
En este experimento, se seleccionaron un total de 12 ratas para el tratamiento de electroacupuntura, y se observaron sus reacciones bajo el método de fijación (como se muestra en la Tabla 2). Entre las 12 ratas, solo 1 rata mostró una lucha intensa durante el período de retención de la aguja de electroacupuntura de 15 minutos. Como resultado de sus vigorosos movimientos, la aguja se desprendió a mitad de camino, representando el 8,33% del número total de ratas. Este resultado sugiere que el método de fijación utilizado generalmente demuestra un grado notable de estabilidad y confiabilidad. A pesar de la lucha exhibida por una rata, la mayoría de las ratas del grupo mantuvieron una fijación adecuada de la aguja durante todo el tratamiento. Además, durante los 2 meses que duró el experimento en los que se empleó este método para inmovilizar ratas para el tratamiento con electroacupuntura, no se registraron casos de mortalidad de ratas, lo que sugiere la seguridad de este método de fijación para ratas.
Además, en la Tabla 3, comparamos este método de fijación con otros cuatro métodos reportados en la literatura 9,10,13,14. En primer lugar, en términos de estabilidad, aparte de la estabilidad ligeramente inferior del quinto método que utiliza una fijación de portaratas de nueva creación, los otros métodos lograron una fijación relativamente segura. En términos de tiempo, el tiempo promedio requerido para fijar una rata usando este método fue más corto que el del método de fijación de columpio de pelaje de rata. En el resto de los métodos no se especificaba el tiempo necesario para la fijación en sus respectivos documentos; por lo tanto, no se proporciona ninguna discusión. En cuanto al número de personal necesario para fijar una rata, tanto este método como el método de suspensión de columpio de abrigo de rata sólo requerían una persona para completar la operación, mejorando así la eficiencia experimental. Sin embargo, en términos del rango de puntos de acupuntura expuestos, la chaqueta de rata especialmente diseñada en este protocolo puede cumplir con los requisitos para exponer la mayoría de los puntos de acupuntura en el cuerpo, mientras que la capa de rata en el método de suspensión oscilante expone principalmente las extremidades. En cuanto a los materiales utilizados para la fijación, los materiales necesarios para este método son relativamente fáciles de obtener tanto en el laboratorio como en el entorno cotidiano. Además, en cuanto a la posición de la rata durante la fijación, la posición natural es evidentemente más cómoda que la posición forzada. En general, este método es similar al método de fijación de la suspensión de columpio de abrigo de rata, pero tiene mejoras específicas en la tela y el diseño de la chaqueta de rata, lo que permite una mayor exposición de los puntos de acupuntura corporales. Además, en comparación con estar suspendido en una correa de tela, este protocolo utiliza tubos de acero más resistentes, lo que reduce los efectos adversos causados por las sacudidas violentas de ratas individuales en otras ratas cuando varias ratas se someten simultáneamente a un tratamiento de electroacupuntura en el estante de fijación. Esto garantiza la estabilidad y fiabilidad de los datos experimentales.
Teniendo en cuenta los factores antes mencionados en conjunto, este enfoque exhibe los beneficios de estabilidad, eficiencia, asequibilidad y comodidad relativa para las ratas, lo que lo convierte en una opción valiosa para la fijación de la inserción de la aguja.
| Método de fijación | Número de ratas en apuros | Porcentaje de ratas con dificultades (%) | Número de ratas con caída de aguja durante el tratamiento | Porcentaje de ratas con caída de la aguja durante el tratamiento (%) | Número de ratas muertas durante la operación | Porcentaje de ratas muertas durante la operación (%) |
| Fijación de la suspensión ligada con el grupo de la chaqueta | 1 | 8.33 | 1 | 8.33 | 0 | 0 |
Tabla 2. Respuesta de ratas fijas durante el tratamiento con electroacupuntura (n=12).
| Número de serie | Método de fijación | ¿Es estable y segura la fijación de ratas? | El tiempo necesario para arreglar una rata | Número de personal necesario para arreglar una rata | La ubicación y el alcance de los puntos de acupuntura que se pueden exponer | Accesibilidad de accesorios o materiales | Comodidad de los métodos fijos para ratas: posición natural o forzada | Referencias | |||||||||||||||
| 1 | Fijación de la suspensión atada con camisa en nuestro experimento | √ | 50-63 s | 1 | Abdomen, cabeza, espalda y cintura, extremidades | Disponibles | Posición natural | ||||||||||||||||
| 2 | Un marco de fijación para acupuntura y moxibustión para la combinación de puntos de acupuntura Shu-Mu (una selección de puntos de acupuntura que combina los puntos de alarma con los puntos de transporte de la espalda) | √ | / | / | Cabeza, extremidades, espalda y cintura | El marco de fijación debe personalizarse | Posición forzada | 9 | |||||||||||||||
| 3 | Método de fijación de ratas oscilantes atadas con pelaje | √ | 85-93 s | 1 | Partes de las extremidades | Disponibles | Posición natural | 10 | |||||||||||||||
| 4 | Un dispositivo de fijación de ratas hecho de una vieja cubierta de jaula de malla | √ | / | ≥2 | El rango de puntos de acupuntura no está limitado | Disponibles | Posición forzada | 13 | |||||||||||||||
| 5 | Un portaratas de nueva fabricación | Después de la fijación, las extremidades delanteras y traseras de las ratas todavía tienen un cierto grado de movilidad. Además, existe un cierto riesgo de que el punto de intersección de la varilla de fijación del cuello en las ratas sea demasiado alto, lo que puede provocar asfixia en las ratas. Si es demasiado bajo, la fijación de la cabeza de las ratas puede ser inestable. | / | / | El rango de puntos de acupuntura no está limitado | El soporte para ratas requiere una personalización especial | Posición natural | 14 | |||||||||||||||
Tabla 3. Resultados comparativos de diferentes métodos de fijación en el experimento de acupuntura y moxibustión en ratas.
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Discussion
Se ha demostrado que la electroacupuntura tiene buenos efectos terapéuticos en diversas enfermedades como el deterioro cognitivo 16,17, la lesión miocárdica18 y el dolor inflamatorio19. Para comprender su mecanismo de acción, se han llevado a cabo experimentos con animales utilizando principalmente ratas. La fijación de los animales durante los procedimientos es crucial para obtener resultados precisos. Si bien muchos estudios han administrado electroacupuntura después de la anestesia animal, esta práctica puede impedir la función cerebral y comprometer la precisión experimental. Además, la administración prolongada de anestesia alarga el procedimiento de punción y aumenta las posibilidades de mortalidad de los animales. Sin embargo, los métodos de fijación no anestésicos reportados también tienen limitaciones, las cuales han sido discutidas cuidadosamente en la Tabla 3.
Este estudio presenta un protocolo novedoso que introduce una chaqueta de rata hecha a medida junto con una rejilla de fijación elevada. El aspecto crucial de este protocolo consiste en crear chaquetas para ratas con tamaños apropiados en función de las formas corporales de las ratas y personalizarlas aún más de acuerdo con la ubicación específica de los puntos de acupuntura que se van a pinchar. Un consejo útil para ajustar la chaqueta de la rata es utilizar la inclinación natural de la rata por la oscuridad y la excavación para animarla a entrar en el casco. Una vez que la cabeza de la rata está asegurada, los procedimientos de fijación posteriores se vuelven mucho más simples.
Después del entrenamiento adaptativo, las ratas demostraron una incomodidad mínima mientras utilizaban esta técnica. Los materiales necesarios para el equipo, como telas, ganchos en forma de S, palos de hierro y otros materiales, son fácilmente accesibles y rentables, lo que facilita una reducción de los gastos experimentales. Otra ventaja es que la tensión de las correas de la chaqueta de rata se puede ajustar según el tamaño de la rata, lo que la hace flexible y controlable. Toda la operación de fijación puede ser completada por una persona de forma independiente, y la configuración elevada del dispositivo permite a los investigadores tratar a un grupo de animales pequeños simultáneamente, mejorando así significativamente la eficiencia experimental, reduciendo el tiempo dedicado a todo el experimento y minimizando las discrepancias entre el mismo grupo de animales. Además, la plataforma elevada evita la necesidad de una mesa, ya que se puede colocar directamente en un terreno nivelado, optimizando así el aprovechamiento del espacio. Además, estos diseños pueden modificarse y ampliarse para su uso en otros animales de experimentación, como los conejillos de indias, y también pueden emplearse eficazmente en el tratamiento de la moxibustión.
Una limitación potencial de este enfoque es el requisito de que los investigadores posean un alto nivel de competencia en la técnica, así como la necesidad de crear chaquetas de rata de diferentes dimensiones adaptadas a la longitud del cuerpo y el espacio de las extremidades de cada rata. Además, es inevitable que algunas ratas experimenten una leve incomodidad y estrés tras la exposición inicial a la chaqueta de rata y la fijación de la suspensión. En consecuencia, se vuelve imperativo implementar el entrenamiento adaptativo para ratas sometidas a tratamiento de electroacupuntura. Además, es imperativo manipular a estas ratas con precaución durante el procedimiento, empleando caricias suaves para calmarlas y calmarlas en casos de agitación o incumplimiento. Vale la pena señalar que para minimizar el impacto del estrés inevitable en la condición física y los experimentos conductuales de las ratas, el grupo de control (incluido un grupo de control en blanco y un grupo de control modelo) también debe someterse a la misma cantidad de manipulación, vendaje de la chaqueta de la rata y fijación elevada al mismo tiempo que el grupo de tratamiento con electroacupuntura. incluso si no están recibiendo tratamiento de electroacupuntura.
En resumen, este método de fijación nos proporciona una opción cómoda y eficaz para inmovilizar ratas, lo que asegura una garantía fiable para un funcionamiento estable y fluido de la acupuntura y el proceso de retención de la aguja.
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Disclosures
Todos los autores han declarado no tener posibles conflictos de intereses.
Acknowledgments
Los autores desean expresar su agradecimiento a la plataforma de dibujo de investigación científica Figdraw del Hogar de Investigadores por proporcionar el material utilizado para crear la Figura 2 en este artículo, con ID de licencia autorizada: URUUO5699e. Este trabajo ha recibido el apoyo de subvenciones proporcionadas por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (81873380, 82074566), la Fundación de Ciencias Naturales de la Provincia de Hubei (2022CFCO43) y el Proyecto Nacional de Construcción del Estudio del Patrimonio de la Medicina Tradicional China de la Administración Nacional de Medicina Tradicional China ([2022] No.5, [2022] No.75).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 75% alcohol | Shandong Lircon medical technology co., ltd | 2002-0059 | Disinfection |
| acupuncture needles | Beijing Luo ya shan chuan medical equipment co., Ltd. | needling | |
| Adult Sprague-Dawley (SD) rats | Liaoning Changsheng biotechnology co., Ltd. | SCXK 2020-0001 | The recipient subjected to fixation |
| an elevated fixation rack | Taizhou shiai instruments and equipments for scientific and teaching research Co., ltd | / | Fix rats |
| Hans electronic acupuncture apparatus | Beijing Huayun Ante Science and Technology Co. Ltd. | HANS-200A | electroacupuncture |
| Medical cotton ball | Jiangsu Misawa Medical Supplies Co., Ltd. | 20172142357 | Disinfection |
| Pet electric clipper | Fenghua Xikou Lubao Knives & Scissors Electrical Appliance Factory | / | Shave the hair of rats |
| Tweezers | Qingdao Schultz Biotechnology Co., ltd | Pinch cotton balls |
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